高粱肉桂酸羟化酶基因SbC4H1降低拟南芥的木质素合成 被引量：11

1

作者 闫丽 夏光敏 +1 位作者 黄应华 赵双宜 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1433-1441,共9页

肉桂酸羟化酶(C4H)是苯丙烷代谢通路的关键酶,其活性和含量直接影响木质素合成的效率。本文研究通过高粱bmr突变体的抑制差减杂交筛选、克隆到了一个C4H基因SbC4H1。半定量RT-PCR发现,SbC4H1在多个bmr突变体中上调表达。将SbC4H1-GFP融... 肉桂酸羟化酶(C4H)是苯丙烷代谢通路的关键酶,其活性和含量直接影响木质素合成的效率。本文研究通过高粱bmr突变体的抑制差减杂交筛选、克隆到了一个C4H基因SbC4H1。半定量RT-PCR发现,SbC4H1在多个bmr突变体中上调表达。将SbC4H1-GFP融合基因转化拟南芥原生质体进行瞬时表达,发现SbC4H1表达产物蛋白定位于细胞质。SbC4H1在拟南芥中的异源表达明显降低其茎的木质素含量,并且下调了拟南芥4CL1、F5H和HCT等木质素合成基因的表达。这些结果表明,高粱SbC4H1抑制了拟南芥木质素的合成。 展开更多

关键词 高梁 肉桂酸4-羟化酶 木质素合成 生物能源

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丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建 被引量：8

2

作者 张婷婷 王春丽 +3 位作者 韩蕊莲 刘岩 赵旺生 梁宗锁 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第7期158-162,共5页

【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32... 【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32a连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行双酶切鉴定,诱导表达重组蛋白并进行SDS-PAGE电泳以及Western Blot分析。【结果】克隆得到了1 200 bp大小的基因片段,经测序鉴定其为SmC4H基因片段;连接表达载体测序结果表明,SmC4H-pET32a构建成功,其诱导表达蛋白经SDS-PAGE检测及Western Blot分析发现,重组蛋白表达效果较好,且主要以包涵体形式存在。【结论】成功构建了SmC4H-pET32a原核表达载体,并成功诱导了SmC4H-pET32a重组蛋白的表达。 展开更多

关键词 丹参 肉桂酸-4-羟化酶 pET32a 原核表达载体

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膜荚黄芪C4H基因的克隆及表达分析 被引量：7

3

作者 冯艺川 赵洋 +2 位作者 全雪丽 吴松权 吴委林 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第1期130-136,共7页

本研究采用RACE技术从膜荚黄芪中克隆得到两个肉桂酸-4-羟基化酶Am C4H1与Am C4H2,并进行了生物信息学分析;研究了Am C4H1与Am C4H2在根、茎和叶中的表达量与毛蕊异黄酮及其糖苷含量之间的相关性。结果表明,克隆得到的Am C4H1与Am C4H2... 本研究采用RACE技术从膜荚黄芪中克隆得到两个肉桂酸-4-羟基化酶Am C4H1与Am C4H2,并进行了生物信息学分析;研究了Am C4H1与Am C4H2在根、茎和叶中的表达量与毛蕊异黄酮及其糖苷含量之间的相关性。结果表明,克隆得到的Am C4H1与Am C4H2基因均编码505个氨基酸,属于不稳定蛋白和亲水性蛋白,Am C4H1与Am C4H2基因编码氨基酸序列上的差异导致二级结构与三级结构不同。Am C4H2基因在根、茎、叶中的表达趋势与毛蕊异黄酮及其糖苷的含量基本一致,推测其参与了毛蕊异黄酮及其糖苷的生物合成,这为通过分子手段提高毛蕊异黄酮及其糖苷的含量提供了理论参考。 展开更多

关键词 膜荚黄芪(Astragalus membranaceus) 肉桂酸-4-羟基化酶 表达分析

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桑树肉桂酸-4-羟化酶基因(MmC4H)的克隆及在不同桑品种间的表达差异 被引量：7

4

作者 黄满芬 王恒 +4 位作者 方荣俊 赵卫国 张林 潘刚 刘利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期592-600,共9页

