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Chitosan-DNA疫苗诱导Th1型特异性免疫应答 被引量：2
1
作者 徐薇 吴蓉 +2 位作者 沈燕 储以微 熊思东 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第5期451-454,共4页
目的　在我们前期研究发现脱乙酰壳多糖 (chitosan)包裹质粒DNA形成的chitosan pcDNA3 VP1疫苗基因免疫诱生较高水平特异性免疫应答的基础上 ,探讨该疫苗诱导T辅助细胞 (Th)应答的类型 ,为chitosan DNA新型疫苗的分子设计奠定基础。方... 目的　在我们前期研究发现脱乙酰壳多糖 (chitosan)包裹质粒DNA形成的chitosan pcDNA3 VP1疫苗基因免疫诱生较高水平特异性免疫应答的基础上 ,探讨该疫苗诱导T辅助细胞 (Th)应答的类型 ,为chitosan DNA新型疫苗的分子设计奠定基础。方法　以chitosan pcDNA3 VP1、pcDNA3 VP1和 pcDNA3分别滴鼻免疫BALB/c小鼠 ,以ELISA法检测VP1体外表达和IgG亚型 ;以3 H TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应 ;并通过RT PCR检测了小鼠心肌内细胞因子表达情况。结果　chitosan pcDNA3 VP1体外转染后VP1的表达水平与 pcDNA3 VP1转染组无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,表明chitosan的加入不改变 pcDNA3 VP1质粒在体外细胞内的表达 ;chitosan pcDNA3 VP1组脾淋巴细胞和肠系膜淋巴细胞增殖指数分别达 3.0和 2 .74 ,均显著高于 pcDNA3 VP1组和 pcDNA3组 (P <0 .0 1) ;chitosan pcDNA3 VP1免疫可显著增强IgG2a的生成 ,第 6周和第 12周IgG2a/IgG1比值分别为 2 .2 6和4 4 .2 ,而 pcDNA3 VP1组IgG2a表达稍高于IgG1、IgG2b和IgG3表达 ,IgG2a/IgG1比值为 1.6 3(P <0 .0 5 ) ;细胞因子检测表明chitosan pcDNA3 VP1组IFN γ表达显著高于IL 4 ,相对定量后IFN γ/IL 4比值为 2 .1;而 pcDNA3 VP1、pcDNA3组分别为 1.2 5和 0 .78。结论　chitosan 展开更多
关键词 chitosan-dna 疫苗 脱乙酰壳多糖 Thl型特异性免疫应答
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复合HA-2氨基多肽可增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果
2
作者 徐薇 沈燕 +2 位作者 陈瑞珍 王缨 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期93-98,共6页
目的 :以具有促黏膜黏附吸收功能的脱乙酰多糖chitosan包裹质粒DNApcDNA3-VP1构建的新型chitosan-DNA疫苗 ,已证实可诱生CVB3特异性黏膜IgA和抗CVB3保护力 ,在此基础上 ,引入具有内体破坏功能的流感病毒HA 2氨基多肽(融内体多肽 ) ,构建... 目的 :以具有促黏膜黏附吸收功能的脱乙酰多糖chitosan包裹质粒DNApcDNA3-VP1构建的新型chitosan-DNA疫苗 ,已证实可诱生CVB3特异性黏膜IgA和抗CVB3保护力 ,在此基础上 ,引入具有内体破坏功能的流感病毒HA 2氨基多肽(融内体多肽 ) ,构建chitosan-DNA HApLys16疫苗 ,以期增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果。方法 :将融内体多肽与多聚赖氨酸顺序合成为“载体多肽”HA pLys16 ,将其与DNA、chitosan依次复合形成chitosan DNA HApLys16疫苗。以 5 0 μgDNA剂量的chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫BALB c小鼠 4次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答 ;隔 4周以致死性 5×LD50 CVB3攻击小鼠 ,观察攻击后存活情况。以免疫组化法检测了小鼠心肌内CVB3载量 ;并检测了黏膜IgA中和效价的改变。结果 :chitosan DNA-HApLys16疫苗滴鼻免疫不仅诱生了高水平的IgG ,而且诱生了高水平的黏膜IgA抗体。其诱生的IgG水平以及特异性CTL杀伤活性与chitosan DNA疫苗无统计差别 ,而其IgA水平显著高于chitosan DNA疫苗。CVB3攻击后 ,chitosan DNA HAp Lys16可保护 5 0 .0 %小鼠长期存活 ,高于chitosan DNA组 4 2. 9%的免疫保护率。病理学研究显示 :chitosan-DNA HApLys16免疫小鼠心肌炎症状况好于chitosan-DNA免疫小鼠。 展开更多
