无核葡萄与中国野生葡萄杂种胚发育和败育的细胞学研究 被引量：30

1

作者 王飞 王跃进 +2 位作者 周会玲 万怡震 杨进孝 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第3期61-65,共5页

　测定了无核葡萄品种及其杂种胚珠和浆果不同发育时期的重量和纵横径,并对其进行了细胞学观察。结果表明:(1)不同葡萄品种及杂种组合的胚发育、败育时期不同。(2)无核葡萄及其杂种的胚珠重量和纵横径增加到一定阶段时停止,而浆果在胚... 　测定了无核葡萄品种及其杂种胚珠和浆果不同发育时期的重量和纵横径,并对其进行了细胞学观察。结果表明:(1)不同葡萄品种及杂种组合的胚发育、败育时期不同。(2)无核葡萄及其杂种的胚珠重量和纵横径增加到一定阶段时停止,而浆果在胚珠停止发育时仍继续发育。(3)细胞学观察发现,无核葡萄、有核葡萄及其杂种胚的发育都经历合子胚→多细胞时期→小球形胚→大球形胚→心形胚→鱼雷胚→成熟胚的各个时期。(4)胚败育的主要原因是合子胚发育不良,珠心、珠被细胞提早解体退化;胚乳不分裂或只进行1～2次分裂;授粉、受精不良。因此,在胚珠发育停止前,重量和纵横径最大且胚发育为心形胚时,对无核葡萄及其杂种进行胚挽救易获成功。 展开更多

关键词 杂种 无核葡萄 种胚 败育 横径 中国野生葡萄 胚珠 胚发育 合子 细胞

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中国野生葡萄果实抗炭疽病基因的RAPD标记 被引量：25

2

作者 王跃进 徐炎 +1 位作者 张剑侠 周鹏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期536-540,共5页

以葡萄种间杂交组合 88 110 [毛葡萄 83 4 96 (♀ )×欧洲葡萄粉红玫瑰 ]的F1群体为试材 ,运用RAPD技术 ,采用集群分离分析 (bulkedsegregantanalysis,BSA)法进行中国野生葡萄抗炭疽病基因连锁的分子标记研究。获得了与抗炭疽病基... 以葡萄种间杂交组合 88 110 [毛葡萄 83 4 96 (♀ )×欧洲葡萄粉红玫瑰 ]的F1群体为试材 ,运用RAPD技术 ,采用集群分离分析 (bulkedsegregantanalysis,BSA)法进行中国野生葡萄抗炭疽病基因连锁的分子标记研究。获得了与抗炭疽病基因相连锁的RAPD标记 :OPC15 130 0 ,并在 5 0株杂种后代、中国野生葡萄 8种 32个株系、14个欧洲葡萄品种中证明了该标记是可以遗传的。 展开更多

关键词 抗病性 中国 野生葡萄果实 抗炭疽病基因 PAPD标记

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无核葡萄与中国野生葡萄杂种胚败育的某些生理生化变化 被引量：13

3

作者 王飞 王跃进 +1 位作者 万怡震 任杰 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期651-653,共3页

通过对无核葡萄、有核葡萄以及无核葡萄与中国野生葡萄杂种的胚珠进行离体培养 ,并结合生理生化指标测定发现 :不同的无核葡萄及其杂种胚败育的时间不同 ,胚败育时 ,保护酶活性下降 ,反应膜脂过氧化水平的MDA含量上升 ,可溶性糖与可溶... 通过对无核葡萄、有核葡萄以及无核葡萄与中国野生葡萄杂种的胚珠进行离体培养 ,并结合生理生化指标测定发现 :不同的无核葡萄及其杂种胚败育的时间不同 ,胚败育时 ,保护酶活性下降 ,反应膜脂过氧化水平的MDA含量上升 ,可溶性糖与可溶性蛋白质含量降低 ,可溶性淀粉含量变化不大。进行胚挽救时 ,应根据不同的杂交组合 ,在最佳时间 ,即胚发育程度最高、MDA含量较低时取胚进行培养。 展开更多