肉桂酸-4-羟化酶(C4H)是植物苯丙烷类代谢途径中的关键酶之一,影响黄酮类等次生代谢产物的生物合成。利用RT-PCR和RACE技术,以鲁桑(Morus multicaulis)品种育71-1的桑树幼叶cDNA为模板克隆了桑树肉桂酸-4-羟化酶基因,命名为MmC4H(GenBan... 肉桂酸-4-羟化酶(C4H)是植物苯丙烷类代谢途径中的关键酶之一,影响黄酮类等次生代谢产物的生物合成。利用RT-PCR和RACE技术,以鲁桑(Morus multicaulis)品种育71-1的桑树幼叶cDNA为模板克隆了桑树肉桂酸-4-羟化酶基因,命名为MmC4H(GenBank登录号:KJ013408)。该基因cDNA序列长1 794 bp,1 518 bp的ORF编码505个氨基酸残基,蛋白质序列包含一个植物P450保守区域,与包括川桑(Morus notabilis)在内的其它6种植物同源蛋白质序列的相似度达86%以上,其中与川桑同源序列的相似度达到98%。通过实时荧光定量PCR检测分析MmC4H在7个桑种的34个品种幼叶中的表达水平存在较大差异,并且该基因的表达水平与桑叶总黄酮含量有一定的相关性,供试华桑(Morus cathayana)和白桑(Morus alba)品种幼叶中的MmC4H表达水平及桑叶总黄酮含量均较高。 展开更多

关键词 桑树 肉桂酸-4-羟化酶 基因克隆 序列分析 实时荧光定量PCR 桑品种 桑叶总黄酮

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菘蓝中肉桂酸-4-羟基化酶基因克隆与表达分析 被引量：7

5

作者 胡永胜 张磊 陈万生 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期101-106,共6页

目的克隆菘蓝中肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)基因,并进行生物信息学和表达分析。方法采用c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆C4H基因全长c DNA序列,进而获得其基因组DNA序列。通过RT-PCR法检测C4H蛋白在不同器官中及受到相应刺激因素下的表达... 目的克隆菘蓝中肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)基因,并进行生物信息学和表达分析。方法采用c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆C4H基因全长c DNA序列,进而获得其基因组DNA序列。通过RT-PCR法检测C4H蛋白在不同器官中及受到相应刺激因素下的表达情况。结果菘蓝C4H基因全长c DNA为1 674 bp(Gen Bank登录号:GU014562),包含一个1 530bp的开放阅读框(ORF),编码509个氨基酸残基。对应的基因组分析表明,C4H基因含2个内含子,3个外显子。在根、茎、叶各器官中均有表达,其中根中最多。胁迫因素紫外照射(UV-B)、茉莉酸甲酯(Me JA)、脱落酸(ABA)和赤霉素(GA3)在一定程度上能够诱导C4H的表达上调。结论首次从菘蓝植物中克隆得到C4H基因的c DNA全长序列,并证实其在根中表达量最高,且在胁迫因素下表达量上调,为进一步研究菘蓝中抗病毒活性成分木质素类成分的次生代谢工程奠定基础。 展开更多

关键词 菘蓝 肉桂酸-4-羟基化酶 克隆 生物信息学 表达分析

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荸荠肉桂酸4-羟基化酶基因的克隆及其在鲜切荸荠黄化过程中的表达分析 被引量：5

6

作者 宋慕波 周伟政 +3 位作者 唐永胜 陈振林 帅良 段振华 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期666-673,共8页

肉桂酸4-羟基化酶(cinnamic acid 4-hydroxylase,C4H)是苯丙烷代谢途径中的关键酶,在植物黄酮类物质合成代谢过程中发挥重要作用。鲜切荸荠贮藏过程中由于黄酮类物质积累而导致的黄化现象很可能离不开C4H的参与。本研究利用RACE技术在... 肉桂酸4-羟基化酶(cinnamic acid 4-hydroxylase,C4H)是苯丙烷代谢途径中的关键酶,在植物黄酮类物质合成代谢过程中发挥重要作用。鲜切荸荠贮藏过程中由于黄酮类物质积累而导致的黄化现象很可能离不开C4H的参与。本研究利用RACE技术在荸荠中克隆得到C4H基因cDNA全长,命名为Cw C4H(GenBank登录号:MG719237),该序列长度为1736 bp,编码一条由505个氨基酸组成的多肽,分子量为57.826 kD。Cw C4H包含细胞色素P450结构域,其二级结构以α-螺旋为主。多重比对结果表明,CwC4H具有该基因家族特有的保守结构域并与其它植物的C4H蛋白有很高的相似性。系统进化分析表明CwC4H与高粱C4H蛋白亲缘关系较近。荧光定量PCR分析表明,鲜切荸荠黄化过程中Cw C4H表达量快速上升,水杨酸处理抑制了鲜切荸荠的黄化和CwC4H的表达。 展开更多

