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嗜铬粒蛋白N区抗真菌活性片段研究
被引量：
10
1
作者
李瑞芳
张添元
+4 位作者
罗进贤
王芳宇
顾取良
甘菁菁
肖凡
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期64-67,共4页
为寻找高效低毒的抗真菌药物,利用PCR技术扩增了编码人嗜铬粒蛋白N端18-76、18-66和31-76位氨基酸(CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76)的DNA片段,将之克隆进枯草杆菌诱导型表达载体pSBPTQ,获得3种重组质粒pSC18-76、pSC18-66和pSC31-76,转...
为寻找高效低毒的抗真菌药物,利用PCR技术扩增了编码人嗜铬粒蛋白N端18-76、18-66和31-76位氨基酸(CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76)的DNA片段,将之克隆进枯草杆菌诱导型表达载体pSBPTQ,获得3种重组质粒pSC18-76、pSC18-66和pSC31-76,转化枯草杆菌DB1342。SDS-PAGE分析结果显示:经蔗糖诱导后,CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76片段分别在枯草杆菌工程菌中获得表达,产物分泌到细胞外。表达量分别为5.6 mg/L、5.3 mg/L和5.6 mg/L。利用孔穴琼脂扩散法检测表达产物的抗真菌活性,并与CGA1-76进行比较,发现CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76对烟曲霉菌、黄曲霉菌、石膏样小孢子菌和白念珠菌均有抑制作用,并以CGA31-76对白念珠菌的抑制作用为最强,CGA18-66对除白念珠菌之外的另3种测试真菌的抑制作用较强,而CGA18-76对测试真菌的抑制作用最弱。
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关键词
嗜铬粒蛋白
n
区
枯草杆菌
抗真菌活性
活性区域
下载PDF
职称材料
嗜铬粒蛋白N端片段基因在枯草杆菌中的表达及表达产物的活性分析
被引量：
4
2
作者
李瑞芳
罗进贤
张添元
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期274-278,共5页
嗜铬粒蛋白 (CGA)是存在于分泌细胞的由 43 9个氨基酸组成的可溶性蛋白。近年的研究发现CGA的N端具有抗血管收缩、抗细菌和抗真菌的功能。为了寻找高效低毒的抗真菌片段 ,利用PCR技术扩增了编码人嗜铬粒蛋白N端 1 76位氨基酸 (CGA1 76)...
嗜铬粒蛋白 (CGA)是存在于分泌细胞的由 43 9个氨基酸组成的可溶性蛋白。近年的研究发现CGA的N端具有抗血管收缩、抗细菌和抗真菌的功能。为了寻找高效低毒的抗真菌片段 ,利用PCR技术扩增了编码人嗜铬粒蛋白N端 1 76位氨基酸 (CGA1 76)的DNA片段 ,并将之克隆进本实验构建的枯草杆菌诱导型表达载体pSBPTQ ,获得含CGA1 76基因的重组质粒pSVTQ ,转化蛋白酶三缺陷的枯草杆菌DB40 3。经蔗糖诱导后 ,CGA1 76片段在枯草杆菌DB40 3 (pSVTQ)中获得表达 ,产物分泌到细胞外 ,分泌量约为 5mg L ,占总分泌蛋白的 13 3 %。测试了表达产物对几种丝状真菌和酵母的抑制作用 ,发现在 4μmol L的浓度下 ,枯草杆菌表达的重组CGA1 76对镰刀菌。
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关键词
嗜铬粒蛋白
枯草杆菌
基因表达
抗真菌活件
酵母
丝状真菌
浓度
CGA
下载PDF
职称材料
利用枯草杆菌整合表达嗜铬粒蛋白抗真菌片段
被引量：
4
3
作者
李瑞芳
罗进贤
+3 位作者
张添元
贺国安
吴江雪
官文俊
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期73-75,共3页
为实现CGA1-76片段基因在枯草杆菌中的稳定表达,将CGA1-76片段基因的表达元件重组到枯草杆菌转座子质粒pHV1249微转座子mini＿Tn10内,利用mini＿Tn10将CGA1-76片段基因的表达元件整合到枯草杆菌DB1342染色体上,用氯霉素和红霉素筛选枯...
