Chk1/2转基因MGC803细胞系的建立与鉴定 被引量：1

1

作者 陆丽峰 苏波 +5 位作者 姜浩 戴文香 向姝霖 唐海林 凌晖 苏琦 《中南医学科学杂志》 CAS 2013年第2期140-145,共6页

目的构建Chk1/2基因的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌MGC803细胞,为研究Chk1/2功能奠定基础。方法参照野生型Chk1/2基因mRNA全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为... 目的构建Chk1/2基因的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌MGC803细胞,为研究Chk1/2功能奠定基础。方法参照野生型Chk1/2基因mRNA全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成Chk1/2 cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片断,双酶切后定向克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体,经氨苄青霉素筛选阳性重组质粒,菌液PCR及测序法对重组质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染入MGC803细胞,经G418筛选后,RT-PCR及Western blot检测表达产物。结果菌液特异性PCR结果表明克隆的基因片断分别为1.4 kb和1.6 kb,测序分别证实为Chk1和Chk2基因,经NCBIBLAST分析与Genbank中Chk1基因的同源性为100%,编码的氨基酸同源性为100%,Chk2基因的同源性为99%,编码的氨基酸同源性为100%。G418筛选转染细胞4周后获得稳定转染空载体pcD-NA3.1(+)的细胞克隆株和稳定转染重组质粒的MGC803细胞。经RT-PCR及Western blot鉴定,Chk1/2在MGC803细胞中的表达比对照组明显增加。结论成功构建Chk1/2基因真核表达载体与Chk1/2高表达MGC803细胞,为研究二烯丙基二硫诱导MGC803细胞G2/M期阻滞的机制奠定了基础。 展开更多

关键词 chk基因 真核表达 转染 人胃癌MGC803细胞

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Chk1基因沉默增强姜黄素诱导肝癌细胞Huh7凋亡的敏感性 被引量：6

2

作者 王伟章 金小宝 +1 位作者 毛建文 郑敏 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期95-100,共6页

背景与目的:Chk1和Chk2有望成为肿瘤放化疗增敏的新靶点,然而,Chk1/2能否作为姜黄素治疗肿瘤的增敏靶点却很少有研究报道。本研究旨在探讨Chk1/2小干扰RNA(siRNA)对姜黄素诱导肝癌细胞Huh7凋亡的影响,评价其作为姜黄素治疗肝癌增敏靶点... 背景与目的:Chk1和Chk2有望成为肿瘤放化疗增敏的新靶点,然而,Chk1/2能否作为姜黄素治疗肿瘤的增敏靶点却很少有研究报道。本研究旨在探讨Chk1/2小干扰RNA(siRNA)对姜黄素诱导肝癌细胞Huh7凋亡的影响,评价其作为姜黄素治疗肝癌增敏靶点的有效性。方法:Western blot方法检测姜黄素对肝癌细胞Huh7中细胞周期检测点信号通路蛋白的影响;RT-PCR和Western blot方法检测Chk1/2siRNA对Chk1/2mRNA和蛋白的沉默效果;DAPI核染色法分别检测Chk1/2siRNA抑制Chk1/2表达后姜黄素诱导Huh7细胞凋亡的情况;流式细胞术检测Chk1/2表达被沉默后姜黄素对Huh7细胞周期的影响。结果:姜黄素明显抑制细胞周期检测点信号通路蛋白Chk1(S317),Cdc25C(S216)和Cdk1(Y15)蛋白的磷酸化水平;与si-NC转染组相比,Chk1/2siRNA使细胞中Chkl和Chk2mRNA水平分别下降了95%和60%,蛋白水平分别下降了92%和55%(P<0.01);抑制Chk1使姜黄素诱导的细胞凋亡率由(21.3±1.8)%上升到(29.5±2.6)%(P<0.05),抑制Chk2并无此作用;Chk1/2siRNA对姜黄素处理后的Huh7细胞周期均无明显影响。结论:Chk1siRNA能有效提高姜黄素诱导Huh7细胞的凋亡率,提示Chk1可能作为姜黄素治疗肝癌的有效增敏靶点。 展开更多