关键词 鲜切荸荠 肉桂酸4-羟基化酶 基因克隆 表达分析

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茶鲜叶萎凋中苯丙氨酸解氨酶活性的研究 被引量：5

7

作者 刘鸿年 刘发敏 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 1990年第4期375-378,共4页

茶叶在自然萎凋过程中,苯丙氨酸解氨酶活性的高峰出现在采摘后12小时,活性上升幅度以福鼎最高,为鲜叶的1.58倍;云南大叶最低,为鲜叶的1.28倍。发酵期间,其活性只有鲜叶活性的1/2左右。供试品种的苯丙氨酸解氨酶(PAL)和肉桂酸4—羟化酶(C... 茶叶在自然萎凋过程中,苯丙氨酸解氨酶活性的高峰出现在采摘后12小时,活性上升幅度以福鼎最高,为鲜叶的1.58倍;云南大叶最低,为鲜叶的1.28倍。发酵期间,其活性只有鲜叶活性的1/2左右。供试品种的苯丙氨酸解氨酶(PAL)和肉桂酸4—羟化酶(CA4H)活性变化是相伴随的。CA4H活性一般低于PAL的活性。福鼎和云南大叶的PAL和CA4H活性分别在8小时和12小时达到高峰。它们之间有4小时的时差,这可能是品种不同引起的。 展开更多

关键词 茶叶 萎凋 PAL 活性 CA4H 酶活性

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华北紫丁香肉桂酸4-羟化酶(SoC4H)基因的克隆及表达分析 被引量：4

8

作者 王蕊 王羽 +1 位作者 李彦慧 郑健 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期2025-2030,共6页

华北紫丁香系木犀科丁香属落叶灌木,是北方著名的花木之一。为了进一步研究华北紫丁香肉桂酸4-羟化酶(SoC4H)在花色苷代谢途径中的表达特性,利用RT-PCR技术对SoC4H基因进行分离克隆,并对其进行生物信息学分析,同时利用实时荧光定量PCR... 华北紫丁香系木犀科丁香属落叶灌木,是北方著名的花木之一。为了进一步研究华北紫丁香肉桂酸4-羟化酶(SoC4H)在花色苷代谢途径中的表达特性,利用RT-PCR技术对SoC4H基因进行分离克隆,并对其进行生物信息学分析,同时利用实时荧光定量PCR技术分析了该基因的组织表达模式。结果表明,SoC4H基因的最大开放阅读框(opening reading frame,ORF)长为1 518 bp,编码505个氨基酸残基;该基因的基因组序列无内含子;SoC4H基因在初花期和根部的表达量较高。 展开更多

关键词 华北紫丁香 肉桂酸4-羟化酶 基因克隆 表达分析离

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川西獐牙菜SmC4H基因的生物信息学分析和表达分析

9

作者 胡月 赵舒媛 +7 位作者 张亚美 贾榕 惠探月 凌春燕 赵丽丽 王艳 王勇 向蓓蓓 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第8期2528-2536,共9页

由Sm C4H基因编码的肉桂酸-4-羟基化酶是川西獐牙菜苯丙烷途径的关键酶。本研究从川西獐牙菜的转录组数据中获得了SmC4H基因的全长cDNA序列,通过RT-PCR进行该基因的克隆鉴定,利用生物信息学软件对该基因进行预测分析,并通过RT-qPCR检测... 由Sm C4H基因编码的肉桂酸-4-羟基化酶是川西獐牙菜苯丙烷途径的关键酶。本研究从川西獐牙菜的转录组数据中获得了SmC4H基因的全长cDNA序列,通过RT-PCR进行该基因的克隆鉴定,利用生物信息学软件对该基因进行预测分析,并通过RT-qPCR检测该基因的组织表达差异和不同胁迫处理条件下的表达情况。生物信息学分析结果显示SmC4H基因c DNA全长1 518 bp,编码505个氨基酸,相对分子质量为51.83 kD,为亲水性较强的不稳定蛋白,二级结构由47.52%α-螺旋、14.06%延伸链、4.95%β-转角和33.47%无规则卷曲构成,预测该蛋白可能不具有跨膜结构,不含有信号肽,属于p450超家族。SmC4H蛋白的相似性与其他植物的C4H蛋白较高,其中与美女樱(Glandularia×hybrida)的相似性最高。RT-qPCR结果显示,SmC4H基因在根、茎、花、叶中均有表达,表达量根>茎>花>叶,硝普钠(SNP)、赤霉素(GA3)和脱落(ABA)在一定程度上能使SmC4H基因的表达上调。此结果为进一步研究该基因在川西獐牙菜苯丙烷途径中的功能和通过基因工程手段提高呫吨酮化合物产量奠定了基础。 展开更多

