启动子序列克隆和功能分析方法的研究进展 被引量：18

1

作者 杨晓娜 赵昶灵 +3 位作者 李云 李会容 苏丽 周燕琼 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期283-290,共8页

综述了启动子序列克隆和功能研究方法的研究进展。启动子克隆的主要方法有基因组文库筛选法、探针载体筛选法、常规PCR法、反向PCR法、锅柄PCR法、序列特异性引物PCR法、热不对称交错PCR法和Y型接头扩增法。其中,热不对称交错PCR法因操... 综述了启动子序列克隆和功能研究方法的研究进展。启动子克隆的主要方法有基因组文库筛选法、探针载体筛选法、常规PCR法、反向PCR法、锅柄PCR法、序列特异性引物PCR法、热不对称交错PCR法和Y型接头扩增法。其中,热不对称交错PCR法因操作简便、特异性较高而最有效。启动子功能分析方法有生物信息学分析法和实验分析法,前者主要依托数据库初步预测启动子序列;后者确定启动子的顺式元件及其功能,具体策略有点突变分析、凝胶阻滞分析、瞬间表达分析、转化分析和酵母单杂交分析。可为启动子功能的研究提供参考。 展开更多

关键词 启动子 序列克隆 功能分析 方法

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植物基因克隆的方法和策略 被引量：2

2

作者 沈法富 尹承佾 《大自然探索》 1997年第1期42-47,共6页

现代分子生物学的迅速发展对克隆植物基因起了积极的推动作用。

关键词 植物 基因克隆 研究进展

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植物抗病基因结构和功能研究进展 被引量：6

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作者 田远飞 薛永来 +2 位作者 付为国 戴志聪 杜道林 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第22期155-159,共5页

植物抗病基因(R基因)在植物的病害防御过程中起着重要的作用,近年来,随着植物功能基因组学的发展,运用分子生物学的相关技术手段已经从植物中克隆得到大量的抗病基因,这些基因的克隆、鉴定、结构和功能分析对于深入研究植物和病原物之... 植物抗病基因(R基因)在植物的病害防御过程中起着重要的作用,近年来,随着植物功能基因组学的发展,运用分子生物学的相关技术手段已经从植物中克隆得到大量的抗病基因,这些基因的克隆、鉴定、结构和功能分析对于深入研究植物和病原物之间的互作机制十分有意义。分别从克隆方法、种类结构、作用机制及进化等方面总结了抗病基因的研究现状,并探讨其未来的发展前景。 展开更多

关键词 抗病基因 功能基因组学 克隆方法 作用机制 抗病基因进化

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韧皮部特异性启动子研究概况 被引量：6

4

作者 于文静 王玉富 +2 位作者 邱财生 郝冬梅 薛召东 《中国麻业科学》 2010年第2期116-122,共7页

启动子是基因表达调控的一个重要顺式元件,也是基因工程中表达载体的一个重要组成部分。启动子的克隆对于构建基因工程载体,表达目的蛋白有着很重要的意义。韧皮部特异启动子分离对于鉴定研究和调控亚麻纤维中的木质素合成有很重要的意... 启动子是基因表达调控的一个重要顺式元件,也是基因工程中表达载体的一个重要组成部分。启动子的克隆对于构建基因工程载体,表达目的蛋白有着很重要的意义。韧皮部特异启动子分离对于鉴定研究和调控亚麻纤维中的木质素合成有很重要的意义。本文简单的介绍了有关启动子的结构和分类,对几种常用的克隆启动子的方法及目前克隆分离到得植物韧皮部特异启动子做了介绍。 展开更多

关键词 启动子 克隆方法 韧皮部特异性

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种子特异性启动子的研究进展 被引量：5

5

作者 李吉涛 郭建春 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第4期1382-1385,共4页

启动子是基因表达的重要顺式调控元件。对植物基因启动子的核心结构与功能、种子特异性启动子的结构特点、植物基因启动子克隆的方法、已经克隆的种子特异启动子及存在的问题进行了综述,并对该领域的发展趋势进行了展望。

关键词 种子特异性启动子 结构 克隆方法

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植物细胞色素P450基因的克隆策略及鉴定方法 被引量：5

6

作者 张松焕 李明泽 +1 位作者 张军 李春奇 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第11期4911-4914,共4页

细胞色素P450是动植物及微生物体内一类重要的具有混合功能的血红素氧化还原酶,它参与多种生化反应,植物P450参与许多植物体次生代谢物质的合成和外源物质代谢解毒,在防御生物免受病虫害及逆境胁迫等方面具有重要作用。综述了植物细胞色... 细胞色素P450是动植物及微生物体内一类重要的具有混合功能的血红素氧化还原酶,它参与多种生化反应,植物P450参与许多植物体次生代谢物质的合成和外源物质代谢解毒,在防御生物免受病虫害及逆境胁迫等方面具有重要作用。综述了植物细胞色素P450基因的克隆策略及鉴定方法,并对其未来研究作了展望。 展开更多

