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烟曲霉菌壳聚糖酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
被引量：
12
1
作者
梁东春
左爱军
+1 位作者
郭刚
张镜宇
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期539-542,共4页
根据GenBank中发布的烟曲霉菌壳聚糖酶(Aspergillusfumigatuschitosanase,EC3.2.1.132)基因序列人工合成8条DNA长链及4条引物链。DNA链的设计上在不改变壳聚糖酶氨基酸组成的前提下选择大肠杆菌使用频率高的密码子。PCR拼接法扩增壳聚...
根据GenBank中发布的烟曲霉菌壳聚糖酶(Aspergillusfumigatuschitosanase,EC3.2.1.132)基因序列人工合成8条DNA长链及4条引物链。DNA链的设计上在不改变壳聚糖酶氨基酸组成的前提下选择大肠杆菌使用频率高的密码子。PCR拼接法扩增壳聚糖酶基因并克隆入pGEM-Teasy载体进行序列分析,进一步亚克隆入表达载体pGEX-3X。重组质粒pGEX-Csn转化E.coliDH5α,IPTG诱导表达,亲和层析及FactorXa酶解纯化重组Csn。所得重组壳聚糖酶具有降解壳聚糖的生物活性,其活性受温度及pH值的影响。
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关键词
壳聚糖酶基因
克隆
表达
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职称材料
解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶基因的克隆、重组表达及其活性
被引量：
4
2
作者
段静
刘广鑫
+7 位作者
董晏君
周洋
李锦铨
刘小玲
周萌
梁日深
赵丽娟
林蠡
《水产学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第10期1552-1561,共10页
为了研究壳聚糖酶的水解活性,实验进行了解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶基因编码序列的克隆,并构建了谷胱甘肽转移酶(GST)-壳聚糖酶融合蛋白表达质粒,在大肠杆菌中表达后提取、纯化得到重组蛋白,并通过生物信息学对该蛋白的信号肽、三...
为了研究壳聚糖酶的水解活性,实验进行了解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶基因编码序列的克隆,并构建了谷胱甘肽转移酶(GST)-壳聚糖酶融合蛋白表达质粒,在大肠杆菌中表达后提取、纯化得到重组蛋白,并通过生物信息学对该蛋白的信号肽、三维结构等进行了分析,最后以胶态壳聚糖溶液为底物研究了该重组壳聚糖酶的活性。结果显示,该壳聚糖酶基因的ORF长为837 bp,编码279个氨基酸,分子量为31.45 ku。在其氨基末端具有信号肽,切割点位于36和37位氨基酸之间。氨基酸序列同源性分析表明该壳聚糖酶属于GH46家族糖苷水解酶。酶的水解活性最适温度约为55°C,最适pH为5.5。而金属离子Fe3+、Ag+、Cu^(2+)、Ba^(2+)和K+对其水解活性都起抑制作用,但是Mn^(2+)、Ca^(2+)和Mg^(2+)对其活性起增强作用。0.1 mmol/L的Zn^(2+)对壳聚糖酶的活性起增强作用,2.0 mmol/L的Zn^(2+)对壳聚糖酶的活性起抑制作用。本实验研究了解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶在不同条件下的水解活性,为壳聚糖酶的工业应用奠定了理论基础。
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关键词
解淀粉芽孢杆菌
壳聚糖酶
基因克隆
蛋白表达
酶活性
下载PDF
职称材料
题名
烟曲霉菌壳聚糖酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
被引量：
12
1
作者
梁东春
左爱军
郭刚
张镜宇
机构
天津市内分泌研究所
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期539-542,共4页
基金
国家自然科学基金重点资助项目(50233020)~~
文摘
根据GenBank中发布的烟曲霉菌壳聚糖酶(Aspergillusfumigatuschitosanase,EC3.2.1.132)基因序列人工合成8条DNA长链及4条引物链。DNA链的设计上在不改变壳聚糖酶氨基酸组成的前提下选择大肠杆菌使用频率高的密码子。PCR拼接法扩增壳聚糖酶基因并克隆入pGEM-Teasy载体进行序列分析,进一步亚克隆入表达载体pGEX-3X。重组质粒pGEX-Csn转化E.coliDH5α,IPTG诱导表达,亲和层析及FactorXa酶解纯化重组Csn。所得重组壳聚糖酶具有降解壳聚糖的生物活性,其活性受温度及pH值的影响。
关键词
壳聚糖酶基因
克隆
表达
Keywords
chitosanase
gene
,
cloning
,
expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶基因的克隆、重组表达及其活性
被引量：
4
2
作者
段静
刘广鑫
董晏君
周洋
李锦铨
刘小玲
周萌
梁日深
赵丽娟
林蠡
机构
华中农业大学水产学院
华中农业大学食品科技学院
仲恺农业工程学院动物科技学院
出处
《水产学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第10期1552-1561,共10页
基金
湖北省科技支撑计划(2015BBA228)
武汉市科技局基金(2016020101010089)
广东省海洋与渔业局基金(2015-033)~~
文摘
为了研究壳聚糖酶的水解活性,实验进行了解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶基因编码序列的克隆,并构建了谷胱甘肽转移酶(GST)-壳聚糖酶融合蛋白表达质粒,在大肠杆菌中表达后提取、纯化得到重组蛋白,并通过生物信息学对该蛋白的信号肽、三维结构等进行了分析,最后以胶态壳聚糖溶液为底物研究了该重组壳聚糖酶的活性。结果显示,该壳聚糖酶基因的ORF长为837 bp,编码279个氨基酸,分子量为31.45 ku。在其氨基末端具有信号肽,切割点位于36和37位氨基酸之间。氨基酸序列同源性分析表明该壳聚糖酶属于GH46家族糖苷水解酶。酶的水解活性最适温度约为55°C,最适pH为5.5。而金属离子Fe3+、Ag+、Cu^(2+)、Ba^(2+)和K+对其水解活性都起抑制作用,但是Mn^(2+)、Ca^(2+)和Mg^(2+)对其活性起增强作用。0.1 mmol/L的Zn^(2+)对壳聚糖酶的活性起增强作用,2.0 mmol/L的Zn^(2+)对壳聚糖酶的活性起抑制作用。本实验研究了解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶在不同条件下的水解活性,为壳聚糖酶的工业应用奠定了理论基础。
关键词
解淀粉芽孢杆菌
壳聚糖酶
基因克隆
蛋白表达
酶活性
Keywords
Bacillus
amyloliquefaciens
chitosanase
gene
cloning
protein
expression
activity
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
S917.4 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
烟曲霉菌壳聚糖酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
梁东春
左爱军
郭刚
张镜宇
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
12
下载PDF
职称材料
2
解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶基因的克隆、重组表达及其活性
段静
刘广鑫
董晏君
周洋
李锦铨
刘小玲
周萌
梁日深
赵丽娟
林蠡
《水产学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
4
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职称材料
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