关键词 CVB3 clritosan-dna HApLysl6 滴鼻 免疫保护 中和效价
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壳聚糖介导增强DNA疫苗皮肤免疫效果的研究 被引量：4
3
作者 王焱冰 李轶杰 +2 位作者 潘鑫艳 陈蓉 张富春 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第2期68-71,共4页
目的:探讨壳聚糖(chitosan)包裹DNA疫苗皮肤免疫效果。方法:以chitosan包裹不同的草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)基因DNA疫苗pcDNA3-Lzp3(pLzp3)和pLC,通过皮肤擦拭免疫小鼠,以ELISA方法检测抗体水平,对卵巢做病理切片检测。结果:ELISA结果... 目的:探讨壳聚糖(chitosan)包裹DNA疫苗皮肤免疫效果。方法:以chitosan包裹不同的草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)基因DNA疫苗pcDNA3-Lzp3(pLzp3)和pLC,通过皮肤擦拭免疫小鼠,以ELISA方法检测抗体水平,对卵巢做病理切片检测。结果:ELISA结果显示用chitosan包裹的pLC组在皮肤免疫中显示出优势,卵巢病理切片结果正常。结论:Chitosan包裹质粒皮肤免疫小鼠较纯质粒免疫效果更为显著。 展开更多
关键词 草原免尾鼠 卵透明带3 壳聚糖-dna疫苗 皮肤免疫
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不同免疫途径对chitosan-DNA疫苗诱导CVB3特异性免疫应答的影响及其意义 被引量：3
4
作者 徐薇 沈燕 +2 位作者 张进平 王缨 熊思东 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期250-253,共4页
目的　确定新型chitosan DNA疫苗的有效免疫途径。方法　将chitosan pcDNA3 VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻 3种免疫方式免疫Balb c小鼠 ;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA ,评估其特异性体液免疫应答 ;以特异性淋巴细胞增殖反应... 目的　确定新型chitosan DNA疫苗的有效免疫途径。方法　将chitosan pcDNA3 VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻 3种免疫方式免疫Balb c小鼠 ;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA ,评估其特异性体液免疫应答 ;以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活性反映其诱导细胞免疫 ;以 5LD50 致死剂量CVB3攻击免疫小鼠 ,评价不同免疫途径的免疫保护效果。结果　①在诱导CVB3特异性体液免疫方面 :chitosan pcDNA3 VP1疫苗肌注组诱生了高水平IgM和IgG ,但未能诱生黏膜IgA ;口服免疫组仅诱生低水平的黏膜IgA ,未能诱生特异性IgM和IgG ;滴鼻组可诱生低水平的IgM及高水平的IgG和黏膜IgA。②在诱导CVB3特异性细胞免疫方面 :仅滴鼻组诱导了较高水平的淋巴细胞特异性增殖反应和CTL活性 ;口服组的淋巴细胞增殖活性和CTL活性稍弱 ;肌注组几乎不能诱导特异性细胞免疫应答。③免疫保护作用 :滴鼻组可保护 33.3%小鼠长期存活 ;口服组仅达到 16 .7%的保护率 ;肌注组无保护作用。结论　滴鼻免疫途径可能是chitosan pcDNA3 展开更多
关键词 chitosan-dna疫苗 诱导 CVB3 特异性 免疫应答 影响 滴鼻
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Chitosan-DNA基因免疫诱导粘膜特异性免疫应答及其抗CVB3感染作用
5
作者 徐薇 沈燕 +3 位作者 王立新 许从峰 储以微 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期813-817,共5页
