鸡、鹅肌肉生成抑制因子基因的克隆及序列分析 被引量：14

1

作者 马现永 施振旦 +2 位作者 曹永长 毕英佐 马静云 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期85-88,共4页

采用反转录 聚合酶链反应(RT PCR)技术,从鸡胚、鹅胚中扩增得到肌肉生成抑制因子基因,分别克隆到pGEM TEasy载体中进行序列测定.结果表明,克隆得到的MSTN基因序列均由1128个核苷酸组成,MSTN基因序列同源性为94 6%,推导相应氨基酸序列的... 采用反转录 聚合酶链反应(RT PCR)技术,从鸡胚、鹅胚中扩增得到肌肉生成抑制因子基因,分别克隆到pGEM TEasy载体中进行序列测定.结果表明,克隆得到的MSTN基因序列均由1128个核苷酸组成,MSTN基因序列同源性为94 6%,推导相应氨基酸序列的同源性达97 9%. 展开更多

关键词 鸡 鹅 肌肉生成抑制因子 基因克隆 序列分析 RT-PCR

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绵羊肺腺瘤病毒NM株前病毒基因组的克隆与全序列分析 被引量：15

2

作者 刘淑英 马学恩 +1 位作者 齐景伟 王宇 《中国病毒学》 CSCD 2006年第5期443-448,共6页

本研究参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒的基因组全序列,设计合成8对引物,从内蒙古某羊场自然感染绵羊肺腺瘤病的病肺肿瘤组织中提取总DNA为模板,对JSRV-NM株基因组分8段进行PCR扩增,产物分别为8个(531bp,888bp,949bp,944bp,1428bp,... 本研究参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒的基因组全序列,设计合成8对引物,从内蒙古某羊场自然感染绵羊肺腺瘤病的病肺肿瘤组织中提取总DNA为模板,对JSRV-NM株基因组分8段进行PCR扩增,产物分别为8个(531bp,888bp,949bp,944bp,1428bp,947bp,1836bp,538bp)基因片段,将其分别克隆入pMD-18T载体中进行双向测序并拼接序列,获得完整的JSRV-NM株前病毒基因组全序列。结果表明,JSRV-NM株前病毒基因组全长7430bp,有相互重叠的4个较长的开放阅读框(ORF),分别代表gag、pro、pol和env基因。与绵羊肺腺瘤病毒Ⅰ型即南非代表株(NC-001494)和绵羊肺腺瘤病毒Ⅱ型即美国代表株(AF105220)的核苷酸同源性比较分别为90.4%和90%,推导出的氨基酸同源性分别为90%和89.1%。分析JSRV-NM株基因组结构,发现在LTR的上游和下游都具有外源性exJSRV特有的ScaⅠ酶切位点,在gag基因编码的NC区发现有2个较典型的“胱氨酸—组氨酸序列”,可形成锌指结构。在env基因编码的TM区有特异性的“YXXM”基序。用地高辛标记外源性exJSRV特异的JSRV-2片段制成探针,原位杂交法检测自然感染绵羊肺腺瘤病(OPA)的病肺组织中JSRV-NM的RNA及前病毒DNA,结果表明OPA患羊肺肿瘤细胞的胞浆和核内都有JSRV-2基因mRNA的表达,说明JSRV-NM株是具有致瘤作用的外源性反转录病毒。这是我国首次报道的绵羊肺腺瘤病毒的基因组全序列。 展开更多

关键词 绵羊肺腺瘤病毒 全基因组 克隆 序列分析

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牦牛生长激素释放激素基因的克隆及序列分析 被引量：10

3

作者 欧江涛 钟金城 +2 位作者 赵益新 陈智华 熊永 《四川畜牧兽医》 2003年第5期27-27,30,共2页

本文对牦牛GHRH基因进行PCR产物T-A克隆测序。通过GenBank中的Blastn分析表明:牦牛GHRH基因与普通牛同源性为98%,与猪同源性为89%。在所测序列中共有7个变异位点,变异率为1.6%,其核酸变异类型包括转换、颠换和插入,以转换最为常见。