关键词 细胞色素P450 克隆策略 鉴定方法

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湖北地区汉族人群肿瘤坏死因子微卫星多态性研究 被引量：2

7

作者 费保莹 邓长生 夏冰 《中华医学遗传学杂志》 EI CAS CSCD 2001年第6期467-471,共5页

目的　探讨中国湖北地区汉族人群肿瘤坏死因子 (tumor necrosis factor,TNF)微卫星遗传多态性分布。方法　收集湖北地区 16 4名无血缘关系健康个体的静脉血 ,提取 DNA,应用 PCR结合变性聚丙烯酰胺凝胶高压电泳和 Ag NO3 染色 ,对 TNF微... 目的　探讨中国湖北地区汉族人群肿瘤坏死因子 (tumor necrosis factor,TNF)微卫星遗传多态性分布。方法　收集湖北地区 16 4名无血缘关系健康个体的静脉血 ,提取 DNA,应用 PCR结合变性聚丙烯酰胺凝胶高压电泳和 Ag NO3 染色 ,对 TNF微卫星进行分型 ,并将 PCR产物克隆及测序鉴定。结果　TNFa检测到 13个等位基因 ,40种基因型 ;TNFc检测到 2个等位基因 ,3种基因型。 TNFa和 TNFc位点多态信息含量分别为 0 .80和 0 .2 8,两者基因型分布皆符合 Hardy- Weinberg平衡定律。统计分析显示 ,中国汉族人 TNFa等位基因频率分布与欧洲白种人、日本人比较 ,差异具有显著性 (P<0 .0 1)。测序发现相同TNFa等位基因包含的 (AC)重复序列拷贝数与国外文献报道不一致。结论　 TNFa等位基因频率分布具有种族的差异性 ,其等位基因定义内容尚需进一步确定。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 遗传多态性 聚合酶链反应 TNF基因

原文传递

前列腺素D合酶基因在卵巢癌组织中的表达

8

作者 苏兵 关明 +3 位作者 赵瑞皎 朱腾方 李文才 吕元 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第1期22-25,共4页

目的　研究Lipocalin型前列腺素D合酶的基因在卵巢癌中的表达及其意义。 方法　用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法和原位杂交技术对 5 4例卵巢癌组织中的L PGDS基因进行检测。结果　从卵巢癌组织中克隆的L PGDS的cDNA ,经测序证明与基... 目的　研究Lipocalin型前列腺素D合酶的基因在卵巢癌中的表达及其意义。 方法　用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法和原位杂交技术对 5 4例卵巢癌组织中的L PGDS基因进行检测。结果　从卵巢癌组织中克隆的L PGDS的cDNA ,经测序证明与基因库所报道的L PGDS的基因序列完全一致。 5 4例卵巢组织标本中 ,肿瘤细胞均有不同程度L PGDS基因mRNA表达 ,经统计学分析 ,不同型别间表达差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论　卵巢癌中存在L PGDS的mRNA表达 ,且与卵巢癌分型和分级有关 ,L PGDS的表达差异预示其在卵巢癌发生。 展开更多

关键词 前列腺素D合酶 基因克隆 卵巢肿瘤 基因表达

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基因克隆常用的方法及其在甜菜上的应用

9

作者 吴则东 王华忠 《中国糖料》 2011年第2期59-62,共4页

介绍了植物不同的基因克隆方法,并对基因克隆在甜菜上的应用及未来展望作概述。

关键词 甜菜 基因克隆 方法 应用

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茄子反转录转座子基因片段克隆中的2种DNA回收方法的效果比较

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作者 赵海艳 孙清鹏 +1 位作者 秦勇 赵福宽 《北京农学院学报》 2006年第3期5-8,共4页

根据已报道的反转录转座子的序列设计合成一对引物,以西安绿茄基因组DNA为模板,采用PCR扩增的方法扩出一条DNA特异片段并克隆到pMD18-T载体中。采用一种新建立的在可见光下参照位置标记方法回收目的DNA片段,并与常规的在紫外光下回收的... 根据已报道的反转录转座子的序列设计合成一对引物,以西安绿茄基因组DNA为模板,采用PCR扩增的方法扩出一条DNA特异片段并克隆到pMD18-T载体中。采用一种新建立的在可见光下参照位置标记方法回收目的DNA片段,并与常规的在紫外光下回收的目的DNA片段进行了克隆效果比较。结果表明,在紫外光下回收的茄子反转录转座子基因片段易出现目的DNA片段断裂,而在可见光下参照位置标记回收DNA的方法能保证目的DNA片段的完整性。 展开更多