目的 :构建新型粘膜基因疫苗 ,诱生CVB3VP1特异性粘膜免疫应答 ,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用 ,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增得VP1基因 ,插入真核表达载体pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1,以Chi... 目的 :构建新型粘膜基因疫苗 ,诱生CVB3VP1特异性粘膜免疫应答 ,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用 ,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增得VP1基因 ,插入真核表达载体pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1,以Chitosan多糖包裹形成Chitosan DNA基因疫苗。将该质粒转染Hela细胞 ,观察其体外表达情况。以 5 0 μgDNA剂量的Chitosan DNA疫苗滴鼻免疫BALB C小鼠 3次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答 ;隔 4周以 5LD50 活CVB3致死攻击小鼠 ,观察攻击后存活情况。结果 :制备了直径为 80～ 10 0nm的Chitosan DNA复合物颗粒 ,体外转染证实Chitosan DNA复合物中VP1的表达高于pcDNA3 VP1质粒 Lipofectamine的表达水平。该疫苗滴鼻 3次免疫后 ,不仅诱生了高水平的IgG ,而且诱生了高水平的粘膜IgA抗体 ,第 6周抗体P N值分别达 3.5和 3.2。特异性细胞免疫应答研究发现 ,该疫苗诱生了较强的VP1特异性CTL杀伤作用 ,并显著高于pcDNA3 VP1和pcDNA3组。CVB3攻击后 ,可保护 33.3%小鼠长期存活 ,而pcDNA3和pcDNA3 VP1质粒滴鼻免疫对照组的平均存活天数分别为 8.5和 10 .8天。病理学研究显示 :Chitosan DNA免疫小鼠心肌组织基本正常 ,而对照小鼠死亡前心肌显示大量的灶性坏死和炎性浸润。结论 展开更多
关键词 CVB3 VP1 chitosan-dna疫苗 滴鼻 免疫保护
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禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果 被引量：2
6
作者 宫强 孔梁宇 +7 位作者 马丽苹 牛明福 秦翠丽 杨莹 李翔 阮梦蝶 田野 李战丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期658-662,671,共6页
为评价禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果,本实验以壳聚糖为佐剂制备ptfA基因的壳聚糖纳米DNA疫苗,检测其形态及抗DNA酶降解的能力,随后进行动物免疫实验,检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平、免疫小鼠脾淋巴细胞增殖... 为评价禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果,本实验以壳聚糖为佐剂制备ptfA基因的壳聚糖纳米DNA疫苗,检测其形态及抗DNA酶降解的能力,随后进行动物免疫实验,检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平、免疫小鼠脾淋巴细胞增殖、IFN-γ分泌情况和抵抗强毒菌株攻击和免疫保护率。实验结果显示,ptfA基因壳聚糖纳米DNA在透射电镜下呈现较为规则的圆球型,粒径约为200 nm,可以有效抵抗DNAaseⅠ的降解。间接ELISA检测结果显示,壳聚糖纳米DNA疫苗组和裸DNA组的血清抗体水平均呈现上升趋势,明显高于空载体对照组和PBS对照组,且壳聚糖纳米DNA疫苗组的抗体水平稍高于裸DNA疫苗组。淋巴细胞增殖试验和IFN-γ分泌试验结果也显示,壳聚糖纳米DNA疫苗组和裸DNA疫苗组的SI值与IFN-γ分泌水平极显著高于两对照组(p<0.01),但两种DNA疫苗组之间差异并不显著(p>0.05)。强毒菌株攻击后壳聚糖纳米DNA疫苗组的保护率优于裸DNA疫苗组,在一定程度上增强了禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因裸DNA疫苗的免疫效果。从而为禽多杀性巴氏杆菌新型DNA疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ptfA基因 壳聚糖纳米dna疫苗 免疫效果
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聚乙二醇修饰的壳聚糖包裹DNA的转染效果研究 被引量：1