关键词 chk1基因 姜黄素 肝癌细胞Huh7 凋亡 敏感性

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chk1、chk2反义寡核苷酸转染HL-60细胞株增加其放疗后凋亡敏感性 被引量：2

3

作者 汤屹 刘文励 +3 位作者 周剑锋 万理萍 高庆蕾 吴剑宏 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期253-255,共3页

目的　通过反义封闭chk1、chk2基因 ,阻断细胞周期检测点信号传导通路 ,从而增加HL 6 0细胞放疗敏感性。方法　对HL 6 0细胞进行chk1、chk2正义链和反义链的单转染与共转染 ,于转染后 2 4h进行放射线照射 ,照射后 2 4h用Westernblot测量... 目的　通过反义封闭chk1、chk2基因 ,阻断细胞周期检测点信号传导通路 ,从而增加HL 6 0细胞放疗敏感性。方法　对HL 6 0细胞进行chk1、chk2正义链和反义链的单转染与共转染 ,于转染后 2 4h进行放射线照射 ,照射后 2 4h用Westernblot测量chk1蛋白的变化 ,用流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡率。结果　反义封闭chk1可增加HL 6 0细胞放疗后凋亡敏感性 ,细胞凋亡率为 2 6 .31%,明显高于正义链的 10 .34%,二者比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。转染chk1反义链的HL 6 0细胞G2 /M期阻滞现象减弱 ,G2 /M期细胞为 38.42 %,转染chk1正义链为 5 4.6 4%,二者比较差异有显著性 (P <0 0 1)。联合反义封闭chk1、chk2具有协同增效作用。结论　反义封闭chk1、chk2基因可增加HL 6 0细胞放疗后凋亡敏感性。 展开更多

关键词 白血病 放射治疗 HL-60细胞 chk1基因 chk2基因 反义寡核苷酸类 细胞周期检测点

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槲皮素对前列腺癌PC3细胞Kras及Chk1基因表达的调节作用 被引量：5

4

作者 朱清毅 魏云飞 +6 位作者 刘丽 袁琳 马隆 郑杨 黄卫周 张犁 顾晓箭 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第23期2744-2746,共3页

目的研究槲皮素对前列腺癌(PCa)PC3细胞Kras及Chk1基因表达水平的影响。方法 PC3细胞分为空白对照组(A组)、二甲基亚砜组(B组)和150μmol/L槲皮素处理组(C组)。采用RT-PCR方法检测槲皮素对PCa PC3细胞Kras及Chk1基因表达水平的影响。结... 目的研究槲皮素对前列腺癌(PCa)PC3细胞Kras及Chk1基因表达水平的影响。方法 PC3细胞分为空白对照组(A组)、二甲基亚砜组(B组)和150μmol/L槲皮素处理组(C组)。采用RT-PCR方法检测槲皮素对PCa PC3细胞Kras及Chk1基因表达水平的影响。结果 C组PCa PC3细胞Kras及Chk1基因表达水平较A、B组明显下调(P<0.05)。结论槲皮素可能通过改变Kras及Chk1等基因表达水平抑制PCa PC3细胞的生长。 展开更多

关键词 槲皮素 前列腺癌 KRAS基因 chk1基因

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顺铂作用于宫颈癌HeLa细胞致细胞周期调节因子变化及对细胞周期的阻滞作用 被引量：3

5

作者 朱克修 李玢 +3 位作者 于翠革 曹亚莉 王佳 韩晓兵 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2009年第5期416-419,共4页

目的:探讨细胞周期调节因子atm,chk2,p53基因在顺铂(DDP)诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用.方法:MTT法检测梯度浓度DDP对HeLa细胞的生长抑制率,RT-PCR法和Western Blot法检测DDP作用前后HeLa细胞atm,chk2及p53 mRNA和蛋白的表达.流式细... 目的:探讨细胞周期调节因子atm,chk2,p53基因在顺铂(DDP)诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用.方法:MTT法检测梯度浓度DDP对HeLa细胞的生长抑制率,RT-PCR法和Western Blot法检测DDP作用前后HeLa细胞atm,chk2及p53 mRNA和蛋白的表达.流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化.结果:DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制作用具有浓度和时间依赖性.DDP作用HeLa细胞后atm,chk2,p53 mRNA和蛋白的表达均增强,细胞凋亡增加,细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05).结论:atm,chk2,p53基因与细胞凋亡及G2/M期阻滞有关.干预atm,chk2,p53基因通路有望成为宫颈癌化疗增敏的新策略. 展开更多

