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α2-巨球蛋白活性检测方法的建立与优化 被引量:3
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作者 皇甫超济 吕茂民 +3 位作者 马玉媛 王延琳 赵雄 章金刚 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期193-195,共3页
目的建立α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin,α2-M)活性检测方法,检测Cohn组分Ⅳ中α2-M的活性。方法α2-M可与胰蛋白酶相互作用形成"α2-M-胰蛋白酶复合物",利用酶标仪检测出"α2-M-胰蛋白酶复合物"与小分子底物Na-... 目的建立α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin,α2-M)活性检测方法,检测Cohn组分Ⅳ中α2-M的活性。方法α2-M可与胰蛋白酶相互作用形成"α2-M-胰蛋白酶复合物",利用酶标仪检测出"α2-M-胰蛋白酶复合物"与小分子底物Na-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基酰胺盐酸盐(Na-benzoyl-DL-arginine 4-nitroanilide hydrochloride,BAPNA)显色反应后的光密度值(410 nm),根据建立的血浆α2-M活性标准曲线,定量计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2-M的活性。结果通过对实验体系中几个关键实验条件进行优化,建立了血浆α2-M活性标准曲线,并计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2-M活性的平均值为1.578 PU/ml。结论以正常人混合血浆作为参考标准品,用发色底物法检测Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2-M的活性,方法简便易行,为α2-M制备过程中活性测定提供了实验基础。 展开更多
关键词 Α2-巨球蛋白 cohn组分 胰蛋白酶 胰蛋白酶抑制剂 BAPNA
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从Cohn法组份Ⅳ中分离纯化人血浆蛋白C 被引量:2
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作者 王宗奎 林方昭 +2 位作者 肖小璞 谢亦武 李长清 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期355-360,共6页
目的探索建立1种串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法 ,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法 4℃条件下,将Cohn法组份Ⅳ用PBS缓冲液抽提5h,离心(6500g)40min,上清液依次用0.45μm和... 目的探索建立1种串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法 ,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法 4℃条件下,将Cohn法组份Ⅳ用PBS缓冲液抽提5h,离心(6500g)40min,上清液依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤后,超滤透析;再通过串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析,对蛋白C进行纯化。通过SDS-PAGE鉴定蛋白C的纯度;用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;通过WHO指定的发色底物法和凝固法(一期法)测定蛋白C活性。结果纯化的蛋白C在SDS-PAGE图谱上呈现1条62kD左右的蛋白带;经过离子交换层析,蛋白C的活性回收率为(48.19±9.22)%,纯化倍数为(3.75±0.56)倍;固相化金属螯合亲和层析后,蛋白C活性回收率为(59.61±5.59)%,纯化倍数为(36.79±3.72)倍;蛋白C总活性回收率为(28.77±9.45)%,纯化倍数为(136.64±6.82)倍,比活性为(11.70±0.89)IU/mg。结论串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析可以从Cohn法组份Ⅳ中获得比活性较高的蛋白C浓缩物。 展开更多
关键词 cohn法组份 蛋白C 分离 纯化 亲和层析 固相化金属螯合 比活性
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亲和凝胶分离纯化人α1-抗胰蛋白酶的研究 被引量:1
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作者 张学俊 叶生亮 +4 位作者 曹海军 王宗奎 杜晞 谢亦武 李长清 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期560-564,共5页
目的探索通过免疫亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化人α1-抗胰蛋白酶浓缩物的方法。方法 24℃下,将Cohn氏法组份Ⅳ用Tris缓冲液抽提0.5 h后,离心4 750 g×15 min,上清液加入亲水型气相二氧化硅脱脂后,离心6 000 g×15 min,再用1.... 目的探索通过免疫亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化人α1-抗胰蛋白酶浓缩物的方法。方法 24℃下,将Cohn氏法组份Ⅳ用Tris缓冲液抽提0.5 h后,离心4 750 g×15 min,上清液加入亲水型气相二氧化硅脱脂后,离心6 000 g×15 min,再用1.2μm的滤膜过滤;通过GE公司新型的Alpha-1 Antitrypsin Select免疫亲和凝胶层析柱,对α1-抗胰蛋白酶进行纯化。用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;用SDS-PAGE鉴定α1-抗胰蛋白酶的纯度,并用Western Blot和串联质谱分析鉴定纯化的蛋白;通过发色底物法测定α1-抗胰蛋白酶活性。结果纯化的α1-抗胰蛋白酶在非还原性SDS-PAGE图谱上呈现1条54 kD左右的蛋白带和1条约140 kD的多聚体蛋白带,经过还原性SDS-PAGE多聚体条带解聚,Western Blot也可以反应相关变化;在经过前处理和亲和层析后,α1-抗胰蛋白酶活性回收率为(60.35±1.39)%,α1-抗胰蛋白酶总活性回收率为(41.88±6.98)%,纯化倍数为(71.68±1.32)倍,比活性大约(1.00~1.05)PU/mg。结论 GE公司Alpha-1 Antitrypsin Select免疫亲和层析亲和层析可以从Cohn氏法组份Ⅳ中特异性捕获α1-抗胰蛋白酶浓缩物。 展开更多