关键词 茄子 反转录转座子 克隆 回收方法

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同源重组介导的克隆策略研究进展 被引量：2

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作者 戴倩 田云 卢向阳 《农产品加工（下）》 2011年第6期7-9,13,共4页

随着基因功能的深入研究,构建表达载体是研究各基因的功能及其相互关系的第一步。近年来涌现的多种同源重组介导的高效克隆策略极大地方便了载体的构建。简要综述了同源重组介导的克隆方法的研究进展,及其在载体构建中的应用。

关键词 载体构建 同源重组 连接酶非依赖型克隆 无限制酶系统

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西方蜜蜂(Apis mellifera L．)sRNA的富集与文库检测 被引量：2

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作者 陈璇 俞晓敏 +2 位作者 郑火青 蔡亦梅 胡福良 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期2943-2948,共6页

【目的】提取及扩增蜜蜂(Apis mellifera L)sRNA,并构建文库检测富集结果是否满足高通量测序研究要求。【方法】取蜜蜂3个级型不同发育阶段个体作为材料,分别提取总RNA后混合,从中分离出15～40nt的sRNA,反转成cDNA后构建文库,进行蓝白... 【目的】提取及扩增蜜蜂(Apis mellifera L)sRNA,并构建文库检测富集结果是否满足高通量测序研究要求。【方法】取蜜蜂3个级型不同发育阶段个体作为材料,分别提取总RNA后混合,从中分离出15～40nt的sRNA,反转成cDNA后构建文库,进行蓝白斑筛选。挑选288个单克隆进行测序,对测序结果进行分析。【结果】有效序列为214条,插入的cDNA片段大小范围为15～39bp。其中,sme-miR-71c miRNA65条,ncRNA(包括tm-RNA、intron_ghI、5.8s rRNA)5条,tRNA28条,siRNA及其他sRNA33条,CDS1条,未知序列82条。【结论】本实验采用的方法能有效富集蜜蜂sRNA,能够满足高通量测序从中识别出蜜蜂miRNA的研究。 展开更多

关键词 西方蜜蜂(Apis MELLIFERA L.) sRNA富集 miRNA文库 直接克隆法 高通量测序

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HCV 定量 RT-PCR 竞争性参比标准的构建

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作者 吕凌 王斌 《中山医科大学学报》 CSCD 1997年第2期151-153,共3页

将克隆的ＨＣＶ５’ＮＣＲ序列反向插入ｐＳＰ７２的ＥｃｏＲＶ切点，构建一种能转录ＨＣＶ－ＲＮＡ的质粒ｐＳｎｃ－２。以ＲＴ－ＰＣＲ从抗ＨＥＶＩｇＭ阳性病人血浆中扩增一段２３８ｂｐ的ＨＣＶ－ｃＤＮＡ，反向插入ｐＳｎｃ－２中... 将克隆的ＨＣＶ５’ＮＣＲ序列反向插入ｐＳＰ７２的ＥｃｏＲＶ切点，构建一种能转录ＨＣＶ－ＲＮＡ的质粒ｐＳｎｃ－２。以ＲＴ－ＰＣＲ从抗ＨＥＶＩｇＭ阳性病人血浆中扩增一段２３８ｂｐ的ＨＣＶ－ｃＤＮＡ，反向插入ｐＳｎｃ－２中克隆的５’ＮＣＲ序列的ＮｃｏⅠ切点，构建插入突变型ＨＣＶ－ｃＤＮＡ重组体ｐＳｎｃ－ｅ。应用限制性酶切和ＰＣＲ对这两种重组质粒进行了鉴定，为ＨＣＶ－ＲＮＡ的定量ＰＣＲ提供有用的内参照模板。 展开更多

关键词 克隆 分子 聚合酶链反应 遗传学 丙型肝炎病毒

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靶向shRNA表达载体构建方式的比较研究

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作者 王祎琴 张文露 +1 位作者 张秉强 洪苏玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第1期105-107,共3页

目的:探讨两种构建shRNA表达载体方法的不同,寻找更加稳定方便的靶向shRNA表达载体的构建方式。方法:比较构建shRNA表达载体传统方法双链退火法和新方法双链PCR法的设计原则、构建方法和鉴定结果的不同。结果:两种方法均能得到重组质粒... 目的:探讨两种构建shRNA表达载体方法的不同,寻找更加稳定方便的靶向shRNA表达载体的构建方式。方法:比较构建shRNA表达载体传统方法双链退火法和新方法双链PCR法的设计原则、构建方法和鉴定结果的不同。结果:两种方法均能得到重组质粒,但是双链PCR法构建效率高且不易引起碱基的缺失和突变。结论:双链PCR法构建shRNA表达载体比传统双链退火法更加稳定,构建成功率较双链退火法高。 展开更多

关键词 RNA干扰 克隆载体 方法

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