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软骨细胞老化过程中胞外基质表达水平的改变 被引量:11
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作者 陆峻泓 李卿 +5 位作者 刘伟 陈瑾君 刘德莉 吴娟娟 崔磊 曹谊林 《中华创伤骨科杂志》 CAS CSCD 2003年第3期225-228,共4页
目的研究猪耳软骨细胞在体外培养传代过程中,细胞老化相关基因和胞外基质相关基因表达水平的改变。方法取体外培养猪耳软骨细胞,通过光镜,对各代细胞的形态学变化进行观测。RT-PCR检测各代细胞中bcl-2、端粒酶、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原在mRN... 目的研究猪耳软骨细胞在体外培养传代过程中,细胞老化相关基因和胞外基质相关基因表达水平的改变。方法取体外培养猪耳软骨细胞,通过光镜,对各代细胞的形态学变化进行观测。RT-PCR检测各代细胞中bcl-2、端粒酶、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原在mRNA表达水平上的改变。结果体外培养软骨细胞随着老化的进程,逐渐显现衰老和凋亡的特征。凋亡抑制基因bcl-2和控制细胞分裂的端粒酶的表达显著下降(P<0.01)。软骨细胞的特征性基质分子Ⅱ型胶原在第3代时表达水平有显著下降(P<0.01),降至原代细胞的5.47%±1.04%,在第4代几乎不再表达。而Ⅰ型胶原在第5代时,有显著上升(P<0.01);在第9代时又显著下降(P<0.01)。结论猪软骨细胞经体外培养,由第4代起逐渐发生去分化,丧失软骨细胞的表型。同时,细胞的增殖分裂能力亦逐步减退,细胞凋亡现象明显增加。 展开更多
关键词 软骨细胞 细胞老化 胞外基质 基因表达 细胞分裂
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细胞外基质在骨关节炎发生、发展中的作用及临床研究价值 被引量:11
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作者 廖建钊 夏天 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2022年第12期1937-1943,共7页
背景:细胞外基质代谢失衡影响结构支持作用、细胞间信号转导和细胞增殖、分化及迁移等细胞行为,在骨关节炎发生、发展中发挥着重要作用。目的:阐释细胞外基质在骨关节炎发生、发展中的作用,并分析其在骨关节炎诊断、治疗等方面的应用前... 背景:细胞外基质代谢失衡影响结构支持作用、细胞间信号转导和细胞增殖、分化及迁移等细胞行为,在骨关节炎发生、发展中发挥着重要作用。目的:阐释细胞外基质在骨关节炎发生、发展中的作用,并分析其在骨关节炎诊断、治疗等方面的应用前景。方法:检索MEDLINE、PubMed、万方和中国知网数据库收录的2014-2021年发表的与细胞外基质在骨关节炎发生、发展中的作用相关文献。中文检索词:"骨关节炎、软骨、软骨细胞、细胞外基质、治疗、信号通路、生物标记物、组织工程",英文检索词:"Osteoarthritis,Cartilage,Cartilage cells,Extracellular matrix,Treatment,Signaling pathway,Biomarkers,Tissue engineering"。结果与结论:(1)细胞外基质作为关节软骨的重要组成部分,除为软骨细胞提供营养外,还形成了具有一定保护作用且适合软骨细胞生长的复杂三维结构。(2)细胞外基质是软骨细胞与外界环境进行信息交换的场所,感受外界刺激并作出响应,进而调节软骨细胞增殖及凋亡等行为。(3)细胞外基质中还含有大量生物标记物因子,如Ⅱ型胶原降解的标记物Ⅱ型胶原羧基端端肽、Ⅱ型胶原α1和基质金属蛋白酶等,可作为包括骨关节炎在内的多种疾病的辅助诊断及鉴别诊断。(4)基于细胞外基质的组织工程策略目前已被广泛应用于多种组织再生的研究中,如单纯的脱细胞细胞外基质支架、负载干细胞或特定药物诱导细胞行为的细胞外基质支架、仿生天然细胞外基质结构和生物学功能的复合支架等,在软骨组织工程中占据着重要地位。(5)软骨细胞外基质在骨关节炎发生、发展、诊断及治疗等方面均有着广阔的研究和应用前景,但目前软骨细胞外基质的变化与骨关节炎发生、发展相关的研究较少,而临床应用研究更少。(6)如何在骨关节炎的诊断、预防和治疗中充分利用细胞外基质的理化性质并 展开更多
关键词 骨关节炎 软骨 软骨细胞 细胞外基质 治疗 信号通路 生物标记物 组织工程
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白藜芦醇激活PI3K/Akt信号通路对软骨细胞细胞外基质合成的影响 被引量:11
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作者 林健静 曾晖 +3 位作者 肖德明 于斐 袁昊 孙军营 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第13期1220-1224,共5页
[目的]通过白藜芦醇刺激体外培养的小鼠膝关节软骨细胞,探讨白藜芦醇通过PI3K/Akt信号通路对软骨细胞细胞外基质合成的影响。[方法]体外分离培养小鼠膝关节软骨细胞,采用HE染色、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色观察鉴定软骨细胞。... [目的]通过白藜芦醇刺激体外培养的小鼠膝关节软骨细胞,探讨白藜芦醇通过PI3K/Akt信号通路对软骨细胞细胞外基质合成的影响。[方法]体外分离培养小鼠膝关节软骨细胞,采用HE染色、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色观察鉴定软骨细胞。根据作用药物的不同分为3组:空白对照组、白藜芦醇组(100μmol/L白藜芦醇)和LY294002组(100μmol/L白藜芦醇+25μmol/L LY294002)。采用RT-PCR检测软骨细胞中Akt1,Aggrecan、Collagen II的m RNA表达水平。[结果]荧光显微镜下可见软骨细胞胞核呈蓝色荧光,胞质呈红色荧光。显示Ⅱ型胶原染色阳性细胞数占90%以上,证实所培养细胞为软骨细胞。RT-PCR检测结果显示白藜芦醇组Akt1、Aggrecan、Collagen II m RNA表达量较空白组明显升高(P<0.05)。LY294002组Akt1、Aggrecan、Collagen II m RNA表达量较白藜芦醇组下降,但仍高于空白组(P<0.05)。[结论]白藜芦醇可以通过激活PI3K/Akt信号通路,增加软骨细胞细胞外基质合成,起到保护关节软骨的作用。 展开更多