关键词 无核葡萄 中国 野生葡萄 杂种胚 败育 生理生化变化

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中国野生葡萄叶绿体分离及叶绿体DNA提取的研究 被引量：11

4

作者 谢海坤 焦健 +4 位作者 樊秀彩 张颖 姜建福 孙海生 刘崇怀 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1464-1469,共6页

以中国野生刺葡萄、山葡萄、桑叶葡萄和东南葡萄的成熟叶片为材料,比较柱式植物叶绿体DNAout试剂盒和改良的高盐-低pH法分离叶绿体及提取cpDNA效果。结果显示:(1)2种方法均分离得到了中国野生葡萄的叶绿体,但与柱式植物叶绿体DNAout试... 以中国野生刺葡萄、山葡萄、桑叶葡萄和东南葡萄的成熟叶片为材料,比较柱式植物叶绿体DNAout试剂盒和改良的高盐-低pH法分离叶绿体及提取cpDNA效果。结果显示:(1)2种方法均分离得到了中国野生葡萄的叶绿体,但与柱式植物叶绿体DNAout试剂盒相比,改良的高盐-低pH法得到的叶绿体浓度高、杂质少,更适合中国野生葡萄叶绿体分离。(2)柱式植物叶绿体DNAout试剂盒提取的cpDNA,其OD260/OD280在1.28~1.36之间,质量浓度为4.2~7.8ng·μL^(-1),质量低,不能满足后续测序要求;而改良的高盐-低pH法提取的cpDNA,其OD260/OD280值在1.84~1.90之间,质量浓度为2 514.4~4 133.7ng·μL^(-1),质量高,纯度好,能满足后续测序要求。研究表明,改良的高盐-低pH法能简便、快速获得中国野生葡萄完整叶绿体及高质量cpDNA,并且提取的cpDNA可满足后续测序要求,为葡萄属植物叶绿体基因组的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 叶绿体分离 cpDNA提取 柱式植物叶绿体DNAout 改良的高盐-低pH法

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中国野生种葡萄及种间杂种VvmybA1基因型和表达分析 被引量：6

5

作者 焦健 刘崇怀 +4 位作者 樊秀彩 张颖 孙海生 姜建福 李民 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2514-2525,共12页

【目的】检测中国野生种葡萄以及山欧杂交品种VvmybA1基因型,并对不同材料VvmybA1基因序列进行比对分析,通过对山欧杂种VvmybA1的基因型和表达分析,揭示白色杂交品种‘熊岳白葡萄’果皮无花色苷合成的分子机理。【方法】设计特异性引物,... 【目的】检测中国野生种葡萄以及山欧杂交品种VvmybA1基因型,并对不同材料VvmybA1基因序列进行比对分析,通过对山欧杂种VvmybA1的基因型和表达分析,揭示白色杂交品种‘熊岳白葡萄’果皮无花色苷合成的分子机理。【方法】设计特异性引物,在DNA水平上利用分子克隆手段和绝对荧光定量PCR方法,检测葡萄属的不同样品VvmybA1基因型。采用相对荧光定量PCR手段,对山欧杂交品种果实转色过程中VvmybA1和UFGT的表达量进行分析。【结果】①检测的中国野生种葡萄材料不存在VvmybA1a等位基因;②与欧亚种葡萄相比,中国野生葡萄VvmybA1基因在启动子、内含子以及第三个外显子区域存在不同程度碱基的缺失、插入和替换,表现出丰富的遗传多样性。而且许多野生种葡萄VvmybA1基因的内含子、外显子和启动子区域存在一些特有序列或突变,这些位点可筛选作为鉴别葡萄种和品种的分子标记;③在‘公酿1号’、‘北红’、‘熊岳白葡萄’等山欧杂交葡萄品种以及分类地位未定的‘宿晓红’葡萄中检测到VvmybA1a等位基因,并且‘熊岳白葡萄’为VvmybA1a纯合类型;④RT-PCR分析结果表明,在葡萄果皮转色过程中,‘公酿1号’葡萄果皮VvmybA1和UFGT的表达量增加,然而在‘熊岳白葡萄’果实成熟期未检测到VvmybA1和UFGT的表达。【结论】证明VvmybA1a等位基因是欧亚种葡萄以及其杂交种独有的基因型,不存在于中国野生种葡萄中,推测‘宿晓红’葡萄具有欧亚种葡萄血缘;葡萄属不同种的VvmybA1基因序列比对分析揭示,山欧杂交品种‘熊岳白葡萄’果皮不能合成花色苷是由于VvmybA1a纯合,VvmybA1不表达。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 VvmybA1 花色苷 基因型 果皮颜色