关键词 川西獐牙菜 肉桂酸-4-羟基化酶 基因克隆 生物信息学分析 表达分析

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甘薯肉桂酸-4-羟化酶基因克隆及序列分析 被引量：3

10

作者 张华玲 刘绪 +3 位作者 杨春贤 黄元射 傅玉凡 张启堂 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期501-508,共8页

肉桂酸-4-羟化酶(Cinnamic acid-4-hydroxylase,C4H,EC 1.14.13.11)是苯丙烷途径中第二步反应酶,同时也是花色素苷前体生物合成途径中关键酶。该研究根据植物C4H的同源序列设计引物,通过RTPCR结合RACE的方法,在紫色甘薯中获得了与其相应... 肉桂酸-4-羟化酶(Cinnamic acid-4-hydroxylase,C4H,EC 1.14.13.11)是苯丙烷途径中第二步反应酶,同时也是花色素苷前体生物合成途径中关键酶。该研究根据植物C4H的同源序列设计引物,通过RTPCR结合RACE的方法,在紫色甘薯中获得了与其相应的C4H基因,命名为Ib C4H(Gen Bank登录号GQ373157)。结果表明:(1)序列分析表明Ib C4H长1 668 bp,编码505个氨基酸,该氨基酸序列与其c DNA序列与Ib C4H蛋白与马铃薯C4H蛋白序列最为接近,与苹果、黑莓、大阿米芹、油菜一致性很高,均在70%以上。(2)二级结构预测表明α-螺旋和无规则卷曲是Ib C4H蛋白最大量的结构元件,而延伸链则散布于整个蛋白中。(3)三维结构建模预测,Ib C4H蛋白具备细胞色素P450氧和铁离子结合位点等典型的C4H结构。该研究结果为进一步了解花色素苷生物合成途径中的作用奠定了基础,也为花青素生物合成分子机理和代谢调控提供了靶位点和理论参考。 展开更多

关键词 甘薯 肉桂酸-4-羟化酶 基因克隆 序列分析

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苦荞FtC4H基因克隆与生物信息学分析 被引量：2

11

作者 尹桂芳 段迎 +6 位作者 杨晓琳 蔡苏云 王艳青 卢文洁 孙道旺 贺润丽 王莉花 《作物杂志》 北大核心 2022年第1期77-83,共7页

克隆苦荞苯丙烷类物质代谢途径中的关键酶肉桂酸-4-羟基化酶基因(FtC4H),为进一步研究其功能奠定基础。以云荞1号和小米荞为材料,提取不同发育期果壳RNA,利用RT-PCR法克隆苦荞FtC4H基因,运用生物信息学分析FtC4H蛋白的特征,构建FtC4H蛋... 克隆苦荞苯丙烷类物质代谢途径中的关键酶肉桂酸-4-羟基化酶基因(FtC4H),为进一步研究其功能奠定基础。以云荞1号和小米荞为材料,提取不同发育期果壳RNA,利用RT-PCR法克隆苦荞FtC4H基因,运用生物信息学分析FtC4H蛋白的特征,构建FtC4H蛋白系统进化树,分析其基因表达。结果表明,克隆的FtC4H基因序列包含1299bp完整的c DNA开放阅读框,编码432个氨基酸,为亲水性不稳定碱性蛋白,具有P450超家族保守域,不具有跨膜结构域,有丰富的二级结构,三级结构预测显示FtC4H与6vby.1.A的序列相似度高。系统进化分析结果表明,本研究克隆的FtC4H与已报道的苦荞其他C4H基因不同。qRT-PCR结果表明,FtC4H在小米荞的花和叶中相对表达量显著高于云荞1号。 展开更多

关键词 苦荞 RT-PCR克隆 肉桂酸-4-羟基化酶 生物信息学分析 实时荧光定量PCR

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丹参多倍体开花前后丹酚酸生物合成关键酶活性的变化 被引量：1