关键词 白藜芦醇 PI3K/AKT信号通路 软骨细胞 细胞外基质
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介导软骨细胞相关机制调控骨性关节炎的长链非编码RNA 被引量:3
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作者 陈财 曾平 刘金富 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第29期4729-4735,共7页
背景:作为在软骨中发现的唯一一种细胞,软骨细胞在骨性关节炎中的作用受到了广泛的关注。越来越多的研究发现长链非编码RNA能够通过影响软骨细胞的各种基本细胞特征从而参与骨性关节炎的发病机制。目的:综述长链非编码RNA在骨性关节炎... 背景:作为在软骨中发现的唯一一种细胞,软骨细胞在骨性关节炎中的作用受到了广泛的关注。越来越多的研究发现长链非编码RNA能够通过影响软骨细胞的各种基本细胞特征从而参与骨性关节炎的发病机制。目的:综述长链非编码RNA在骨性关节炎软骨细胞中的研究进展,为骨性关节炎寻找更多的诊断和治疗靶标。方法:通过中国知网及PubMed数据库,以“骨性关节炎,长链非编码RNA,软骨细胞,自噬”为中文关键词;以“osteoarthritis;non-coding RNAs;long non-coding RNAs;chondrocytes;chondrocytes proliferation;chondrocytes autophagy;chondrocytes inflammation;chondrocytes extracellular matrix”为英文关键词,搜索2007-2022年在骨性关节炎中与长链非编码RNA有关的文献,排除重复研究、可信度低及无参考意义文献,共纳入62篇文献进行分析、归纳、总结。结果与结论:①长链非编码RNA能够通过调节软骨细胞增殖、自噬、炎症反应和细胞外基质合成等机制进而影响骨性关节炎的发展;②长链非编码RNA有可能成为骨性关节炎诊断或治疗的潜在生物标志物。 展开更多
关键词 骨性关节炎 长链非编码RNA 软骨细胞 软骨细胞增殖 软骨细胞自噬 炎症反应 细胞外基质 综述
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体外培养骺板、关节及肋软骨细胞外基质中糖胺多糖含量的检测和比较 被引量:6
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作者 陶凌晖 周强 +1 位作者 戴刚 李起鸿 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期172-174,共3页
目的 建立定量检测体外培养软骨细胞外基质中糖胺多糖 (GAG)含量的方法 ,以评价体外培养骺板、关节及肋软骨细胞的生物学功能活性。 方法 改进的二甲基亚甲蓝 (DMB)比色法测定细胞外基质的糖胺多糖含量 ,细胞 -玻片甲苯胺蓝 (TB)染... 目的 建立定量检测体外培养软骨细胞外基质中糖胺多糖 (GAG)含量的方法 ,以评价体外培养骺板、关节及肋软骨细胞的生物学功能活性。 方法 改进的二甲基亚甲蓝 (DMB)比色法测定细胞外基质的糖胺多糖含量 ,细胞 -玻片甲苯胺蓝 (TB)染色光镜观察。 结果 原代软骨细胞具有最高的GAG分泌活性 ,骺板 (70 .12± 7.72 ) μg cm2 ,关节 (92 .0 0± 10 .15 ) μg cm2 ,肋软骨(80 .61± 11.40 ) μg cm2 ,至第三代则出现了非常明显的下降 ,骺板 (5 3 .2 7± 9.5 0 ) μg cm2 ,关节 (63 .88± 11.92 ) μg cm2 ,肋软骨 (5 8.94± 8.2 1) μg cm2 ;TB染色结果与GAG含量变化相一致。三种软骨细胞间比较差异无显著性意义。 结论 在体外培养过程中 ,软骨细胞随传代次数的增加而其功能活性逐渐降低 ,第三代以后的软骨细胞不适于作为组织工程种子细胞。DMB比色法准确、灵敏 ,可作为一种用于评价体外培养软骨细胞功能活性的有效分析方法。 展开更多
关键词 糖胺多糖 软骨细胞 细胞外基质
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脱细胞软骨细胞外基质匀浆联合氧化苦参碱治疗大鼠骨关节炎
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作者 吴富章 张鹏礼 +2 位作者 章振华 何永兵 孙和炎 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第13期2675-2682,共8页
背景:脱细胞软骨细胞外基质治疗骨关节炎具有一定的效果,但其单独应用时的治疗效果有限。氧化苦参碱可缓解白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡和细胞外基质降解。目的:观察不同剂量氧化苦参碱与脱细胞软骨细胞外基质联合膝关节腔注射对大... 背景:脱细胞软骨细胞外基质治疗骨关节炎具有一定的效果,但其单独应用时的治疗效果有限。氧化苦参碱可缓解白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡和细胞外基质降解。目的:观察不同剂量氧化苦参碱与脱细胞软骨细胞外基质联合膝关节腔注射对大鼠骨关节炎的治疗作用。方法:获取SD大鼠股骨软骨,采用物理、化学与酶相结合的方法制备脱细胞软骨细胞外基质。取50只SD大鼠,利用随机数字表法分为假手术组、骨关节炎组、单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组,每组10只,后4组采用改良Hulth法建立大鼠骨关节炎模型。造模成功后,单纯材料组大鼠膝关节腔注射脱细胞软骨细胞外基质匀浆,低剂量药物组、高剂量药物组膝关节腔分别注射含50,100μg氧化苦参碱的脱细胞软骨细胞外基质匀浆。注射4周后取材进行相关检测。结果与结论:①与假手术组比较,骨关节炎组关节腔积液中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子ɑ、丙二醛水平升高(P<0.05),超氧化物歧化酶水平降低(P<0.05);与骨关节炎组比较,低剂量药物组、高剂量药物组关节腔积液中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子ɑ、丙二醛水平降低(P<0.05),超氧化物歧化酶水平升高(P<0.05),其中高剂量药物组变化更显著。②Tunel染色显示,与假手术组相比,骨关节炎组凋亡软骨细胞增多;与骨关节炎组相比,单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组凋亡软骨细胞减少,其中高剂量药物组减少更显著。③苏木精-伊红与免疫组化染色显示,骨关节炎组大鼠膝关节软骨严重退变,软骨组织中Ⅱ型胶原表达降低(P<0.05)、基质金属蛋白酶9表达升高(P<0.05);与骨关节炎组相比,单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组大鼠膝关节软骨退变明显改善,软骨组织中Ⅱ型胶原表达升高(P<0.05)、基质金属蛋白酶9表达降低(P<0.05),其中高剂量药物组改善最显 展开更多