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中国11种野生葡萄果皮中黄烷-3-醇类物质的组成及含量 被引量：5

6

作者 严静 江雨 +4 位作者 樊秀彩 姜建福 张颖 孙海生 刘崇怀 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期890-905,共16页

【目的】探讨中国野生葡萄果皮中黄烷-3-醇类物质的组成及含量的差异,为中国野生葡萄的加工利用及种质资源的评价提供依据。【方法】以变叶葡萄、刺葡萄、华东葡萄、桦叶葡萄、毛葡萄、秋葡萄、桑叶葡萄、山葡萄、腺枝葡萄、燕山葡萄和... 【目的】探讨中国野生葡萄果皮中黄烷-3-醇类物质的组成及含量的差异,为中国野生葡萄的加工利用及种质资源的评价提供依据。【方法】以变叶葡萄、刺葡萄、华东葡萄、桦叶葡萄、毛葡萄、秋葡萄、桑叶葡萄、山葡萄、腺枝葡萄、燕山葡萄和蘡薁等11个野生种98个株系的葡萄果实为试材,以欧亚种品种‘赤霞珠’为对照,利用超高效液相色谱(UPLC)对不同野生种成熟葡萄果皮中的黄烷-3-醇类物质进行检测分析。【结果】不同野生种葡萄果皮中黄烷-3-醇含量存在较大差异,桑叶葡萄果皮中黄烷-3-醇类物质的含量高于对照,其余野生种葡萄果皮中黄烷-3-醇含量低于对照,其中桦叶葡萄和变叶葡萄最低,仅为对照的64%。供试野生葡萄果皮中黄烷-3-醇类物质的组成与对照相似,均由儿茶素、表儿茶素、表棓儿茶素和表儿茶素没食子酸酯组成,并以表棓儿茶素和表儿茶素为主;这4种组成单元均可以末端单元和延伸单元的形式参与聚合黄烷-3-醇的形成。11个野生种葡萄果皮中90%以上的黄烷-3-醇类物质以聚合体的形式存在;不同野生种葡萄果皮中聚合黄烷-3-醇的平均聚合度存在较大差异,其中山葡萄果皮聚合黄烷-3-醇的平均聚合度高达50,而桦叶葡萄果皮中聚合黄烷-3-醇的平均聚合度仅为25左右,而其余野生种则介于25—45。对不同野生种葡萄果皮中黄烷-3-醇的代谢路径分析结果表明,毛葡萄和秋葡萄果皮中黄烷-3-醇的积累更偏向于F3′5′H代谢路径。主成分分析结果表明,不同野生种之间有一定的差异,而刺葡萄与其他野生种之间的差异更为明显。【结论】刺葡萄、桦叶葡萄、桑叶葡萄、山葡萄和腺枝葡萄均有黄烷-3-醇含量高于‘赤霞珠’的株系,这些株系均可作为提高黄烷-3-醇的育种材料。此外,不同野生种葡萄果皮中黄烷-3-醇的含量存在较大差异,这对中国野生葡� 展开更多

