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中山病多克隆抗体竞争ELISA检测方法的建立 被引量：7
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作者 杨振兴 朱建波 +6 位作者 肖雷 高林 苗海生 何于雯 谢佳芮 杨恒 李华春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期601-606,共6页
为建立一种简便、快速的中山病血清抗体监测方法,本研究采用纯化的中山病病毒(CHUV)包被ELISA反应板,兔抗CHUV多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测CHUV抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示:抗原最佳包被浓度为4.12μg/m L,竞争抗体... 为建立一种简便、快速的中山病血清抗体监测方法,本研究采用纯化的中山病病毒(CHUV)包被ELISA反应板,兔抗CHUV多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测CHUV抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示:抗原最佳包被浓度为4.12μg/m L,竞争抗体最佳使用浓度为1∶12 000倍。特异性试验显示该C-ELISA方法仅能检测CHUV抗体,其它相关病毒阳性血清检测结果均为阴性。对已知阳性样品的检测结果表明,本研究建立的C-ELISA方法敏感性高于血清中和试验和琼脂扩散试验。分别用C-ELISA、RT-PCR和病毒分离试验对监控动物每周采集的血清和抗凝血样品进行检测,ELISA结果与其它两种方法检测结果对应一致。本研究建立的C-ELISA为CHUV抗体的检测提供了一种快速、方便、可靠的方法。 展开更多
关键词 中山病病毒 多克隆抗体 竞争ELISA
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中山病病毒qRT-PCR与RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：2
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作者 杨振兴 朱沛 +5 位作者 谢佳芮 肖雷 杨恒 廖德芳 李华春 朱建波 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1275-1281,共7页
中山病病毒(CHUV)是一种严重危害犊牛神经系统的虫媒病毒,自2012年首次从我国云南师宗分离后,相继在广西与广东等地区也分离到该病毒。为建立CHUV的检测方法,本研究根据CHUV编码VP2蛋白的Seg-2基因序列设计引物和探针,通过条件优化建立... 中山病病毒(CHUV)是一种严重危害犊牛神经系统的虫媒病毒,自2012年首次从我国云南师宗分离后,相继在广西与广东等地区也分离到该病毒。为建立CHUV的检测方法,本研究根据CHUV编码VP2蛋白的Seg-2基因序列设计引物和探针,通过条件优化建立了检测CHUV的荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)和常规RT-PCR法。利用建立的qRT-PCR和RT-PCR分别检测CHUV、流行性出血病病毒、阿卡斑病毒、蓝舌病病毒和牛流行热病毒,结果显示除了均能检测CHUV以外,两种方法对其他病毒均无特异性扩增;利用两种方法对质粒标准品pLB-CHUV/V144/Seg-2(1×10^(0)拷贝/μL~1×10^(9)拷贝/μL)进行检测,结果显示两种方法的检测下限可分别达到10拷贝/μL(qRTPCR)与100拷贝/μL(RT-PCR);重复性试验结果显示,qRT-PCR的批内和批间变异系数均小于1%。利用这两种方法分别检测2019年5月~11月隔周采集3头感染CHUV哨兵牛的各25份共计75份的血液样品并计算二者的符合率;同时利用C-ELISA方法检测3头牛对应血清样品的CHUV抗体。结果显示,qRT-PCR检测到30份阳性样品,45份阴性样品;RT-PCR检测到22份阳性样品,53份阴性样品。两种方法的总符合率为89.33%;相比较于C-ELISA方法,qRT-PCR方法能在动物感染CHUV的早期(约早2周)检测出病毒核酸,更适用于检测病毒载量较低的血液样品,而RT-PCR的扩增产物可以通过测序了解待测病毒的遗传信息。本研究建立的两种检测方法可以互补使用,为CHUV的早期检测和流行病学研究等提供了快速、方便、可靠的技术支撑。 展开更多
关键词 中山病病毒 荧光定量RT-PCR 常规RT-PCR 病毒检测
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