关键词 骨关节炎 脱细胞软骨细胞外基质 氧化苦参碱 软骨细胞 细胞外基质
基于Caspase-3/PARP通路探究龟鹿二仙胶及拆方对IL-1β诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质的影响
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作者 吴伟欣 郑珍萍 +3 位作者 顾富城 杨美鑫 王和鸣 李楠 《现代中西医结合杂志》 CAS 2024年第1期8-16,共9页
目的 基于半胱氨酸蛋白酶3/多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Caspase-3/PARP)通路探究龟鹿二仙胶及拆方对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质(ECM)的影响。方法 采用SD大鼠制备空白血清、龟鹿二仙胶含药血清、龟甲胶... 目的 基于半胱氨酸蛋白酶3/多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Caspase-3/PARP)通路探究龟鹿二仙胶及拆方对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质(ECM)的影响。方法 采用SD大鼠制备空白血清、龟鹿二仙胶含药血清、龟甲胶含药血清及鹿角胶含药血清,采用酶消法体外培养C57BL/6小鼠软骨细胞。将软骨细胞分为5组,空白组加入空白血清培养,模型组加入IL-1β和空白血清培养,龟鹿组加入IL-1β和龟鹿二仙胶含药血清培养,龟板组加入IL-1β和龟甲胶含药血清培养,鹿角组加入IL-1β和鹿角胶含药血清培养,干预24 h后,采用CCK-8法检测软骨细胞活性,采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况,采用免疫荧光染色法检测Caspase-3、PARP-1表达情况,分别采用Western blot和qRT-PCR法检测细胞中Caspase-3、PARP-1、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)蛋白及mRNA表达情况。结果 与空白组比较,模型组软骨细胞活性明显降低(P<0.05),软骨细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,龟鹿组、龟板组及鹿角组软骨细胞活性均明显升高(P均<0.05),软骨细胞凋亡率均明显降低(P均<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与龟板组、鹿角组比较,龟鹿组软骨细胞活性更高(P均<0.05),软骨细胞凋亡率更低(P均<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均更低(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均更高(P均<0.05)。与龟板组比较,鹿角组软骨细胞活性,软骨细胞凋亡率,细胞中Caspase- 展开更多
关键词 龟鹿二仙胶 软骨细胞 凋亡 细胞外基质 半胱氨酸蛋白酶3 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶
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S100A11-RAGE通过P38MAPK信号转导通路调控小鼠骨关节炎软骨细胞肥大和细胞外基质代谢 被引量:6
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作者 赵晓 黄飞麒 +1 位作者 姚乃婕 陈扬声 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第16期6-11,共6页
目的探讨S100A11-RAGE通过P38MAPK信号转导通路对小鼠骨关节炎软骨细胞肥大和细胞外基质代谢的调控。方法不同浓度的外源性S100A11(0、1.25、2.50、5.00及10.00μg/ml)与小鼠软骨细胞孵育48 h,检测基质金属蛋白酶13(MMP-13)、ADAMTS-5... 目的探讨S100A11-RAGE通过P38MAPK信号转导通路对小鼠骨关节炎软骨细胞肥大和细胞外基质代谢的调控。方法不同浓度的外源性S100A11(0、1.25、2.50、5.00及10.00μg/ml)与小鼠软骨细胞孵育48 h,检测基质金属蛋白酶13(MMP-13)、ADAMTS-5以及Ⅱ型、Ⅹ型胶原蛋白表达,以筛选作用最显著的S100A11浓度。加入不同浓度Anti-P38(0、1.25、2.50、5.00及10.00μg/ml)与小鼠软骨细胞预孵育12 h后,再加入作用最强的外源性S100A11孵育(10μg/ml)48 h,检测MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅱ型、Ⅹ型胶原蛋白表达。结果小鼠软骨细胞MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅹ型胶原蛋白表达随外源性S100A11浓度的增加而增加,且明显高于对照组;而Ⅱ型胶原蛋白表达随外源性S100A11浓度的增加而减少,且明显低于对照组。加入Anti-P38预处理后,MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅹ型胶原蛋白表达均明显低于S100A11单独处理组,而Ⅱ型胶原蛋白表达明显高于S100A11单独处理组。结论外源性S100A11通过与RAGE结合,并经P38MARK信号转导通路诱导软骨细胞肥大和细胞外基质的降解,其机制可能与通过P38MAPK信号转导通路诱导MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅹ型胶原蛋白表达,并降低Ⅱ型胶原蛋白表达。 展开更多