12

作者 吴顺 马晓静 +3 位作者 邱云 孙健鹏 翟茜 刘奇 《中国农学通报》 2022年第19期73-76,共4页

为探讨开花对丹参多倍体丹酚酸积累的影响,以丹参多倍体为材料,探讨花蕾期、盛花期、衰败期叶片中丹酚酸合成关键酶活性的变化。结果表明,可溶性蛋白随着丹参花期的进行,表现出先升后降,在盛花期达到峰值,而5号丹参可溶性蛋白含量在各... 为探讨开花对丹参多倍体丹酚酸积累的影响,以丹参多倍体为材料,探讨花蕾期、盛花期、衰败期叶片中丹酚酸合成关键酶活性的变化。结果表明,可溶性蛋白随着丹参花期的进行,表现出先升后降,在盛花期达到峰值,而5号丹参可溶性蛋白含量在各时期均较其他丹参高。从酪氨酸氨基转移酶(TAT)、肉桂酸-4-羟化酶(C4H)和苯丙氨酸裂解酶(PAL)酶活性变化看,不同丹参在花蕾期TAT酶活性比开花后高,尤其是在盛花期时酶活性明显降低;PAL酶活性基本呈逐渐上升趋势;C4H酶活性变化随着花期的进行先降低后升高;但5号丹参比其他丹参的3种酶活性在各时期高,这可能是其丹酚酸含量较其他丹参高的原因之一。 展开更多

关键词 丹参多倍体 开花 丹酚酸 酪氨酸氨基转移酶 肉桂酸-4-羟化酶 苯丙氨酸裂解酶

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烟草苯丙烷代谢途径关键酶肉桂酸-4-羟化酶、4-香豆酸-辅酶A基因的分离及表达特性分析 被引量：15

13

作者 于利 张彦 +4 位作者 陈爱国 梁洪波 Qamaruddin Jogi 徐文玲 许娜 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1067-1073,共7页

肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、4-香豆酸-辅酶A(4CL)是烟草苯丙烷代谢途径的关键酶,其多酚类产物与烟草品质密切相关。本研究以酚类物质含量合成差异较大的2个烤烟品种红花大金元(HD)和K326为试验材料,利用同源克隆技术获得这2种烟草Ntc4h和Nt... 肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、4-香豆酸-辅酶A(4CL)是烟草苯丙烷代谢途径的关键酶,其多酚类产物与烟草品质密切相关。本研究以酚类物质含量合成差异较大的2个烤烟品种红花大金元(HD)和K326为试验材料,利用同源克隆技术获得这2种烟草Ntc4h和Nt4cl基因的cDNA序列并进行表达特性分析。结果表明,在2个品种中Ntc4h和Nt4cl各有2个同源基因,Ntc4h1、Ntc4h2、Nt4cl1和Nt4cl2的ORF长度分别为1518 bp、1518 bp、1644 bp和1629 bp。Nt4cl1、Ntc4h1和Ntc4h2在编码序列上存在品种间差异。实时荧光定量PCR分析结果表明,该2种酶的基因在烟草中具有明显的时空表达特异性,2种酶基因在根、茎、叶、花和萼片中都有表达,在茎的木质部和韧皮部中的表达量均显著高于其他组织;在圆顶期和适熟期表达水平较高,在适熟期达到最高;且两品种中的表达模式存在差异。 展开更多

关键词 烟草 肉桂酸-4-羟化酶(C4H) 4-香豆酸-辅酶A(4CL) 基因分离 表达分析

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海南龙血树肉桂酸-4-羟基化酶基因(DcC4H)的克隆及表达分析 被引量：4

14

作者 梁惠桢 朱家红 +2 位作者 戴好富 梅文莉 彭世清 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第24期7984-7989,共6页

肉桂酸4-羟基化酶(cinnamate 4-hydroxylase, C4H)是植物苯丙烷代谢途径中的关键酶,能够影响类黄酮次生代谢物的生物合成。本研究根据海南龙血树转录组数据,利用RT-PCR技术在海南龙血树中克隆了一个C4H基因DcC4H,该基因包含一个1 518 b... 肉桂酸4-羟基化酶(cinnamate 4-hydroxylase, C4H)是植物苯丙烷代谢途径中的关键酶,能够影响类黄酮次生代谢物的生物合成。本研究根据海南龙血树转录组数据,利用RT-PCR技术在海南龙血树中克隆了一个C4H基因DcC4H,该基因包含一个1 518 bp的开放阅读框,编码505个氨基酸,蛋白质分子量57.82 kD。生物信息学分析显示,DcC4H属于细胞色素氧化酶P450 Superfamily,具有Cytochrome P450保守位点;蛋白序列比对显示DcC4H与其它植物C4H同源性高,保守性强。表达结果显示,DcC4H在花中的表达显著高于根、叶、果和茎;脱落酸(ABA)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、油菜素内酯(BR)、茉莉酸(JA)、紫外线(UVB)和蔗糖处理下,DcC4H的表达量均上调,其中UVB处理表达上调最显著。本研究将为进一步研究DcC4H在海南龙血树类黄酮生物合成的功能提供理论依据。 展开更多

关键词 海南龙血树 类黄酮 肉桂酸-4-羟基化酶 表达分析

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