关键词 ATM基因 chk2基因 P53基因 细胞周期 宫颈肿瘤 顺铂

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下调Chk1和Chk2基因促进射线照射后HeLa细胞凋亡 被引量：1

6

作者 高庆蕾 叶飞 +4 位作者 邢辉 谢大兴 卢运萍 周剑锋 马丁 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期178-182,共5页

目的探讨下调Chk1和Chk2基因对HeLa细胞射线照射后细胞周期和凋亡的影响及其作用机制。方法应用流式细胞仪检测不同剂量^60Co照射引起的HeLa细胞周期和凋亡的动力学变化，以激光共聚焦显微镜和Western blot法检测转染Chk1和Chk2正义寡... 目的探讨下调Chk1和Chk2基因对HeLa细胞射线照射后细胞周期和凋亡的影响及其作用机制。方法应用流式细胞仪检测不同剂量^60Co照射引起的HeLa细胞周期和凋亡的动力学变化，以激光共聚焦显微镜和Western blot法检测转染Chk1和Chk2正义寡核苷酸（sODN）和反义寡核苷酸（AsODN）对Chk1和Chk2蛋白表达的影响，以AnnexinV—PI法、凋亡细胞的周期特异性检测法及透射电镜观察单独或联合转染Chk1和Chk2反义寡核苷酸对射线照射后HeLa细胞凋亡的影响。结果不同剂量的^60Co照射可引起HeLa细胞不同程度的G2／M期阻滞，15 Gy的^60Co照射48h后，G2／M期细胞可达75．53％±3．72％。当细胞周期阻滞解除后，细胞凋亡明显增加。转染Chk1 AsODN组的早期凋亡、晚期凋亡和死亡细胞共有94．42％±4．78％，明显高于转染Chk1 sODN组（44．35％±2．08％，P〈0．0001）；转染Chk2 AsODN组的凋亡细胞共有93．08％±5．24％，明显高于转染Chk2 sODN组（48．98％±-3．35％，P〈0．0001）；而共转染Chk1和Chk2 AsODN组的凋亡细胞共有94．26％±4．92％，明显高于共转染Chk1和chk2 sODN组（42．46％±2．56％，P〈0．0001）；共转染Chk1和chk2 AsODN组与仅转染Chk1 AsODN或Chk2 AsODN组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。凋亡细胞的周期特异性检测结果显示，转染Chk1和Chk2 sODN引起的凋亡主要来自于G1期细胞，而转染Chk1 AsODN或Chk2 AsODN后，G1期、S期、G2／M期的凋亡细胞均较对应sODN转染组明显增加，尤其共转染Chk1和Chk2 AsODN组更为显著。结论射线照射激活细胞周期检测点信号传导通路引起细胞自我保护，是临床上产生放疗抵抗的主要原因，而阻断该信号通路的关键激酶Chk1或Chk2，可显著增强细胞的放射敏感性，其机制在于改变了凋亡细胞的周期特异性，凋亡细胞可以来自G1、S、G2／M各周期的细胞。 展开更多

关键词 辐射耐受性 chk1基因 chk2基因 HELA细胞系 细胞周期 凋亡

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chk2反义寡核苷酸对顺铂作用下HeLa细胞凋亡的影响 被引量：2

7

作者 朱克修 王佳 +2 位作者 李玢 曹亚莉 韩晓兵 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期189-192,232,共5页