关键词 P38MAPK信号转导通路 软骨细胞肥大 细胞外基质代谢
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基于HSPA5/GPX4信号通路探讨针刀干预膝关节骨关节炎兔软骨细胞铁死亡的作用机制
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作者 孟德鸿 卢曼 +5 位作者 吴三兵 栾国瑞 丁双 赵汉卿 张芬 杨永晖 《中国针灸》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期555-564,共10页
目的:观察针刀疗法对膝关节骨关节炎(KOA)兔膝关节软骨细胞热休克蛋白A家族成员5(HSPA5)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路的影响,探讨针刀干预KOA软骨细胞铁死亡的作用机制。方法:将27只新西兰兔随机分为正常组、模型组和针刀组,每组... 目的:观察针刀疗法对膝关节骨关节炎(KOA)兔膝关节软骨细胞热休克蛋白A家族成员5(HSPA5)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路的影响,探讨针刀干预KOA软骨细胞铁死亡的作用机制。方法:将27只新西兰兔随机分为正常组、模型组和针刀组,每组9只。采用改良Videman法连续固定兔左侧后肢6周建立KOA模型。造模后,针刀组给予针刀干预,每周1次,连续3周。运用奎森功能障碍指数(Lequesne MG评分)评估兔膝关节局部症状、体征及功能;HE染色法与番红-固绿染色法分别观察兔软骨细胞与组织形态;透射电镜观察兔软骨细胞线粒体结构;运用铁离子试剂盒检测兔软骨组织铁含量;流式细胞仪检测兔软骨组织线粒体膜电位(Δψm)和活性氧(ROS)水平,并计算线粒体损伤率;实时荧光定量PCR检测兔软骨组织HSPA5、GPX4、Ⅱ型胶原α1链(COL2A1)、基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13 mRNA表达;Western blot法检测兔软骨组织HSPA5、GPX4、Ⅱ型胶原蛋白(COL-Ⅱ)、MMP3、MMP13蛋白表达;免疫荧光法检测兔软骨组织HSPA5、GPX4平均荧光强度。结果:干预前,与正常组比较,模型组和针刀组兔膝关节Lequesne MG评分升高(P<0.01);干预后,与模型组比较,针刀组兔膝关节Lequesne MG评分降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组兔膝关节软骨细胞数量减少且排列紊乱,软骨结构层次不清,潮线紊乱、模糊不清,线粒体皱缩、线粒体嵴减少甚至消失;与模型组比较,针刀组软骨细胞数量较多,软骨结构层次清楚,潮线恢复,线粒体数量较多,结构正常,有较多的嵴。与正常组比较,模型组软骨组织铁含量增加(P<0.01),细胞呈低Δψm,线粒体损伤率增高(P<0.01),ROS平均荧光强度升高(P<0.01),软骨组织HSPA5、GPX4、COL2A1 mRNA及相应蛋白表达降低(P<0.01),软骨组织MMP3、MMP13 mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),软骨组织HSPA5、GPX4平均荧光强度降低(P<0.01);与模型组比较,针刀组软骨组织铁� 展开更多
关键词 膝关节骨关节炎 针刀 软骨细胞铁死亡 细胞外基质 HSPA5/GPX4信号通路
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软骨细胞外基质基因调控与遗传缺陷研究新进展
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作者 金渝瑜(综述 )罗飞宏(审校) 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期164-170,共7页
生长板软骨的生长发育是一个精密的生物学过程,受到细胞外基质、细胞内信号、旁分泌信号、内分泌信号等综合调控。细胞外基质在软骨细胞的结构支持中起着关键作用,作为传递生长因子与软骨发育相关信号分子的介质,调节软骨细胞的生长发... 生长板软骨的生长发育是一个精密的生物学过程,受到细胞外基质、细胞内信号、旁分泌信号、内分泌信号等综合调控。细胞外基质在软骨细胞的结构支持中起着关键作用,作为传递生长因子与软骨发育相关信号分子的介质,调节软骨细胞的生长发育。文章对软骨细胞外基质的结构、功能,编码软骨细胞外基质基因的致病性变异影响骨骼发育的机制,以及致病性变异与表型的相关性等方面进行综述,旨在为临床软骨细胞外基质变异造成的遗传缺陷性疾病的诊断和治疗提供理论参考。 展开更多
关键词 软骨细胞 生长板 细胞外基质 骨骼发育不良 遗传缺陷
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17β-雌二醇对白细胞介素1-β诱导的软骨细胞损伤的抑制作用
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作者 王琮仁 郭祥 +2 位作者 金旭红 吴多庆 孔长庚 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期1250-1252,共3页
目的探讨17β-雌二醇(E2)对白细胞介素1-β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的抑制作用。方法酶消化法获得软骨细胞,并将细胞分为5组,正常组(含有10%胎牛血清的培养基);IL-1β组(10 ng/ml的IL-1β);1×10^(-9)mol/L组(10 ng/ml的IL-1β+1... 目的探讨17β-雌二醇(E2)对白细胞介素1-β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的抑制作用。