7
作者 蔡文萍 李轶杰 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期29-32,共4页
目的:为探讨聚乙二醇(PEG,MW4000)修饰的壳聚糖用于包裹质粒DNA(Chi-DNA)是否能有效提高口服发送的外源基因在消化道中的表达量。方法:用PEG修饰的壳聚糖包裹不同剂量(10μg,50μg,100μg)的质粒(pCMVβ),形成壳聚糖纳米复合物,通过口... 目的:为探讨聚乙二醇(PEG,MW4000)修饰的壳聚糖用于包裹质粒DNA(Chi-DNA)是否能有效提高口服发送的外源基因在消化道中的表达量。方法:用PEG修饰的壳聚糖包裹不同剂量(10μg,50μg,100μg)的质粒(pCMVβ),形成壳聚糖纳米复合物,通过口服发送后经X-gal染色法检测pCMVβ在小鼠消化道内的表达效果。结果:胃酸消化实验及DNaseⅠ消化实验均表明经PEG修饰的壳聚糖纳米粒能有效地保护DNA,使其免受胃酸及DnaseⅠ的降解。同时在小鼠消化道内的表达量较修饰前明显增加,随着所发送DNA剂量的增加,表达量也相应增加,且包裹10μg质粒的DNA纳米复合物的表达量相当于100μg未修饰复合物的表达水平。结论:经PEG修饰的Chi-DNA纳米复合物有较高的基因转染效果,有望作为基因治疗中高效非病毒口服发送系统的材料。 展开更多
关键词 聚乙二醇(PEG) 壳聚糖 Chi-dna纳米复合物 口服 转染效果
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免疫学
8
《中国医学文摘（基础医学）》 CSCD 2005年第4期230-235,共6页
猪FasL基因在猪软骨细胞上的表达和鉴定；重组蓖麻毒紊A链的融合表达、纯化及活性研究；凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义；人CD59基因的突变和表达及其活性研究；预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外... 猪FasL基因在猪软骨细胞上的表达和鉴定；重组蓖麻毒紊A链的融合表达、纯化及活性研究；凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义；人CD59基因的突变和表达及其活性研究；预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠；人源噬菌体抗体库的构建及抗人NH-LBP抗体的筛选与鉴定；抗禽流感病毒轻链抗体库的构建；CTL识别的HLA-A2限制性人卵巢癌相关抗原OVA66表位的鉴定；含多抗原表位的嵌合SARS-CoV基因疫苗的构建和免疫原性研究；TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α，对U937细胞的激活作用；NK92细胞的胞吐效应与SNAP-23蛋白转位相关；CXCL16抗体可阻断BCG和LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤；GM-CSF对抗原化抗体基因免疫TH细胞应答的调节作用；趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群的差异表达；在单个细胞水平上分析抗原特异性Th1／Th2细胞因子产生的关联性；人OX40-Fc分子的构建、真核表达及活性研究；人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究；PD-L1 mAb的制备、鉴定及其特性的研究；噬菌体呈现的多聚多肽3A8诱导Jurkat细胞的凋亡效应；T细胞受体Dβ-Jβ sjTRECs连接区多样性；α-Dystroglycan在胸腺T细胞的表达及其对胸腺发育的作用；Bcl-2家族蛋白参与调节CD3ε和5-氟尿嘧啶介导的T淋巴细胞凋亡；人白细胞介素21在真核细胞中表达及其体外促T细胞增殖作用；小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达的研究；猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应的发生机制；天花粉蛋白在不同小鼠品系中区分性下调树突状细胞IL-12分泌和CD80表达；复合HA-2氨基多肽可增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果；CD4^＋CD25^＋调节性T细胞抑制小鼠自身免疫性甲状腺炎的发生；人β2-微球蛋白在pET-22b（＋）表达载体中的克隆、表达与纯化；B7-1／B7-H1相对� 展开更多
关键词 HLA-A2-抗原肽复合物 chitosan-dna疫苗 淋巴细胞共刺激分子 TH1/TH2细胞因子 噬菌体抗体库 免疫学 HLA-A2限制性 趋化性细胞因子受体 人免疫缺陷病毒Ⅱ型
