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题名联合双基因表达载体的构建及其拟南芥转化
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作者
钟胜
段瑞军
郭建春
胡新文
符少萍
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机构
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
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出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第1期52-54,共3页
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文摘
[目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3)基因以及基因上游启动子的DNA序列:CP-CBF3,共2 075 bp。CP是CBF3基因的启动子,受低温诱导。用EcoRI和BamHI双酶切CP-CBF3并置于植物表达载体pCAMBIA1300中,构建CBF3基因冷诱导表达载体pCA-CP-CBF3。然后将带有组成型启动子的肌醇半乳糖苷酶基因AtG-loS3合并于pCA-CP-CBF3中,构建双基因植物表达载体pCA-CP-CBF3-35S-AtGloS3。用真空抽滤虑法将这两个表达载体转化到拟南芥中,并用潮霉素筛选出转基因植物苗。[结果]CBF3和AtGloS3基因均来自拟南芥,而CBF3不存在内含子,AtGloS3基因存在内含子,故以CB-1、CB-2为引物的非转基因植物中也能得到带,而以AT-1、AT-2为引物的非转基因植物不能得到带。[结论]该研究中pCA-CP-CBF3是1个对照,实验的后续工作需进一步进行。
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关键词
cbf3冷诱导表达载体
cbf3和AtGolS3双基因表达载体
拟南芥转化
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Keywords
cold-induced expression vector cbf3
Double-gene expression vector of cbf3 and AtGolS3
Transformation of Arabidopsis thaliana
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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