方法酶消化法获得软骨细胞,并将细胞分为5组,正常组(含有10%胎牛血清的培养基);IL-1β组(10 ng/ml的IL-1β);1×10^(-9)mol/L组(10 ng/ml的IL-1β+1×10^(-9)mol/L E2);1×10^(-8)mol/L组(10ng/ml的IL-1β+1×10^(-8)mol/LE2);1×10^(-7)mol/L组(10ng/ml的IL-1β+1×10^(-7)mol/LE2)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,膜联蛋白V(AnnexinV)-碘化丙锭(PI)流式双染法检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测前列腺素E2(PGE2)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)硫酸软骨素846(CS846)表达,蛋白质印迹法(Westernblot)检测细胞中环氧化酶-2(COX-2)、B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax),基质金属蛋白酶-3(MMP-3),MMP-13表达及核因子κB(NF-κB)信号通路激活情况。组间比较采用单因素方差分析。结果1×10^(-9)、1×10^(-8)、1×10^(-7)mol/L组细胞活力、bcl-2表达量高于IL-1β组(0.53±0.05、0.61±0.06、0.69±0.06比0.78±0.07,t=6.254,P<0.01),(0.36±0.04、0.68±0.07、1.23±0.12比0.30±0.03,t=5.210,P<0.05),1×10^(-1)×10^(-8)、1×10^(-7)mol/L组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、PGE2含量、COMP含量、CS846含量、COX-2表达量、MMP-13表达量及p-NF-κBp65低于IL-1β组[(6.52±0.66)%、(13.26±1.43)%、(18.54±1.85)%比(23.59±2.54)%,t=6.324,P<0.01]、[(4.23±0.41)%、(6.87±0.69)%、(10.51±1.06)%比(15.84±1.58)%,t=6.746,P<0.01]、[(23.69±2.80)(36.23±3.62)、(48.21±4.82)ng/L比(59.82±5.98)ng/L,t=5.326,P<0.01]、[(0.20±0.02)、(0.35±0.03)、(0.48±0.05)μg/L比(0.62±0.06)μg/L,t=6.329,P<0.01]、[(0.35±0.03)(0.48±0.05)、(0.65±0.03)ng/L比(0.78±0.08)ng/L,t=6.534,P<0.01]、[(0.12±0.01)、(0.04±0.04)、(0.42±0.04)比(1.02±0.10),t=6.359,P<0.01]、[(0.25±0.02)(0.30±0.03)、(0.65±0.07)比(1.02±0.13),t=5.984,P<0.01]、[(0.32±0.03)、(0.42±0.04)、(0.97±0.09)比(1.29±0.13),t=5.364,P<0.01],1×10^(-8)、1×10^(-7)mol/L组bax及MMP-3表达量低于IL-1β组[(0.76±0.07)� 展开更多
关键词 17Β-雌二醇 骨关节炎 软骨细胞 凋亡 细胞外基质
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狗脊多糖调控lncRNA GAS5维持软骨细胞外基质稳态的机制 被引量:3
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作者 付长龙 梅阳阳 +5 位作者 金灵璐 仲卫红 邱志伟 黄艳峰 叶锦霞 陈长兴 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期7379-7383,共5页
目的:探讨狗脊多糖通过调控lncRNA GAS5维持软骨细胞外基质稳态的机制。方法:构建lncRNA GAS5沉默软骨细胞;FISH检测lncRNA GAS5在软骨细胞中的表达情况;sh-lncRNA GAS5转染软骨细胞后,Western blot检测金属基质蛋白酶(MMP)-3、解聚蛋... 目的:探讨狗脊多糖通过调控lncRNA GAS5维持软骨细胞外基质稳态的机制。方法:构建lncRNA GAS5沉默软骨细胞;FISH检测lncRNA GAS5在软骨细胞中的表达情况;sh-lncRNA GAS5转染软骨细胞后,Western blot检测金属基质蛋白酶(MMP)-3、解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)-4、ADAMTS-5、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的蛋白含量表达;采用Real-time PCR和Western blot分别检测狗脊多糖对白细胞介素(IL)-1β诱导软骨细胞中lncRNA GAS5水平及相关指标蛋白含量表达。结果:经IL-1β诱导的软骨细胞中lncRNA GAS5相对拷贝数显著增多。与IL-1β+sh-NC组比较,IL-1β+sh-lncRNA GAS5组MMP-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5蛋白表达显著降低(P<0.01),而Aggrecan蛋白表达显著升高(P<0.01)。狗脊多糖可降低IL-1β诱导软骨细胞中lncRNA GAS5水平(P<0.01),下调MMP-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5蛋白含量并上调Aggrecan蛋白含量表达(P<0.01)。结论:狗脊多糖通过调控lncRNA GAS5,影响MMP-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5、Aggrecan表达,进而维持软骨细胞外基质趋于稳态。 展开更多
关键词 骨关节炎 狗脊多糖 软骨细胞外基质 长链非编码RNA 退变
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急性消化成年兔膝关节软骨单位与软骨细胞基因表达分析
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作者 段王平 郝永壮 +7 位作者 宋文杰 赵瑞鹏 任晓春 赵昱 李琦 孙振伟 李鹏翠 卫小春 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期459-463,共5页