关键词 牦牛 生长激素释放激素基因 基因克隆 序列分析

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人脑胶质瘤低氧诱导因子-1α的基因表达 被引量：8

4

作者 于如同 孙兵 +5 位作者 赵惠仁 姜曙 高立达 倪鸣山 贺民 毛伯镛 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期325-326,共2页

目的　从人脑胶质瘤中克隆低氧诱导因子 1α(HIF 1α)cDNA ,探讨其对人脑胶质瘤发生、发展的作用。方法　从人脑胶质瘤组织中提取总RNA ,以逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)方法扩增出全长 2 481bp的HIF 1αcDNA ,经NheⅠ和BamHⅠ双酶切... 目的　从人脑胶质瘤中克隆低氧诱导因子 1α(HIF 1α)cDNA ,探讨其对人脑胶质瘤发生、发展的作用。方法　从人脑胶质瘤组织中提取总RNA ,以逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)方法扩增出全长 2 481bp的HIF 1αcDNA ,经NheⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,将其与表达载体pWAV1连接 ,转化入E .coliJM 10 9,建立HIF 1α的cDNA克隆 ;测序后与大鼠HIF 1αcDNA序列进行同源性分析。结果　RT PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳 ,可见一清晰特异扩增带 ,长 2 .5kb ,HIF 1αcDNA经筛选、双酶切鉴定后 ,可见 5 .3kb的载体片段及 2 .5kb的插入片段。进行序列分析 ,与鼠有 90 %的同源性。结论　HIF 1α已成功从人脑胶质瘤中得到克隆和序列分析。 展开更多

关键词 低氧诱导因子-1Α 神经胶质瘤 CDNA克隆 序列分析 脑瘤

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牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：8

5

作者 金春梅 许应天 +2 位作者 张守发 鲁承 于龙政 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期112-114,119,共4页

为分析吉林省流行的牛瑟氏泰勒虫基因序列,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列设计合成一对引物,用PCR方法扩增出牛瑟氏泰勒虫的基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,将经EcoRⅠ酶切鉴定和PCR鉴定... 为分析吉林省流行的牛瑟氏泰勒虫基因序列,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列设计合成一对引物,用PCR方法扩增出牛瑟氏泰勒虫的基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,将经EcoRⅠ酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序。结果表明克隆的基因片段长度为868bp,编码283个氨基酸,有2个潜在的糖基化位点。核苷酸同源性分析表明,该基因片段与韩国株(AF521557)、日本株(AB016280)、俄罗斯株(AB016279)的核苷酸序列同源性分别为99.4%、88.0%、88.1%。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P33表面蛋白 克隆 序列分析

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五例样本HLA-C基因测序分型中等位基因丢失及其原因分析 被引量：8

6

作者 曾健强 徐筠娉 +3 位作者 王大明 邹红岩 邓志辉 杨宝成 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期562-566,共5页

目的探讨HLA-C基因测序分型时等位基因漏检和丢失的原因，以提高HLA测序分型的成功率和准确性。方法620份随机选择的深圳健康捐血者血样，采用AlleleSEQRHLA—Cplus测序分型试剂盒进行检测，对无完全匹配、分型结果“异常”的标本，采... 目的探讨HLA-C基因测序分型时等位基因漏检和丢失的原因，以提高HLA测序分型的成功率和准确性。方法620份随机选择的深圳健康捐血者血样，采用AlleleSEQRHLA—Cplus测序分型试剂盒进行检测，对无完全匹配、分型结果“异常”的标本，采用分子克隆和测序方法进行全长单倍体序列分析；对未检出新的碱基点突变的样本，进一步采用自行设计的PCR引物和AlleleSEQR试剂盒中的测序引物进行再测序，分析测序分型结果“异常”的原因。结果620份经AlleleSEQRHLA—C测序分型的样本中，发现5例样本无完全匹配的基因型，与之最接近的多种等位基因型均存在单个碱基的不匹配；并且在第4外显子出现碱基杂合，但第2和第3外显子区域内无杂合碱基。经分子克隆和单倍体测序，以及采用自行设计的PCR引物和AlleleSEQR试剂盒中的测序引物再测序，证实了5例标本均存在Cw＊0706等位基因漏检和丢失现象，未发现新的碱基点突变。结论HLA-C基因测序分型时，因PcR引物与模板DNA不匹配会导致等位基因的漏检和丢失。根据中国人群HLAC分子全长序列特点，开发适合于中国人群的测序分型试剂十分必要。 展开更多