关键词 中国野生葡萄 株系 果皮 黄烷-3-醇

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中国野生葡萄打破休眠研究 被引量：3

7

作者 于大永 王跃进 +2 位作者 张剑侠 杨亚洲 杨进孝 《中外葡萄与葡萄酒》 2003年第6期17-19,共3页

用石灰氮对中国野生葡萄进行打破休眠研究。结果表明,在供试的7个野生葡萄株系中,留坝-7、留坝-1、江西-1(绿毛, )、通化-3涂抹5～10％石灰氮及平利-7涂抹20％石灰氮有较好的促进萌芽效果。应用同一浓度15％石灰氮处理另外10个野生葡萄... 用石灰氮对中国野生葡萄进行打破休眠研究。结果表明,在供试的7个野生葡萄株系中,留坝-7、留坝-1、江西-1(绿毛, )、通化-3涂抹5～10％石灰氮及平利-7涂抹20％石灰氮有较好的促进萌芽效果。应用同一浓度15％石灰氮处理另外10个野生葡萄株系,唯有秦岭葡萄略阳-4提高萌芽率明显,其余株系表现不明显,或表现有抑制作用,表明不同浓度及同一浓度石灰氮处理中国野生葡萄,在打破休眠方面功效不同。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 石灰氮 打破休眠 萌芽 野生葡萄株系

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中国野生葡萄副梢长度的RAPD标记 被引量：1

8

作者 李华 程玉文 +1 位作者 李佩洪 王华 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期595-599,共5页

为培育短副梢葡萄品种,对中国野生葡萄副梢长度性状进行调查,以葡萄短梢×长梢的葡萄种间杂交组合(燕山-1×河岸葡萄)F183个单株为试材,采用BSA法和RAPD技术,通过369个随机引物的筛选,获得了1个与中国野生葡萄副梢长度基因连锁... 为培育短副梢葡萄品种,对中国野生葡萄副梢长度性状进行调查,以葡萄短梢×长梢的葡萄种间杂交组合(燕山-1×河岸葡萄)F183个单株为试材,采用BSA法和RAPD技术,通过369个随机引物的筛选,获得了1个与中国野生葡萄副梢长度基因连锁的RAPD标记OPB07-2000,并在中国野生葡萄17个种46个株系中得到验证。这就为葡萄短副梢分子辅助育种提供了科学依据,进而从根本上解决葡萄生产上夏季副梢生长过旺的问题。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 副梢长度 RAPD

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中国野生葡萄果实抗白腐病基因的分子标记 被引量：19

9

作者 徐炎 王跃进 +1 位作者 周鹏 张剑侠 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期6-10,共5页

以感病×抗病的葡萄种间杂交组合白玉霓×塘尾的F1代 17个单株及塘尾自交一代 16个单株为试材 ,采用BSA法和RAPD技术 ,通过对 15 5个随机引物的筛选 ,获得了一个与中国野生葡萄抗白腐病基因连锁的RAPD标记OPP0 9 76 0 ,并在中... 以感病×抗病的葡萄种间杂交组合白玉霓×塘尾的F1代 17个单株及塘尾自交一代 16个单株为试材 ,采用BSA法和RAPD技术 ,通过对 15 5个随机引物的筛选 ,获得了一个与中国野生葡萄抗白腐病基因连锁的RAPD标记OPP0 9 76 0 ,并在中国野生葡萄 8个种的 32个株系及欧洲葡萄 16个品种中得到验证。进一步将该DNA片段克隆并测序 ,根据两端序列 ,设计了一对长 2 6bp的特异引物分别扩增供试材料 ,获得了与该RAPD标记相同大小的DNA片段 ,成功地将RAPD标记转化为SCAR标记 。 展开更多

关键词 分子标记 中国野生葡萄 白腐病 RAPD SCAR 抗病基因 抗病育种

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ISSR标记在中国野生葡萄分类中的应用 被引量：23

10

作者 张永辉 刘崇怀 +4 位作者 樊秀彩 张颖 孙海生 彭斌 姜建福 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期406-412,共7页