目的探讨急性消化成年兔膝关节软骨单位和软骨细胞基因表达的差异。方法8月龄新西兰兔5只,无菌条件剖取双膝关节股骨髁全层软骨组织,左侧膝关节软骨组织采用0.4%Pronase酶和0.025%Ⅱ型胶原酶依次酶解消化获取软骨细胞,右侧膝关节软骨组... 目的探讨急性消化成年兔膝关节软骨单位和软骨细胞基因表达的差异。方法8月龄新西兰兔5只,无菌条件剖取双膝关节股骨髁全层软骨组织,左侧膝关节软骨组织采用0.4%Pronase酶和0.025%Ⅱ型胶原酶依次酶解消化获取软骨细胞,右侧膝关节软骨组织采用0.3%dispase酶和0.2%Ⅱ型胶原酶联合搅拌酶解消化3 h获取兔膝关节骨单位。通过实时定量PCR对急性消化软骨细胞和软骨单位基因表达进行分析,包括基质蛋白[聚集蛋白聚糖(Agg)、胶原蛋白(Col)-2、Col-6A6、Col-10、Col-11]、MMPs及MMPs抑制因子(TIMPs)(MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3)、性别决定区Y-框蛋白9(Sox)-9及细胞骨架蛋白(黏着斑蛋白、微管蛋白、肌动蛋白)、炎症因子(IL-1β、TNF-α)。采用SPSS 16.0统计软件进行分析,采用t检验,以P<0.05表示差异具有统计学意义。结果与软骨细胞相比,软骨单位中Agg[(5.78±0.90)与(1.89±0.27),t=9.26,P<0.001]、Col-2[(6.29±0.76)与(3.06±0.60),t=7.46,P<0.001]、Col-6A6[(0.89±0.18)与(0.22±0.06),t=7.90,P<0.001]、Col-10[(3.83±0.76)与(1.00±0.26),t=7.88,P<0.001]及TIMP-1[(1.98±0.85)与(1.03±0.34),t=2.32,P=0.049]、TIMP-2[(3.46±1.50)与(1.52±1.06,t=2.36,P=0.046]、TIMP-3[(3.96±0.50)与(1.36±0.18),t=10.94,P<0.001]、Sox-9[(7.09±2.93)与(3.24±0.77),t=2.84,P=0.022]、黏着斑蛋白[(3.42±1.69)与(1.46±0.68),t=2.41,P=0.043]、微管蛋白(9.34±0.71)与(2.35±0.80),t=14.61,P<0.001]表达较高,差异具有统计学意义。与软骨细胞相比,在软骨单位中MMP-1[(1.02±0.30)与(2.67±0.45),t=6.91,P<0.001]、MMP-3[(1.21±0.32)与(2.52±0.79),t=3.44,P=0.009]、MMP-13[(1.23±0.34)与(3.42±0.86),t=5.30,P=0.007]、IL-1β[(1.02±0.14)与(2.70±0.49),t=7.37,P<0.001]、TNF-α[(0.99±0.08)与(3.15±0.54),t=8.85,P<0.001]表达低,差异具有统计学意义。Col-11、MMP-9、肌动蛋白在软骨单位及软骨细胞中表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论与单纯软骨细胞相比,急性消化软骨� 展开更多
关键词 软骨细胞 细胞外基质 基质金属蛋白酶类 软骨单位
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过氧化氢体外诱导人关节软骨细胞外基质降解研究 被引量:4
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作者 杨朋 胡晓青 +4 位作者 傅欣 刘强 张继英 段小宁 敖英芳 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期306-311,共6页
目的:研究人关节软骨细胞在体外模型中,氧分压增高对关节软骨细胞的影响。方法:建立过氧化氢诱导人软骨细胞损伤模型,采用CCK-8试剂检测过氧化氢刺激关节软骨细胞后的细胞活力,并通过RT-PCR和Western Blot测定关节软骨细胞中Ⅱ型胶原(CO... 目的:研究人关节软骨细胞在体外模型中,氧分压增高对关节软骨细胞的影响。方法:建立过氧化氢诱导人软骨细胞损伤模型,采用CCK-8试剂检测过氧化氢刺激关节软骨细胞后的细胞活力,并通过RT-PCR和Western Blot测定关节软骨细胞中Ⅱ型胶原(COLⅡ)、粘多糖(ACAN)、金属蛋白酶13(MMP13)和含血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶5(ADAMTS5)等软骨基质相关基因的表达水平。结果:一定量浓度的过氧化氢体外刺激人关节软骨细胞后,在12 h时,细胞活力升高,在24 h时,细胞活力下降;过氧化氢刺激软骨细胞24 h后检测COLⅡ和ACAN,其表达水平下降(P<0.05),而MMP13和ADAMTS5表达水平升高(P>0.05)。结论:过氧化氢模拟的软骨细胞外活性氧浓度增高会影响软骨细胞基质的合成与降解。 展开更多
关键词 过氧化氢 关节软骨细胞 细胞外基质 骨关节炎
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靛玉红可减轻骨关节炎大鼠的软骨细胞炎症和损伤 被引量:2
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作者 陈昕 齐秀春 +4 位作者 曹玉净 李扬 李浩亮 王前进 艾进伟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1381-1388,共8页
目的探讨靛玉红对大鼠骨关节炎症和损伤的作用及其机制。方法IL-1β构建骨关节炎细胞模型;0.1、0.5、1、2μmol/L靛玉红分别与IL-1β共同处理细胞;NPAS2 siRNA或non-specificsiRNA转染细胞;四甲基噻唑蓝染色法检测细胞增殖;流式细胞仪... 目的探讨靛玉红对大鼠骨关节炎症和损伤的作用及其机制。方法IL-1β构建骨关节炎细胞模型;0.1、0.5、1、2μmol/L靛玉红分别与IL-1β共同处理细胞;NPAS2 siRNA或non-specificsiRNA转染细胞;四甲基噻唑蓝染色法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Westernblot检测BAX、Bcl-2、ACAN、COL2A1、MMP-13和NPAS2蛋白含量;ELISA检测细胞培养上清液NO、PGE2和TNF-α含量,实时荧光定量PCR检测NPAS2、ACAN、COL2A1和MMP-13 mRNA含量;构建C57BL/6小鼠骨关节炎模型,Westernblot检测靛玉红对骨关节组织BAX、Bcl-2、ACAN和MMP-13蛋白含量的影响。结果0.1μmol/L靛玉红对软骨细胞增殖、凋亡、caspase-3活性、BAX和Bcl-2蛋白表达水平无显著影响;0.5、1和2μmol/L靛玉红上调细胞增殖量和Bcl-2蛋白含量,降低凋亡、caspase-3活性和BAX蛋白含量(P<0.05);0.5μmol/L靛玉红上调NPAS2、ACAN和COL2A1蛋白和mRNA含量,下调MMP-13蛋白和mRNA、NO、PGE2和TNF-α含量(P<0.05);干扰NPAS2表达可显著抑制0.5μmol/L靛玉红对IL-1β诱导的软骨细胞炎症和损伤的保护作用;小鼠骨关节炎模型中BAX和MMP-13蛋白含量上升(P<0.01),而Bcl-2(P<0.05)和ACAN(P<0.01)下降;靛玉红抑制小鼠关节组织中BAX和MMP-13蛋白含量(P<0.01),上调Bcl-2和ACAN蛋白含量(P<0.05)。结论靛玉红对骨关节炎组织具有保护作用并可能通过NPAS2调节骨关节炎软骨细胞炎症和损伤。 展开更多