关键词 人类白细胞抗原 HLA-C基因 测序分型 克隆 测序分析 等位基因丢失

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欧鳗源嗜水气单胞菌β-溶血素基因序列分析 被引量：5

7

作者 龚晖 林天龙 +3 位作者 杨金先 刘晓东 陈红燕 许斌福 《福建农业学报》 CAS 2003年第1期29-33,共5页

对克隆的欧鳗源嗜水气单胞菌β-溶血素基因AHL316HEM进行序列和结构分析表明,AHL316HEM基因读码框架全长为1 482 bp,编码长度为493个氨基酸的蛋白,分子量为54.2 kD,等电点为5.625,读码框架内有一个EcoRI酶切位点。AHL316HEM从起始位点至... 对克隆的欧鳗源嗜水气单胞菌β-溶血素基因AHL316HEM进行序列和结构分析表明,AHL316HEM基因读码框架全长为1 482 bp,编码长度为493个氨基酸的蛋白,分子量为54.2 kD,等电点为5.625,读码框架内有一个EcoRI酶切位点。AHL316HEM从起始位点至第23个氨基酸残基形成一明显疏水区,可能构成信号肽,其抗原位点大部分都在亲水区,不具穿膜性。同源性分析表明,AHL316HEM基因编码的氨基酸序列与已报道的嗜水气单胞菌溶血素基因(accession No.BAA83088)的同源率为98％,与斑点气单胞菌溶血素基因(accessionNo.U40711)、温和气单胞菌溶血素基因(accession No.AF443393)的同源率分别为84％和72％,与霍乱弧菌溶血素基因(accession No.AF540655)、副溶血弧菌溶血素基因(accession No.VIBTRH2A)、金黄葡萄球菌β-溶血素基因(accession No.S72497)的同源性分别为7％、5％和4％。这一结果提示,气单胞菌属内各菌种的溶血素基因可能有共同的起源。 展开更多

关键词 欧鳗 嗜水气单胞菌 β—溶血素 基因序列 基因克隆

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云南野生稻抗稻瘟病Pi-ta基因的检测及分析 被引量：6

8

作者 赵国珍 蒋春苗 +3 位作者 刘吉新 陈于敏 余腾琼 程在全 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期675-680,共6页

以16个不同来源的云南野生稻作为供试材料,用抗稻瘟病Pi-ta基因特异引物(KG2/KG4)进行PCR扩增,并对PCR产物进行克隆、测序及分析。结果表明,16个野生稻中7个品种持有抗稻瘟病Pi-ta基因,其中,来自云南景洪的紫秆普通野生稻中Pi-ta基因的... 以16个不同来源的云南野生稻作为供试材料,用抗稻瘟病Pi-ta基因特异引物(KG2/KG4)进行PCR扩增,并对PCR产物进行克隆、测序及分析。结果表明,16个野生稻中7个品种持有抗稻瘟病Pi-ta基因,其中,来自云南景洪的紫秆普通野生稻中Pi-ta基因的编码区与原始型的抗稻瘟病Pi-ta基因的DNA序列完全相同。可见,云南可能是抗稻瘟病基因Pi-ta的起源地之一。 展开更多