利用ISSR标记对包含16个中国葡萄野生种及其近缘植物的81份材料进行分类研究,从100条引物中筛选出13条带型清晰、重复性高、多态性好的引物用于ISSR扩增,共扩增出分子量在300～2 000 bp的185条带,其中多态性条带175条,多态百分率为94.6... 利用ISSR标记对包含16个中国葡萄野生种及其近缘植物的81份材料进行分类研究,从100条引物中筛选出13条带型清晰、重复性高、多态性好的引物用于ISSR扩增,共扩增出分子量在300～2 000 bp的185条带,其中多态性条带175条,多态百分率为94.6%。根据ISSR扩增结果,利用NTSYSpc2.10e软件进行相似性系数分析,81份葡萄种质的遗传相似性系数为0.57～0.99。通过UPGMA进行聚类分析,在遗传相似系数为0.83处,79份真葡萄亚属材料聚成22类,聚类结果与传统的分类结果基本一致。同时,根据ISSR聚类结果,将供试材料毛葡萄1099确定为桑叶葡萄,对燕山葡萄0947是否为燕山葡萄提出质疑,并检测出供试的变叶葡萄材料不是一个纯种,而是存在种间的过渡类型。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 ISSR 遗传相似系数 分类

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中国葡萄属植物形态学聚类分组研究 被引量：20

11

作者 刘崇怀 冯建灿 姜建福 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期847-852,共6页

对《中国葡萄志》描述的38个中国葡萄属野生种和1个栽培种,按照《葡萄种质资源描述规范和数据标准》的要求,对18个描述符用代码数量化并进行聚类分析,根据形态特征的相似程度,将我国葡萄属野生种和欧亚种划分为8个组和5个亚组。第1组包... 对《中国葡萄志》描述的38个中国葡萄属野生种和1个栽培种,按照《葡萄种质资源描述规范和数据标准》的要求,对18个描述符用代码数量化并进行聚类分析,根据形态特征的相似程度,将我国葡萄属野生种和欧亚种划分为8个组和5个亚组。第1组包含毛葡萄、腺枝葡萄、龙泉葡萄、美丽葡萄和庐山葡萄;第2组包含麦黄葡萄和小叶葡萄;第3组包含5个亚组21个种类,其中亚组1包含山葡萄、陕西葡萄、浙江蘡薁、蘡薁和湖北葡萄,亚组2包含绵毛葡萄和勐海葡萄,亚组3包含小果葡萄、云南葡萄和葛藟葡萄,亚组4包含毛脉葡萄、华东葡萄、武汉葡萄和井冈葡萄,亚组5包含刺葡萄、秋葡萄、桦叶葡萄、网脉葡萄、蒙自葡萄、凤庆葡萄和河口葡萄;第4组仅包含欧洲葡萄;第5组包含温州葡萄、红叶葡萄、复叶葡萄、乳源葡萄和狭叶葡萄;第6组包含东南葡萄、罗城葡萄和闽赣葡萄;第7组仅包含菱叶葡萄;第8组仅包含鸡足葡萄一个种。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 种类 聚类分析 系统分组

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中国葡萄属植物野生种多样性分析 被引量：20

12

作者 程大伟 姜建福 +3 位作者 樊秀彩 张颖 张国海 刘崇怀 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期996-1012,共17页

中国是葡萄属植物的主要起源地之一,也是世界葡萄属植物种类最多、遗传资源最丰富的国家之一,起源于中国的葡萄属植物共有40种、1亚种、13变种。本研究根据《葡萄种质资源描述规范和数据标准》,选择多项性状指标作为形态鉴定参数,对起... 中国是葡萄属植物的主要起源地之一,也是世界葡萄属植物种类最多、遗传资源最丰富的国家之一,起源于中国的葡萄属植物共有40种、1亚种、13变种。本研究根据《葡萄种质资源描述规范和数据标准》,选择多项性状指标作为形态鉴定参数,对起源于中国的葡萄属植物23个种的生物学性状、植物学特征、农艺性状等进行鉴定,分析其遗传多样性特点。结果表明,中国葡萄属植物的主要物候期,嫩梢新梢的绒毛、颜色,叶片的形状、颜色、锯齿,果实大小、颜色、香型和花器官等形态性状都有丰富的变化,表现出丰富的多样性。本研究结果将为葡萄属植物的分类鉴定提供依据,也将为葡萄属植物演化研究和育种利用提供参考。建议对目前使用的《葡萄种质资源描述规范和数据标准》作进一步修订和完善,以适应我国野生葡萄资源多样性评价研究。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 种质资源 形态多样性 分类鉴定