关键词 靛玉红 软骨细胞 NPAS2 炎症因子 细胞外基质 骨关节炎
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体外持续传代引起小鼠透明软骨细胞表型和细胞外基质平衡变化的研究 被引量:2
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作者 蔡林奕 孔祥丽 谢静 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期248-254,共7页
目的研究体外持续传代对透明软骨细胞形态表型、分化特性及细胞外基质(ECM)平衡状态的影响。方法酶消化法分离培养小鼠透明软骨细胞,连续传代至第5代。采用苏木精-伊红染色观察软骨细胞的形态改变,采用半定量聚合酶链式反应分析软骨细... 目的研究体外持续传代对透明软骨细胞形态表型、分化特性及细胞外基质(ECM)平衡状态的影响。方法酶消化法分离培养小鼠透明软骨细胞,连续传代至第5代。采用苏木精-伊红染色观察软骨细胞的形态改变,采用半定量聚合酶链式反应分析软骨细胞特异性基因、常规基因、基质金属蛋白酶家族(MMPs)和基质金属蛋白酶组织抑制剂家族(TIMPs)m RNA水平的变化,采用明胶酶谱分析鉴定软骨细胞明胶酶活性的改变。结果随着传代次数增加,软骨细胞形态由圆形或多边形变为长梭形,其特异性基因的表达量明显下降(P<0.05),至第5代已基本丧失。相比而言,常规基因的下调并不明显。MMPs和TIMPs均有下调(P<0.05),仅MMP-1和TIMP-1改变的差异无统计学意义(P>0.05);MMPs/TIMPs比值随传代发生紊乱。在蛋白质水平,随传代次数增加,明胶酶的活性下降,P4和P5代细胞下调显著(P<0.05)。结论软骨细胞在体外培养过程中,其特异性表型特征会随传代次数增加而逐渐丧失,软骨细胞发生反分化而表现出纤维化趋势。同时,ECM的平衡状态被打破,合成与分解代谢紊乱。在利用软骨细胞进行相关疾病的研究或软骨组织工程学实验时,应选用前3代的软骨细胞。 展开更多
关键词 体外传代 透明软骨细胞 细胞表型 细胞外基质 组织工程
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CONCENTRATION DEPENDENCE OF Se EFFECT ON THE CYTOSKELETON AND COLLAGEN MICROFIBRILS OF CHICKEN EMBRYO CHONDROCYTE AND ITS EXTRACELLULAR MATRIX
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作者 吴莲英 孙珊 +2 位作者 及惠芬 林治焕 杨福愉 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1991年第21期1834-1838,共5页
Kaschin-Beck disease (KBD), endemic in China, occurs along a low selenium belt where the Se contents of water, soil, crops and patients’ blood and hair are all in a low state. Supplementation of Na<sub>2</... Kaschin-Beck disease (KBD), endemic in China, occurs along a low selenium belt where the Se contents of water, soil, crops and patients’ blood and hair are all in a low state. Supplementation of Na<sub>2</sub>SeO<sub>3</sub> has been effective in preventing such a disease. The main pathological changes of KBD are the necrosis of cartilage, early 展开更多
关键词 chondrocyte eytoskeleton extracellular matrix COLLAGEN MICROFIBRILS
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The Effects of Extracellular Matrix on Tissue Engineering Construction of Cartilage in Vitro
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作者 YU Li LI Fa-tao TANG Ming-qiao YAN Wei-qun 《Chinese Journal of Biomedical Engineering(English Edition)》 2006年第2期88-92,共5页
The effects of various cartilage extracellular matrix on the construction of rabbit growth plate cartilage tissue in vitro were studied. The results show that collagen, proteoglycan and hyaluronic acid can promote the... The effects of various cartilage extracellular matrix on the construction of rabbit growth plate cartilage tissue in vitro were studied. The results show that collagen, proteoglycan and hyaluronic acid can promote the growth of cultured chondrocytes but the effects of various cartilage extracellular matrix(ECM)on chondrocyte differentiation are different. Collagen can promote the hypertrophy of chondrocytes while proteoglycan and hyaluronic acid inhibit the transition of mature chondrocytes into hypertrophied chondrocytes. 展开更多