关键词 野生稻 抗稻瘟病Pi-ta基因 克隆 测序分析

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人β-NGF基因的体外扩增、克隆及其序列的分析 被引量：4

9

作者 韩晓枫 张澜生 朱寿彭 《苏州医学院学报》 1999年第12期1271-1273,共3页

目的　对人β－ ＮＧＦ基因进行体外扩增和克隆及其序列分析，为其在真核细胞中的表达及其临床应用打下基础。方法　本实验设计并合成一对特异性引物，采用聚合酶链反应分别从人脑ｃＤＮＡ 和人睾丸ｃＤＮＡ 以及人脑基因组ＤＮＡ中扩... 目的　对人β－ ＮＧＦ基因进行体外扩增和克隆及其序列分析，为其在真核细胞中的表达及其临床应用打下基础。方法　本实验设计并合成一对特异性引物，采用聚合酶链反应分别从人脑ｃＤＮＡ 和人睾丸ｃＤＮＡ 以及人脑基因组ＤＮＡ中扩增出β－ 神经生长因子（β－ ＮＧＦ）基因，并和Ｔ４ 载体相连接，经筛选得到人β－ ＮＧＦ克隆，并用Ｓａｎｇｅｒ 双脱氧末端终止法进行序列分析。结果　凝胶电泳显示在预期的位置出现阳性条带。 展开更多

关键词 克隆 序列分析 Β-NGF 基因 体外扩增

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桂花查耳酮合酶chs基因的克隆及序列分析 被引量：5

10

作者 徐秀荣 马燕 臧德奎 《中国农学通报》 2016年第1期118-124,共7页

克隆与桂花（Osmanthus fragrans）花色形成相关基因查耳酮合酶（Ofchs）,并对该基因的序列特征、进化关系进行分析,为探究该基因在桂花花色形成中的功能提供理论依据。以桂花‘丹桂’品种为试材,采用RT-PCR和RACE方法克隆丹桂查耳酮合... 克隆与桂花（Osmanthus fragrans）花色形成相关基因查耳酮合酶（Ofchs）,并对该基因的序列特征、进化关系进行分析,为探究该基因在桂花花色形成中的功能提供理论依据。以桂花‘丹桂’品种为试材,采用RT-PCR和RACE方法克隆丹桂查耳酮合酶（chalcone synthase,chs）基因c DNA全长。利用NCBI和DNAMAN分析软件,对该基因进行核苷酸序列以及氨基酸序列的分析,利用DNAMAN软件直接构建系统进化树,以分析该基因在不同物种间的进化关系。结果表明：从‘丹桂’花瓣中成功获得了1个丹桂查耳酮合酶基因c DNA全长,该基因全长为1383 bp,包含48 bp的5′非编码区、162 bp的3′非编码区和1个长度为1173 bp编码390个氨基酸的开放阅读框。序列分析表明,该基因具有Cysl64、His303和Asn3363个活性位点及2个决定底物特异性的苯丙氨酸残基Phe215、Phe265。该基因也具有查尔酮合酶家族的2条特征多肽序列：RFMMYQQGCFAGGTVLR和GVLFGFGPGL。Blast序列分析显示,该基因与同属木犀科的油橄榄相似性达95%,与其他双子叶植物的相似性达72%-76%。克隆出的丹桂chs基因属于查尔酮合酶家族,系统进化分析表明,该基因聚类具有明显的种属特性,桂花与唇形科等植物的chs亲缘关系较近,相似性达76%以上,符合植物分类学分类,为今后探究该基因在花色行形成中的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 桂花 查耳酮合酶基因 克隆 序列分析

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绵羊肺腺瘤病毒内蒙古分离株前病毒全基因组克隆及序列分析 被引量：4

11

作者 刘畅 李磊 +3 位作者 于立新 么宏强 周建华 马学恩 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期508-513,共6页