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壳聚糖脱氧核糖核酸纳米球的制备及其相关特性研究 被引量：10
9
作者 孙纳 徐顺清 +1 位作者 孙汉清 王小利 《医药导报》 CAS 2005年第2期97-99,共3页
目的　制备壳聚糖脱氧核糖核酸 (DNA)纳米球并研究其理化性质和转染肝细胞系HepG2和L 0 2的活性。方法　用绿色荧光蛋白 (GFP)质粒做报告基因 ,GFP和壳聚糖通过复凝聚方法制备壳聚糖DNA纳米球 ,用扫描电镜观察其形态 ,激光粒度分析仪测... 目的　制备壳聚糖脱氧核糖核酸 (DNA)纳米球并研究其理化性质和转染肝细胞系HepG2和L 0 2的活性。方法　用绿色荧光蛋白 (GFP)质粒做报告基因 ,GFP和壳聚糖通过复凝聚方法制备壳聚糖DNA纳米球 ,用扫描电镜观察其形态 ,激光粒度分析仪测定壳聚糖DNA纳米球粒度分布、表面电位 ,DNaseⅠ保护实验研究壳聚糖DNA纳米球对包裹基因的保护作用 ,用体外基因转染实验定性评价纳米球的转染活性 ,MTT试验研究壳聚糖DNA纳米球对HepG2和L 0 2的细胞毒作用。结果　壳聚糖形成表面带正电荷的纳米球 ,保护DNA免受DNaseⅠ的降解。壳聚糖DNA纳米球作为非病毒载体转染肝细胞系 ,基因能有效表达。结论　壳聚糖DNA纳米球作为非病毒载体转染肝细胞系有效 ,壳聚糖转染有细胞选择性。 展开更多
关键词 壳聚糖脱氧核糖核酸纳米球 转染 HEPG2 L-02
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铜绿假单胞菌flg E基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果评估 被引量：1
10
作者 宫强 李雅静 +2 位作者 翟文汉 祝世纪 田佳雨 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期510-516,共7页
为评价铜绿假单胞菌flgE基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果,本研究经PCR扩增flgE基因,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建flgE基因的重组质粒pflgE,进一步以壳聚糖为佐剂制备了纳米DNA疫苗CpflgE,通过测定OD260nm值检测纳米DNA疫苗... 为评价铜绿假单胞菌flgE基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果,本研究经PCR扩增flgE基因,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建flgE基因的重组质粒pflgE,进一步以壳聚糖为佐剂制备了纳米DNA疫苗CpflgE,通过测定OD260nm值检测纳米DNA疫苗的包封率、加入DNA酶后经琼脂糖凝胶电泳检测其抗DNA酶降解的能力、37℃恒温静置1 d,3 d和5 d后经琼脂糖凝胶电泳检测稳定性。结果显示CpflgE的包封率为94.69%,可有效抵抗DNaseⅠ的降解,具有较强的稳定性。以pflgE和CpflgE免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,同时设置灭活疫苗免疫组、铜绿假单胞菌鞭毛蛋白亚单位疫苗免疫组以及PBS对照组。免疫后不同时间经间接ELISA测定各组小鼠血清抗体水平,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平,采用检测试剂盒测定各组小鼠血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的水平。结果显示,Cpflg E诱导小鼠的血清抗体水平、脾淋巴细胞增殖水平及血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的浓度总体上虽均低于灭活疫苗,但与鞭毛蛋白亚单位疫苗相当,且显著高于pflgE (P<0.05)。三免两周后以铜绿假单胞菌强毒株(1.35×10^(10)cfu)对各组小鼠进行攻毒试验,测定攻毒后各组小鼠的保护率,结果显示,pflgE组、CpflgE组、鞭毛蛋白疫苗组和灭活疫苗组的保护率分别为57.1%、76.2%、81%和95.2%。本研究首次证实壳聚糖作为载体和佐剂可以显著提高铜绿假单胞菌flgE基因DNA疫苗诱导的免疫应答水平,为铜绿假单胞菌新型DNA疫苗的研制提供了参考依据。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 flgE基因 裸dna疫苗 壳聚糖纳米dna疫苗 免疫效果
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