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中国野生刺葡萄抗白腐病NBS-LRR类抗病基因同源序列的分离与鉴定 被引量：13

13

作者 张颖 李峰 +4 位作者 刘崇怀 樊秀彩 孙海生 姜建福 张国海 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期780-789,共10页

【目的】通过同源克隆法从刺葡萄‘高山2号’叶片中得到抗白腐病基因的同源片段,为筛选葡萄抗白腐病基因奠定基础。【方法】根据已知植物抗病基因NBS-LRR保守区设计简并引物,从高抗葡萄白腐病刺葡萄‘高山2号’的基因组DNA与cDNA上得到... 【目的】通过同源克隆法从刺葡萄‘高山2号’叶片中得到抗白腐病基因的同源片段,为筛选葡萄抗白腐病基因奠定基础。【方法】根据已知植物抗病基因NBS-LRR保守区设计简并引物,从高抗葡萄白腐病刺葡萄‘高山2号’的基因组DNA与cDNA上得到抗病基因同源片段(RGAs),并对其表达分析进行检测。【结果】从刺葡萄‘高山2号’上获得了10个NBS-LRR类抗病基因同源片段,10条葡萄RGAs间在氨基酸水平上的同源性表现出丰富的多态性,进一步分析发现,在10条葡萄RGAs中,4个推测所属基因为non-TIR-NBS-LRR类抗病基因,6个所属基因为TIR-NBS-LRR类抗病基因。定量PCR分析表明,NB7基因受到白腐菌的诱导,而且NB7基因在刺葡萄叶片中为低丰度表达,NBS6基因受到白腐菌的诱导后为下调表达。【结论】在刺葡萄上成功获得了抗病基因同源序列,通过荧光定量PCR分析发现,NB7基因与NBS6基因都受到白腐菌的诱导表达,为最终克隆得到葡萄抗白腐病基因奠定基础。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 刺葡萄 白腐病 NBS-LRR 抗病基因同源序列

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中国野葡萄新基因cDNA全长的克隆及序列分析 被引量：4

14

作者 赵伟 徐伟荣 +2 位作者 徐炎 贺明阳 王跃进 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期878-884,共7页

根据对中国野生葡萄华东葡萄株系白河-35-1在白粉病诱导下构建的cDNA文库中获得的1条EST序列设计特异引物,以总RNA逆转录产物为模板,进行SMART-RACE扩增。结合生物信息学方法对所获的序列进行开放阅读框、序列同源性分析,并预测了蛋白... 根据对中国野生葡萄华东葡萄株系白河-35-1在白粉病诱导下构建的cDNA文库中获得的1条EST序列设计特异引物,以总RNA逆转录产物为模板,进行SMART-RACE扩增。结合生物信息学方法对所获的序列进行开放阅读框、序列同源性分析,并预测了蛋白质的理化性质、信号肽、酶与非酶分析、亚细胞定位以及蛋白质二级结构。结果表明,获得的中国野生葡萄新基因的全长序列为854 bp,其开放阅读框为585 bp,5′非编码区为107 bp,3′非编码区为162 bp;同源性比对表明该新基因推导的氨基酸序列与拟南芥RNA结合蛋白和水稻推定的半乳糖基转移酶的同源性分别为55%和63%,第8-82位氨基酸序列与RNA识别基序相类似,是一个典型的结构功能域;推导该基因表达产物为相对分子质量为21 801.27、等电点为6.86的不稳定蛋白,定位于细胞核,不包含信号肽,二级结构主要是无规则卷曲。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 CDNA全长 RACE 基因克隆 生物信息学