为了探究绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)内蒙古流行株与国际各代表株间的亲缘关系,本研究以内蒙古地区绵羊肺腺瘤病自然病例的肺组织总DNA为模板,克隆gag、pro与pol基因,并应用双酶切的方法将其与本实验室先期制备... 为了探究绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)内蒙古流行株与国际各代表株间的亲缘关系,本研究以内蒙古地区绵羊肺腺瘤病自然病例的肺组织总DNA为模板,克隆gag、pro与pol基因,并应用双酶切的方法将其与本实验室先期制备并保存的LTR、env基因连接起来,得到了含有JSRV内蒙古分离株前病毒全基因组重组质粒pMD-JSRV。序列分析结果表明,JSRV内蒙古分离株前病毒全基因组全长7 690bp,具外源性JSRV典型的分子特征:1在gag基因中含Sca I酶切位点;2核衣壳蛋白区有2个保守的可形成锌指结构的"CCHC"基序;3env基因编码的TM区胞浆尾部包含保守的特异性"YXXM"基序。将其进行同源性分析,结果表明该株病毒属JSRV-II型,与分离自美国的代表株AF105220间亲缘关系较近,同源性达95%。本研究为进一步探讨JSRV内蒙古分离株基因组结构特点与其致病机制间的关系奠定了基础。 展开更多

关键词 绵羊肺腺瘤病毒 病毒全基因组 克隆 序列分析

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二氢黄酮醇还原酶基因在红肉萝卜和白肉萝卜中的序列变异和表达差异 被引量：3

12

作者 孙玉燕 张晓辉 +4 位作者 邱杨 李锡香 王海平 沈镝 宋江萍 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期554-560,共7页

二氢黄酮醇还原酶是植物花青素合成的关键酶。本研究以中国特有红肉萝卜种质‘心里美’为试材,克隆和分析其二氢黄酮醇还原酶基因(DFR)。通过与大白菜DFR基因的完整CDS序列及白萝卜自交系‘36-2’全基因组序列(未公布)进行比对,获得单... 二氢黄酮醇还原酶是植物花青素合成的关键酶。本研究以中国特有红肉萝卜种质‘心里美’为试材,克隆和分析其二氢黄酮醇还原酶基因(DFR)。通过与大白菜DFR基因的完整CDS序列及白萝卜自交系‘36-2’全基因组序列(未公布)进行比对,获得单一的同源序列Rsa10008592。参照该序列设计5'和3'引物,以‘心里美’萝卜自交系‘HX12Q-49’的cDNA为模板,通过RT-PCR和TA克隆获得ORF为1164 bp(Genbank登录号KF280272)、编码387 aa(Genbank登录号AGU42192)的RsDFR基因的完整CDS序列。通过对白萝卜‘36-2’的Rsa10008592和‘心里美’萝卜‘HX12Q-49’的RsDFR序列比较分析,发现二者之间存在19个核苷酸和3个氨基酸的差异。氨基酸序列进化树显示,‘心里美’萝卜的RsDFR与大白菜和芥菜的DFR同源性较高。荧光定量PCR发现RsDFR在白萝卜和‘心里美’萝卜不同发育阶段的表达模式不同,在白萝卜中仅在肉质根发育的早期表达,而在‘心里美’萝卜的全生育期均有表达,且在破肚期的表达量最高。同时,对‘心里美’萝卜RsDFR基因编码的蛋白质进行了初步分析。 展开更多

关键词 '心里美’萝卜 二氢黄酮醇还原酶 克隆 序列分析 表达分析

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苹果L-半乳糖脱氢酶基因cDNA全长的克隆与序列分析 被引量：2

13

作者 肖妮娜 马锋旺 +1 位作者 张军科 梁东 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第4期175-178,184,共5页