为实现CGA1-76片段基因在枯草杆菌中的稳定表达,将CGA1-76片段基因的表达元件重组到枯草杆菌转座子质粒pHV1249微转座子mini＿Tn10内,利用mini＿Tn10将CGA1-76片段基因的表达元件整合到枯草杆菌DB1342染色体上,用氯霉素和红霉素筛选枯草杆菌转座工程菌DB1342(TnSVTQ)。DB1342(TnSVTQ)在无选择压力条件下经10d连续传代培养,转座子内氯霉素抗性丢失率为0%,说明转座子稳定整合在DB1342染色体上。SDS＿PAGE和免疫印迹分析结果表明,在蔗糖诱导下,CGA1-76片段基因在DB1342(TnSVTQ)中获得表达,产物被分泌到细胞外。孔穴琼脂扩散法测定表达上清的抑制真菌活性,结果表明重组CGA1-76能抑制烟曲霉菌和黄曲霉菌的生长,抑菌圈直径分别为9mm和8mm。
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关键词
嗜铬粒蛋白
n
区
基因表达
枯草杆菌
微转座子
抗真菌活性
下载PDF
职称材料
题名
嗜铬粒蛋白N区抗真菌活性片段研究
被引量：
10
1
作者
李瑞芳
张添元
罗进贤
王芳宇
顾取良
甘菁菁
肖凡
机构
中山大学生命科学学院//基因工程教育部重点实验室
出处
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期64-67,共4页
基金
广东省自然科学基金资助项目(011207)
文摘
为寻找高效低毒的抗真菌药物,利用PCR技术扩增了编码人嗜铬粒蛋白N端18-76、18-66和31-76位氨基酸(CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76)的DNA片段,将之克隆进枯草杆菌诱导型表达载体pSBPTQ,获得3种重组质粒pSC18-76、pSC18-66和pSC31-76,转化枯草杆菌DB1342。SDS-PAGE分析结果显示:经蔗糖诱导后,CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76片段分别在枯草杆菌工程菌中获得表达,产物分泌到细胞外。表达量分别为5.6 mg/L、5.3 mg/L和5.6 mg/L。利用孔穴琼脂扩散法检测表达产物的抗真菌活性,并与CGA1-76进行比较,发现CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76对烟曲霉菌、黄曲霉菌、石膏样小孢子菌和白念珠菌均有抑制作用,并以CGA31-76对白念珠菌的抑制作用为最强,CGA18-66对除白念珠菌之外的另3种测试真菌的抑制作用较强,而CGA18-76对测试真菌的抑制作用最弱。
关键词
嗜铬粒蛋白
n
区
枯草杆菌
抗真菌活性
活性区域
Keywords
chromogranin
A
n
domain
Bacillus
subtilis
a
n
tifu
n
gal
activity
active
domain
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
嗜铬粒蛋白N端片段基因在枯草杆菌中的表达及表达产物的活性分析
被引量：
4
2
作者
李瑞芳
罗进贤
张添元
机构
中山大学生命科学学院
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期274-278,共5页
基金
广东省自然科学基金资助 (No .0 1 1 2 0 7)~~
文摘
嗜铬粒蛋白 (CGA)是存在于分泌细胞的由 43 9个氨基酸组成的可溶性蛋白。近年的研究发现CGA的N端具有抗血管收缩、抗细菌和抗真菌的功能。为了寻找高效低毒的抗真菌片段 ,利用PCR技术扩增了编码人嗜铬粒蛋白N端 1 76位氨基酸 (CGA1 76)的DNA片段 ,并将之克隆进本实验构建的枯草杆菌诱导型表达载体pSBPTQ ,获得含CGA1 76基因的重组质粒pSVTQ ,转化蛋白酶三缺陷的枯草杆菌DB40 3。经蔗糖诱导后 ,CGA1 76片段在枯草杆菌DB40 3 (pSVTQ)中获得表达 ,产物分泌到细胞外 ,分泌量约为 5mg L ,占总分泌蛋白的 13 3 %。测试了表达产物对几种丝状真菌和酵母的抑制作用 ,发现在 4μmol L的浓度下 ,枯草杆菌表达的重组CGA1 76对镰刀菌。
关键词
嗜铬粒蛋白
枯草杆菌
基因表达
抗真菌活件
酵母
丝状真菌
浓度
CGA
Keywords
chromogranin
A
n
domain
,
ge
n
e
expressio
n
,
\%Bacillu
s
subtilis\%,
a
n
tifu
n
gal
activities
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
Q51
下载PDF
职称材料
题名
利用枯草杆菌整合表达嗜铬粒蛋白抗真菌片段
被引量：
4
3
作者
李瑞芳
罗进贤
张添元
贺国安
吴江雪
官文俊
机构
中山大学生命科学学院∥基因工程教育部重点实验室
出处
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期73-75,共3页
基金
广东省自然科学基金资助项目(011207)
文摘
为实现CGA1-76片段基因在枯草杆菌中的稳定表达,将CGA1-76片段基因的表达元件重组到枯草杆菌转座子质粒pHV1249微转座子mini＿Tn10内,利用mini＿Tn10将CGA1-76片段基因的表达元件整合到枯草杆菌DB1342染色体上,用氯霉素和红霉素筛选枯草杆菌转座工程菌DB1342(TnSVTQ)。DB1342(TnSVTQ)在无选择压力条件下经10d连续传代培养,转座子内氯霉素抗性丢失率为0%,说明转座子稳定整合在DB1342染色体上。SDS＿PAGE和免疫印迹分析结果表明,在蔗糖诱导下,CGA1-76片段基因在DB1342(TnSVTQ)中获得表达,产物被分泌到细胞外。孔穴琼脂扩散法测定表达上清的抑制真菌活性,结果表明重组CGA1-76能抑制烟曲霉菌和黄曲霉菌的生长,抑菌圈直径分别为9mm和8mm。
关键词
嗜铬粒蛋白
n
区
基因表达
枯草杆菌
微转座子
抗真菌活性
Keywords
chromogranin
A
n
domain
ge
n
e
expressio
n
Bacillus
subtilis
mi
n
i-T
n
10
a
n
tifu
n
gal
activity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
嗜铬粒蛋白N区抗真菌活性片段研究
李瑞芳
张添元
罗进贤
王芳宇
顾取良
甘菁菁
肖凡
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
10
下载PDF
职称材料
2
嗜铬粒蛋白N端片段基因在枯草杆菌中的表达及表达产物的活性分析
李瑞芳
罗进贤
张添元
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
4
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职称材料
3
利用枯草杆菌整合表达嗜铬粒蛋白抗真菌片段
李瑞芳
罗进贤
张添元
贺国安
吴江雪
官文俊
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004
4
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职称材料
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