关键词 cohn组份 Α1-抗胰蛋白酶 分离 纯化 免疫亲和凝胶
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人α1抗胰蛋白酶的分离纯化及其对C-BSA型大鼠肾炎模型的影响
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作者 孙兆健 蒋伟 +2 位作者 张英 田建明 王妍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第11期1247-1252,共6页
目的分离纯化α1抗胰蛋白酶(alpha 1-antitrypsin,AAT),并评价其对C-BSA型大鼠肾炎模型的影响。方法以Cohn组分Ⅳ(Cohn frcationⅣ,FⅣ)为原料,采用Q Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和S-200凝胶过滤柱层析纯化AAT,底物显色法检测其... 目的分离纯化α1抗胰蛋白酶(alpha 1-antitrypsin,AAT),并评价其对C-BSA型大鼠肾炎模型的影响。方法以Cohn组分Ⅳ(Cohn frcationⅣ,FⅣ)为原料,采用Q Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和S-200凝胶过滤柱层析纯化AAT,底物显色法检测其生物学活性。建立阳离子化小牛血清蛋白型大鼠肾炎模型,分别注射5.75和11.5 mg/kg的AAT,同时设正常组(未建模),隔日经大鼠腹腔注射给药1次,连续注射4周,模型组和正常组注射等体积的PBS。检测各组大鼠的尿常规及24 h尿液总蛋白量,并对肾脏组织进行病理学检查,同时检测肾脏中IgG沉积及AAT、Desmin、Nephrin、Podocin的表达情况。结果纯化的AAT纯度为96%,浓度为11.85 mg/mL,活性回收率为47.67%,比活为5.37。与模型组比较,高剂量AAT组大鼠24 h尿蛋白量明显降低(P<0.05),尿常规部分指标有所改善,肾小球体积增大程度有所减轻;高、低剂量AAT组大鼠肾小球IgG沉积均略减少(P>0.05),肾小球与肾小管AAT阳性表达量明显增加(P<0.001),肾小球Desmin蛋白有减轻趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);高剂量AAT组大鼠肾小球Nephrin及Podocin蛋白均明显增多(P<0.05),低剂量AAT组略有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论本纯化工艺可获得纯度较高的AAT,其对大鼠肾炎具有一定提高疗效的作用。 展开更多
关键词 Α1抗胰蛋白酶 cohn组分 分离纯化 大鼠 肾炎
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人血浆Cohn法组分Ⅳ沉淀的综合利用研究 被引量:1
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作者 梁凌宇 郭玉婷 +7 位作者 付艳丽 孔涛 马亚茹 杨军 李刚 陈俏丽 曹扬 蒋琳 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第4期44-48,共5页
目的采用全层析工艺从废弃的Cohn法组分Ⅳ沉淀(Cohn fraction Ⅳ precipitate, Cohn F Ⅳ)中提取抗凝血酶Ⅲ(antithrombin Ⅲ, AT Ⅲ)、α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)和人血白蛋白进行综合利用。方法将Cohn F Ⅳ溶解并澄清处... 目的采用全层析工艺从废弃的Cohn法组分Ⅳ沉淀(Cohn fraction Ⅳ precipitate, Cohn F Ⅳ)中提取抗凝血酶Ⅲ(antithrombin Ⅲ, AT Ⅲ)、α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)和人血白蛋白进行综合利用。方法将Cohn F Ⅳ溶解并澄清处理后进行SD法病毒灭活,得到上柱前料液,再依次采用阴离子交换层析、肝素亲和层析+α1-AT Select串联亲和层析、疏水层析以及分子筛层析后分别得到AT Ⅲ和α1-AT的纯品以及主要含有人血白蛋白的组分。对AT Ⅲ和α1-AT分别进行纯度、活性以及肝素亲和力等方面的检测,并评价其质量属性。结果采用此方法获得的AT Ⅲ纯度可达99%以上,比活达10 IU/mg以上,肝素亲和力达80%以上;α1-AT纯度同样可达99%以上,比活达1.5 PU/mg以上。结论本研究所述方法可成功将Cohn F Ⅳ中的AT Ⅲ、α1-AT以及人血白蛋白等几种目前最具备提取利用价值的蛋白进行有效的分离,在人血浆综合利用方面具有较高的利用价值。 展开更多
关键词 人血浆 cohn法组分沉淀 抗凝血酶 Α1-抗胰蛋白酶
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离子交换层析分离纯化人结合珠蛋白的研究
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作者 闫晶晶 赵雄 +3 位作者 马玉媛 马小伟 吕茂民 章金刚 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期569-572,592,共5页
目的探索应用离子交换层析从Cohn组分Ⅳ分离纯化人结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)的方法,并对纯化产物进行初步鉴定及活性分析。方法 Cohn组分Ⅳ溶解液稀释后经利凡诺络合,收集上清并用50%硫酸铵进行沉淀,沉淀重溶后用Q Sepharose Fast Flo... 目的探索应用离子交换层析从Cohn组分Ⅳ分离纯化人结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)的方法,并对纯化产物进行初步鉴定及活性分析。方法 Cohn组分Ⅳ溶解液稀释后经利凡诺络合,收集上清并用50%硫酸铵进行沉淀,沉淀重溶后用Q Sepharose Fast Flow层析分离纯化得到目的蛋白。然后利用SDS-PAGE及免疫印迹对目的蛋白进行鉴定,并利用Native-PAGE方法测定纯化产物的活性。结果 Cohn组分Ⅳ经过利凡诺络合及盐析处理后能有效去除部分杂蛋白,并使目的蛋白富集。利用离子交换层析方法从Cohn组分Ⅳ中纯化得到的主要产物为Hp2-2,SDS-PAGE显示Hp纯度较好,免疫印迹分析进一步证明,利用该法成功分离得到目的蛋白Hp,且利用NativePAGE方法测得目的蛋白活性为2.8 U/ml。结论利用该法从Cohn组分Ⅳ中成功分离得到人Hp,方法简单,易于放大生产,具有较好应用前景。 展开更多
关键词 结合珠蛋白 cohn组分 纯化 鉴定
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