L-半乳糖脱氢酶(L-Galactose dehydrogenase,GalDH)是维生素C合成的L-半乳糖途径中,催化L-半乳糖生成L-半乳糖内酯的关键酶。根据GenBank中登录的的GalDH cDNA序列设计1对扩增引物,以嘎拉苹果叶片为材料,采用RT-PCR法扩增出GalDH cDNA... L-半乳糖脱氢酶(L-Galactose dehydrogenase,GalDH)是维生素C合成的L-半乳糖途径中,催化L-半乳糖生成L-半乳糖内酯的关键酶。根据GenBank中登录的的GalDH cDNA序列设计1对扩增引物,以嘎拉苹果叶片为材料,采用RT-PCR法扩增出GalDH cDNA全长。将获得的基因片段克隆到pMD18-T载体上,转入大肠杆菌DH5α筛选阳性克隆,经酶切和PCR鉴定,并对插入片段进行序列分析,结果表明,本试验获得的cDNA片段长为1 111 bp,是苹果GalDH cDNA全长。 展开更多

关键词 苹果 GalDH RT-PCR 克隆 序列分析

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人瘦素基因克隆与序列测定 被引量：3

14

作者 徐明彤 吕凌 +2 位作者 钟光恕 程桦 傅祖植 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第2期104-107,共4页

【目的】构建人瘦素基因cDNA克隆 ,并进行序列分析。【方法】用逆转录聚合酶链反应扩增人瘦素基因cDNA ,获得片段 (6 40bp)连接至 pUC19载体 ,并转化大肠杆菌DH5α。以末端终止法进行序列测定。【结果】所克隆的人瘦素cDNA含全长的人瘦... 【目的】构建人瘦素基因cDNA克隆 ,并进行序列分析。【方法】用逆转录聚合酶链反应扩增人瘦素基因cDNA ,获得片段 (6 40bp)连接至 pUC19载体 ,并转化大肠杆菌DH5α。以末端终止法进行序列测定。【结果】所克隆的人瘦素cDNA含全长的人瘦素基因编码区 ,仅 2 87位的腺苷酸被鸟苷酸代替 ,导致 96位编码谷氨酰胺的密码子CAA改变为编码精氨酸的CGA ,其意义尚待阐明。【结论】以逆转录聚合酶链反应方法成功地构建了人瘦素基因cDNA克隆。 展开更多

关键词 瘦素 DNA序列测定 基因克隆

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汉族人群中22个HLA-Cw等位基因全长序列单核苷酸多态性分析 被引量：3

15

作者 曾健强 徐筠娉 +3 位作者 王大明 高素青 邹红岩 邓志辉 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期473-479,共7页

为探讨HLA-Cw(Human leukocyte antigen-Cw)基因全长序列分子遗传多态性,文章对28个HLA-Cw基因型已知的汉族个体样本,采用长距离PCR技术和高保真性的Pfu酶,扩增HLA-Cw基因全长序列4.5kb,进行分子克隆和单倍体测序。采用群体遗传学研究... 为探讨HLA-Cw(Human leukocyte antigen-Cw)基因全长序列分子遗传多态性,文章对28个HLA-Cw基因型已知的汉族个体样本,采用长距离PCR技术和高保真性的Pfu酶,扩增HLA-Cw基因全长序列4.5kb,进行分子克隆和单倍体测序。采用群体遗传学研究方法分析了HLA-Cw等位基因全长序列中各亚区的单核苷酸多态性。结果表明:在28个样本中共检测出22种等位基因,序列均已提交GenBank和国际IMGT/HLA数据库并获得了认可;其中Cw*0706、Cw*030301、Cw*140201的全长序列为首次报道,尤其是Cw*0706内含子序列的获得,能够重新设计对该等位基因测序分型的引物,避免测序分型中可能对这一等位基因的漏检。将28个样本的56条单倍体序列用Clustal软件进行序列排比,输入到DnaSP4.0进行多态性分析,共发现244个SNPs,10处插入/缺失多态性。对HLA-Cw等位基因各亚区多态性的分析,发现第4内含子及以前并没有受到关注的第5外显子受到平衡选择的作用,在进化中受到了选择压力,预示着它们在免疫系统的进化过程中可能扮演着重要的角色。 展开更多