目的观察宫颈癌HeLa细胞转染chk2反义寡核苷酸后,在顺铂作用下对凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度顺铂作用人宫颈癌细胞株HeLa 24、487、2 h后对细胞的生长抑制率。以脂质体为载体将chk2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blo... 目的观察宫颈癌HeLa细胞转染chk2反义寡核苷酸后,在顺铂作用下对凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度顺铂作用人宫颈癌细胞株HeLa 24、487、2 h后对细胞的生长抑制率。以脂质体为载体将chk2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blot检测HeLa细胞中Chk2蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测顺铂作用后细胞凋亡率。结果顺铂对HeLa细胞有生长抑制作用,并有时间和浓度依赖性;反义chk2转染后可明显抑制Chk2蛋白表达(P<0.01),顺铂作用下细胞凋亡率明显高于转染正义链组(P<0.01)。结论反义寡核苷酸封闭chk2基因可增加HeLa细胞对顺铂的凋亡敏感性。 展开更多

关键词 chk2基因 反义核酸技术 宫颈癌 顺铂

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chk2反义寡核苷酸对顺铂诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响 被引量：3

8

作者 朱克修 李玢 +1 位作者 王佳 韩晓兵 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2008年第3期255-258,共4页

目的:观察卵巢癌SKOV-3细胞转染chk2反义寡核苷酸后在顺铂作用下细胞凋亡的变化.方法:用MTT法检测不同浓度顺铂对SKOV-3细胞的抑制率,Western Blot法检测SKOV-3细胞中Chk2蛋白的表达.流式细胞仪及TUNEL法检测转染chk2反义寡核苷酸后顺... 目的:观察卵巢癌SKOV-3细胞转染chk2反义寡核苷酸后在顺铂作用下细胞凋亡的变化.方法:用MTT法检测不同浓度顺铂对SKOV-3细胞的抑制率,Western Blot法检测SKOV-3细胞中Chk2蛋白的表达.流式细胞仪及TUNEL法检测转染chk2反义寡核苷酸后顺铂作用下SKOV-3细胞凋亡情况.结果:顺铂对SKOV-3细胞的生长抑制率随浓度增高和时间延长而升高.Western Blot法检测证实转染chk2反义寡核苷酸后SKOV-3细胞中Chk2蛋白表达受到明显抑制.流式细胞仪检测抑制chk2基因表达后SKOV-3细胞凋亡率为(77.6±1.7)%,明显高于正常组(24.7±1.76)%,空脂质体组(35.6±1.4)%及转染正义寡核苷酸细胞组(47.6±1.2)%.TUNEL法检测结果与流式细胞法一致.结论:chk2可作为卵巢癌增敏治疗的有效靶点. 展开更多

关键词 chk2基因 反义核酸技术 卵巢肿瘤 顺铂

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Chk2反义寡核苷酸对放射线照射诱导的HeLa细胞凋亡的影响 被引量：2

9

作者 朱克修 李玢 +2 位作者 王佳 曹亚莉 韩晓兵 《现代肿瘤医学》 CAS 2008年第10期1665-1668,共4页

目的:观察宫颈癌细胞HeLa转染chk2反义寡核苷酸后,在X射线作用下对凋亡的影响。方法:以脂质体为载体将chk2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blot检测HeLa细胞中Chk2蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测X射线照射后细胞凋亡率。... 目的:观察宫颈癌细胞HeLa转染chk2反义寡核苷酸后,在X射线作用下对凋亡的影响。方法:以脂质体为载体将chk2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blot检测HeLa细胞中Chk2蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测X射线照射后细胞凋亡率。结果:反义封闭chk2可明显抑制Chk2蛋白表达(P<0.01),X射线作用下细胞凋亡率明显高于转染正义链组(P<0.01)。结论:反义封闭chk2基因可增加He-La细胞对X射线照射的凋亡敏感性。 展开更多

关键词 chk2基因 反义核酸技术 宫颈癌 放射敏感性

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chk1反义寡核苷酸增加HeLa细胞顺铂作用下凋亡敏感性 被引量：2

10

作者 朱克修 王佳 +2 位作者 李玢 曹亚莉 韩晓兵 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第19期1768-1770,共3页

