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金黄色葡萄球菌Cna基因的生物信息学分析及原核表达
1
作者 黄怡婕 褚诗钒 +16 位作者 陈智豪 许毅 叶锦津 傅子玲 黄悦 金枫影 陈焰焰 冯丹羽 陈其冠 李晨蕙 刘晓罡 姚俊杰 陈淑倩 计敏 李佳佳 何文迪 陈新江 《生物技术》 CAS 2020年第4期335-340,317,共7页
[目的]对金黄色葡萄球菌的Cna基因进行生物信息学分析,并进行克隆和原核表达,为金黄色葡萄球菌重组疫苗的研发提供参考数据。[方法]使用Protparam、PSORT、Signal P-5.0、TMpred、Net Phos 3.1 Server、PSIPRED、SWISSMODEL等在线生物... [目的]对金黄色葡萄球菌的Cna基因进行生物信息学分析,并进行克隆和原核表达,为金黄色葡萄球菌重组疫苗的研发提供参考数据。[方法]使用Protparam、PSORT、Signal P-5.0、TMpred、Net Phos 3.1 Server、PSIPRED、SWISSMODEL等在线生物信息软件,分析Cna蛋白的理化性质、亚细胞定位、跨膜区域、磷酸化修饰位点、二级结构和三维结构。以基因组DNA为模板扩增Cna基因编码N1-N2子域的片段,扩增产物经酶切回收后与载体pET-32a(+)相连接,构建重组表达质粒,将该重组质粒转化E.coli TG1,经菌落PCR、测序鉴定后,增菌培养并抽提质粒,再转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析。[结果]Cna蛋白由1 183个氨基酸残基组成,相对分子质量为133 006.82 Da,等电点为5.89,负电荷氨基酸残基数为180个,正电荷氨基酸残基数为167个,分子式:C5863H9241-N1569O1936S10,原子总数18 619个,是一种稳定的亲水蛋白质,定位于细胞膜上,第4~23、1 158~1 177位氨基酸残基分别形成一个典型的跨膜区,具有148个潜在的磷酸化修饰位点,二级结构中无规则卷曲和β折叠占较大比例,三维结构与二级结构预测结果相符。成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-Cna,经IPTG诱导后重组蛋白(N1-N2子域)获得了表达,重组蛋白相对分子质量为52.1 kDa。[结论]Cna基因的生物信息学分析及该基因的成功表达,为研究Cna蛋白在免疫保护中的作用奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 cna基因 生物信息学 原核表达 cna蛋白
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草菇钙调磷酸酶催化亚基(Vv-CNA)的序列与表达 被引量：1
2
作者 汪健芳 徐志周 +4 位作者 严俊杰 李肖 张磊 黄李琳 谢宝贵 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期381-385,共5页
【目的】分析草菇钙调磷酸酶催化亚基(Vv-CNA)的序列与表达,为进一步探究草菇生长发育及子实体开伞分子调控机理提供参考。【方法】通过生物信息学分析确定Vv-CNA基因的组成及保守结构,将ORF Finder预测的草菇CNA氨基酸序列与从NCBI下... 【目的】分析草菇钙调磷酸酶催化亚基(Vv-CNA)的序列与表达,为进一步探究草菇生长发育及子实体开伞分子调控机理提供参考。【方法】通过生物信息学分析确定Vv-CNA基因的组成及保守结构,将ORF Finder预测的草菇CNA氨基酸序列与从NCBI下载的其他真菌CNA氨基酸序列进行比对,并通过荧光定量PCR检测Vv-CNA基因在草菇不同生长时期的相对表达量。【结果】Vv-CNA基因编码区为2503 bp,包含10个内含子(其中I2、I8、I9和I10存在内含子保留现象),编码610个氨基酸,Gen Bank登录号KX463514。将Vv-CNA氨基酸序列与动物(人、小鼠)、植物(拟南芥、水稻)和真菌(曲霉、酵母等)的CNA氨基酸序列进行同源比对分析,结果发现Vv-CNA蛋白有3个最保守的结构域,与密褐褶菌(Gloeophyllum trabeum)的亲缘关系最近。Vv-CNA基因在草菇子实体的蛋形期和伸长期高表达,以蛋形期的相对表达量最高。【结论】Vv-CNA基因编码钙调磷酸酶催化亚基,其高表达有利于草菇菌柄的伸长。 展开更多
关键词 草菇 钙调磷酸酶催化亚基(cna) 基因结构 表达分析 菌柄伸长
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CACNA2D1基因第14内含子的多态性及其对猪肌肉pH_(45)的影响
3
作者 李建华 吕帮玉 杨明生 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第20期9391-9392,9424,共3页
[目的]检测猪CACNA2D1基因第14内含子的多态性,为猪肉质性状的分子标记辅助选择提供条件。[方法]采用PCR-SSCP检测猪CACNA2D1基因第14外显子和内含子在6个猪群中的DNA多态性,并分析不同基因型对猪眼肌和腿臀肌肉pH45的遗传效应。[结果]... [目的]检测猪CACNA2D1基因第14内含子的多态性,为猪肉质性状的分子标记辅助选择提供条件。[方法]采用PCR-SSCP检测猪CACNA2D1基因第14外显子和内含子在6个猪群中的DNA多态性,并分析不同基因型对猪眼肌和腿臀肌肉pH45的遗传效应。[结果]猪CACNA2D1基因第14内含子有3种基因型,即AA、AG和GG,在其序列(GenBank接受号:FJ156361)的1 145位碱基存在1个多态位点(G→A)。2χ独立性检验结果表明,这3种基因型在各猪群间的分布差异显著(P<0.05)。AA基因型金华×皮特兰F2资源家系猪与AG基因型猪在眼肌和腿臀肌肉pH45值上的差异显著(P<0.05)。[结论]猪CACNA2D1基因第14内含子的多态性影响猪眼肌和腿臀肌pH45值。 展开更多
关键词 猪 CAcna2D1基因 PCRSSCP pH45
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