关键词 人类白细胞抗原 HLA-Cw基因 基因组全长序列 克隆和测序分析 单核苷酸多态性

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卡介苗D2株分泌蛋白基因植物表达载体的构建 被引量：3

16

作者 刘凤娟 俞守义 +7 位作者 聂军 陈清 朱丽 芮勇宇 李建栋 江晓玲 吴敏 李志锋 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1193-1195,共3页

目的　克隆卡介苗 (BCG)D2株 32 -kDa分泌蛋白基因 (fbpA基因 ) ,构建重组植物表达载体 pBI12 1-fbpA ,为研制转基因植物口服疫苗奠定基础。 方法　采用PCR法从BCGD2株基因组DNA中分离fbpA基因 ,构建重组克隆载体 pUCm -T -fbpA ,经过... 目的　克隆卡介苗 (BCG)D2株 32 -kDa分泌蛋白基因 (fbpA基因 ) ,构建重组植物表达载体 pBI12 1-fbpA ,为研制转基因植物口服疫苗奠定基础。 方法　采用PCR法从BCGD2株基因组DNA中分离fbpA基因 ,构建重组克隆载体 pUCm -T -fbpA ,经过单菌落PCR法、BamHⅠ、SacⅠ和HindⅢ单 /双酶切、DNA序列分析鉴定后 ,将fb pA基因亚克隆入植物表达载体 pBI 12 1,得到重组载体pBI 12 1-fbpA ,并转化根癌农杆菌株EHA10 5 ,用PCR法对其进行鉴定。结果　重组载体 pUCm -T -fbpA测序后证实fbpA基因由 10 4 1bp组成 ,包括 1个 10 14bp的开放阅读框。DNA序列上游由编码一段信号肽的 12 9bp组成 ,并对 32 -kDa蛋白的分泌起决定作用。相应的编码成熟蛋白的序列由 885个碱基组成。fbpA基因与来源于BCG1173P2株的同一基因序列完全一致。此外 ,构建的重组植物表达载体 pBI12 1-fbpA成功转入根癌农杆菌株EHA10 5。结论　编码BCGD2株 32 -kDa分泌蛋白的fbpA基因分离成功 ,DNA序列分析证实fbpA基因在分枝杆菌中高度保守 ,为进一步深入分析fbpA基因以及研制抗结核病转基因植物疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 卡介苗 32-kDa蛋白 tbpA 克隆 DNA序列分析 重组 植物表达载体

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蒙古羊BMP15全长DNA序列的克隆与分析 被引量：2

17

作者 刘永斌 荣威恒 +2 位作者 王峰 何小龙 田春英 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第1期55-59,共5页

BMP15基因主要在哺乳动物卵巢中表达,对卵泡的发育和分化起重要作用。根据其他物种BMP15基因的保守序列设计特异性引物,扩增蒙古羊的全长DNA序列。从蒙古羊的血液中提取总DNA,采用PCR技术扩增出蒙古羊BMP15DNA序列。将此片段克隆到PMD1... BMP15基因主要在哺乳动物卵巢中表达,对卵泡的发育和分化起重要作用。根据其他物种BMP15基因的保守序列设计特异性引物,扩增蒙古羊的全长DNA序列。从蒙古羊的血液中提取总DNA,采用PCR技术扩增出蒙古羊BMP15DNA序列。将此片段克隆到PMD18-T载体中,经菌落PCR鉴定和DNA序列测定分析验证,证实所克隆序列BMP15为骨形态发生蛋白,符合骨形态发生蛋白基因的特征。序列分析表明,该DNA包含两个外显子序列和一个内含子序列以及两端的非翻译序列,全长6 642 bp,编码393个氨基酸,蒙古羊与牛的同源性最高(98.6%),与猪的同源性为90.5%。 展开更多

关键词 蒙古羊 BMP15 PCR 克隆 序列分析

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红鳍东方鲀组织蛋白酶L基因的电子克隆及序列分析 被引量：2