目的:通过反义封闭chk1基因,阻断细胞周期检测点信号传导通路,从而增加宫颈癌HeLa细胞对顺铂(DDP)的敏感性.方法:采用MTT法检测梯度浓度DDP作用人宫颈癌细胞株HeLa24,48和72h后对细胞的生长抑制率.以脂质体为载体将chk1正义链和反义链转... 目的:通过反义封闭chk1基因,阻断细胞周期检测点信号传导通路,从而增加宫颈癌HeLa细胞对顺铂(DDP)的敏感性.方法:采用MTT法检测梯度浓度DDP作用人宫颈癌细胞株HeLa24,48和72h后对细胞的生长抑制率.以脂质体为载体将chk1正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western Blot测量Chk1蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测DDP作用后细胞凋亡率.结果:DDP对HeLa细胞有生长抑制作用,并有时间和浓度依赖性.反义封闭chk1基因可抑制Chk1蛋白表达(P<0.01),DDP作用下细胞凋亡率为54.1%,高于转染正义链的34.2%(P<0.01).结论:反义封闭chk1基因可增加HeLa细胞对DDP的凋亡敏感性. 展开更多

关键词 chk1基因 反义核酸技术 宫颈肿瘤 顺铂

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细胞周期检测点激酶1/2基因与放疗敏感性关系 被引量：1

11

作者 朱克修 李玢 +2 位作者 王佳 曹亚莉 韩晓兵 《中国妇幼健康研究》 2008年第6期549-551,644,共4页

目的观察宫颈癌HeLa细胞chk1/2基因表达改变对X射线诱导凋亡的影响。方法以脂质体为载体将chk1/2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blot检测HeLa细胞中chk1/2蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测X射线照射后细胞凋亡率。结果转染... 目的观察宫颈癌HeLa细胞chk1/2基因表达改变对X射线诱导凋亡的影响。方法以脂质体为载体将chk1/2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blot检测HeLa细胞中chk1/2蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测X射线照射后细胞凋亡率。结果转染chk1/2反义寡核苷酸可明显抑制chk1/2蛋白表达(F=22.69,P<0.05),X射线作用下细胞凋亡率明显高于转染正义链组(F=23.65,P<0.05)。结论反义封闭chk1/2基因可增加HeLa细胞对X射线照射的凋亡敏感性。 展开更多

关键词 chk1基因 ehk2基因 反义核酸技术 宫颈癌 放射敏感性

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Chk1基因沉默增强K562/A02细胞对阿霉素敏感性的实验研究 被引量：1

12

作者 王海燕 邹萍 +2 位作者 张敏 游泳 刘芳 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期173-176,共4页

目的研究Chk1基因沉默对人红白血病耐药细胞株K562/A02(耐阿霉素)生长的影响,探讨Chk1在白血病细胞耐药中的作用。方法通过电穿孔转染法将特异性靶向Chk1的短发卡状RNA(shRNA)导入K562/A02细胞,应用RT-PCR、Weston-blot检测细胞内Chk1... 目的研究Chk1基因沉默对人红白血病耐药细胞株K562/A02(耐阿霉素)生长的影响,探讨Chk1在白血病细胞耐药中的作用。方法通过电穿孔转染法将特异性靶向Chk1的短发卡状RNA(shRNA)导入K562/A02细胞,应用RT-PCR、Weston-blot检测细胞内Chk1的表达,经阿霉素作用后,流式细胞术(FCM)检测其细胞周期分布及细胞凋亡率,MTT法检测细胞增殖。结果与对照组和空载体转染组相比,shRNA使细胞中Chk1 mRNA水平下降了66%,蛋白水平下降了60%。抑制Chk1的表达可解除阿霉素引起的G2/M期阻滞;使阿霉素诱导的细胞凋亡率由转染前的(5.67±0.78)%上升到(19.25±1.41)%;在阿霉素浓度为0.4 mg/L、4 mg/L时,细胞的增殖活性分别下降12%、20%。结论靶向Chk1 shRNA有效地抑制了Chk1的表达,阻断了细胞周期检测点信号传导通路,从而增强了K562/A02细胞对阿霉素的敏感性,有可能为临床上克服白血病的化疗耐药提供新的作用靶点及治疗途径。 展开更多

关键词 chk1基因 K562/A02细胞 RNA干扰 白血病细胞耐药

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