关键词 extracellular matrix Tissue engineering cartilage chondrocyte
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塞来昔布对体外培养软骨细胞活性及细胞外基质合成影响的实验研究
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作者 陈乃钱 陈霖 +2 位作者 滕红林 吴春雷 吴云刚 《温州医学院学报》 CAS 2007年第3期227-230,共4页
目的:通过细胞学实验来研究塞来昔布对体外培养软骨细胞活性及细胞外基质合成的影响。方法:用酶消化法分离兔关节软骨细胞,利用相差显微镜和H.E.染色软骨细胞形态学观察,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色,Westernblot检测金属蛋白酶(MMP-1)、MM... 目的:通过细胞学实验来研究塞来昔布对体外培养软骨细胞活性及细胞外基质合成的影响。方法:用酶消化法分离兔关节软骨细胞,利用相差显微镜和H.E.染色软骨细胞形态学观察,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色,Westernblot检测金属蛋白酶(MMP-1)、MMP-3蛋白,阿利新蓝法检测糖氨多糖(GAG)的合成。结果:随传代次数增加,细胞逐渐变大,72h后见细胞大部分贴壁并延伸呈成纤维细胞形态。5w时A组、B组、C组的阳性免疫染色的灰度值A、C组灰度弱于B组(P<0.05),A、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。在3、5w时C组软骨细胞较B组软骨细胞的MMP-1、3蛋白表达量下降,P<0.01,A组在各周无明显变化。3w与5w时A、C组糖氨多糖含量高于B组(P<0.01)。结论:塞来昔布可以抑制IL-1所产生的不良效应;可通过减少MMPs的合成,保护软骨基质的降解来维持细胞活性与细胞外基质的合成。 展开更多
关键词 塞来昔布 软骨细胞 细胞外基质
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Effects of simulated microgravity on the cell growth and extracellular matrix of cultured chondrocytes
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作者 Shuzhang Yang Xiaobing Li +2 位作者 Shengguang Li Peidong Jiang Zhihuan Lin 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1999年第15期1372-1375,共4页
The effects of simulated microgravity on cell growth and extracellular matrix of chondrocytes have been examined by a light microscope and a scanning electron microscope using cultured chicken embryonic chondrocytes a... The effects of simulated microgravity on cell growth and extracellular matrix of chondrocytes have been examined by a light microscope and a scanning electron microscope using cultured chicken embryonic chondrocytes as the model. No notable difference of the cell density between the rotation group and the control group has been found. But during the same period,the growth spots of the rotation group were sparser than those of the control group. These results indicated that the lower level of cell development and differentiation happened in the rotation group. Observation by the scanning electron microscope showed that the extracellualr matrix decreased after rotating, and the fibres in the extracellular matrix were slighter and blurrier than those of the control group. It is concluded that the simulated microgravity can affect the secreting and assembly of the extracellular matrix. The possible mechanism for them is discussed. 展开更多
关键词 chondrocyte simulated MICROGRAVITY extracellular matrix.
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