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作者 梁静真 饶颖竹 +1 位作者 陈蓉 邓富琳 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1569-1574,共6页

【目的】采用电子克隆技术克隆红鳍东方鲀组织蛋白酶L基因,并应用生物信息学技术分析其推导氨基酸的序列特征,为进一步探索其在免疫功能中的作用奠定基础。【方法】以斑马鱼的组织蛋白酶L核苷酸序列(Y08321.1)为探针,对红鳍东方鲀基因... 【目的】采用电子克隆技术克隆红鳍东方鲀组织蛋白酶L基因,并应用生物信息学技术分析其推导氨基酸的序列特征,为进一步探索其在免疫功能中的作用奠定基础。【方法】以斑马鱼的组织蛋白酶L核苷酸序列(Y08321.1)为探针,对红鳍东方鲀基因组数据库进行BLASTn分析,将检索到的匹配结果进行碱基3'端及5'端的适当延长,用DNAssist预测其编码信息;然后从GenBank获取若干物种组织蛋白酶L序列,用DNASTAR软件进行比对。【结果】红鳍东方鲀组织蛋白酶L基因全长2005bp,含7个外显子和6个内含子;包含编码336个氨基酸的开放阅读框(1011bp);其推导的氨基酸序列具有组织蛋白酶L所特有的氨基酸保守结构域(ERWNIN和GNFD)及由Cys25、His159和Asn175残基组成的保守活性位点,与青鳉、鲤鱼的组织蛋白酶L基因具有较高的序列一致性。【结论】红鳍东方鲀组织蛋白酶L的一些结构域和催化活性位点在进化过程中比较保守,与鱼类物种来源的组织蛋白酶L在氨基酸水平上一致性较高,在进化上亲缘关系较近。 展开更多

关键词 红鳍东方鲀 组织蛋白酶L 生物信息学 电子克隆 序列分析

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犬贾第虫MM/Sac-C/1基因的克隆及序列分析 被引量：2

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作者 赵永军 战洪波 +1 位作者 王亮 康桂英 《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》 2016年第4期311-316,272,共7页

利用PCR技术从犬贾第虫滋养中扩增出了2004bp大小的MM/Sac-C/1基因,构建了p MD-MM/Sac-C/1克隆载体,并进行了序列测定,利用计算机对该序列进行了核苷酸同源性比较.结果表明,与GeneBank登陆的蓝氏贾第虫WB株AF236019序列比较,其同源性为9... 利用PCR技术从犬贾第虫滋养中扩增出了2004bp大小的MM/Sac-C/1基因,构建了p MD-MM/Sac-C/1克隆载体,并进行了序列测定,利用计算机对该序列进行了核苷酸同源性比较.结果表明,与GeneBank登陆的蓝氏贾第虫WB株AF236019序列比较,其同源性为98%,蛋白质同源性比较结果显示,与蓝氏贾第虫WB株表面抗原的同源性为90%,获得了犬贾第虫MM/Sac-C/1基因. 展开更多

关键词 犬贾第虫 MM/Sac-C/1基因 克隆及序列分析

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奶牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：2

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作者 曹世诺 于龙政 +3 位作者 薛书江 贾立军 柴方红 张守发 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第3期15-17,共3页

研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白的基因序列设计合成1对引物,用PCR方法扩增出了牛瑟氏泰勒虫的基因片段,将该基因纯化后连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析,并用此方法对延边某奶牛场10头奶牛进行了检测。结果表明... 研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白的基因序列设计合成1对引物,用PCR方法扩增出了牛瑟氏泰勒虫的基因片段,将该基因纯化后连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析,并用此方法对延边某奶牛场10头奶牛进行了检测。结果表明:10份样品中9份为阳性,所扩增的目的基因核苷酸长为868bp,共编码283个氨基酸;该段基因片段与牛泰勒虫韩国株核苷酸序列同源性为99·4%,氨基酸同源性为99·3%。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P33表面蛋白基因序列 克隆 序列分析

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