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中国野生葡萄白粉菌诱导cDNA文库中抗病基因的筛选 被引量：1

15

作者 张军科 王静 +2 位作者 王跃进 张朝红 徐炎 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第2期119-123,共5页

【目的】从中国野生华东葡萄白河35-1经白粉菌接种诱导后叶片所构建的cDNA文库中,筛选抗病相关基因。【方法】根据植物抗病基因保守序列NBS位点设计特异引物,对葡萄白粉病接种诱导后的环化cDNA文库进行菌落PCR筛选,从随机挑选的大量菌... 【目的】从中国野生华东葡萄白河35-1经白粉菌接种诱导后叶片所构建的cDNA文库中,筛选抗病相关基因。【方法】根据植物抗病基因保守序列NBS位点设计特异引物,对葡萄白粉病接种诱导后的环化cDNA文库进行菌落PCR筛选,从随机挑选的大量菌落中筛选出82个PCR阳性菌落,提取阳性菌落的质粒进一步进行PCR检测确认,对确认的36个阳性质粒插入片段进行了测序。【结果】测序结果和序列生物信息学分析结果均表明,有3个基因序列与Genbank中的已知序列有较高的同源性,其中1个基因序列与葡萄抗白粉病基因(DT661587.1)序列同源性达99%,另外2个基因序列与水分胁迫下葡萄特异表达基因(DT031657.1)和葡萄抗皮尔斯病基因(CF202948.1)的同源性分别为89%和96%。【结论】初步推测获得的3个基因均为抗性相关基因。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 CDNA基因 文库筛选 抗病基因

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中国野葡萄锌指蛋白基因的克隆及生物信息学分析

16

作者 文志丰 赵素平 +1 位作者 王西平 王倩 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第10期131-137,144,共8页

【目的】在受白粉病菌侵染的中国野葡萄叶片中克隆锌指蛋白基因全长,研究葡萄抗白粉病的分子机制。【方法】在前期采用mRNA差异显示技术获得的中国野葡萄华东葡萄株系白河35-1抗白粉病基因表达差异cDNA片段T11GG/B0324-292的基础上,利用... 【目的】在受白粉病菌侵染的中国野葡萄叶片中克隆锌指蛋白基因全长,研究葡萄抗白粉病的分子机制。【方法】在前期采用mRNA差异显示技术获得的中国野葡萄华东葡萄株系白河35-1抗白粉病基因表达差异cDNA片段T11GG/B0324-292的基础上,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了该cDNA全长序列,并结合生物信息学方法对所获取的序列进行分析。【结果】该cDNA全长2663bp(GenBank登录号HM008621),具有完整的开放阅读框,基因全长2223bp,编码1个由740个氨基酸组成的锌指蛋白(Zinc finger protein),5′和3′非翻译区长度分别为395和44bp。多重比较分析表明,该基因推导的氨基酸序列与拟南芥、蒺藜苜蓿、水稻的C3H亚型CCCH型锌指蛋白的同源性分别为61%,70%和60%。【结论】利用RACE技术获得了锌指蛋白基因全长,为进一步研究锌指蛋白基因与葡萄抗白粉病的关系奠定了基础。 展开更多

关键词 中国野葡萄 白粉病 锌指蛋白 转录因子 RACE 生物信息学

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华东葡萄泛素连接酶基因VpUIRP2和VpUIRP3的抗白粉病特性分析 被引量：5

17

作者 王辰 姚文孔 +4 位作者 谢小青 童威霍 王磊 王杰 王跃进 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1477-1491,共15页

【目的】分析华东葡萄抗白粉病株系‘白河-35-1’的Ring型泛素连接酶基因VpUIRP2和VpUIRP3的转基因植株对葡萄白粉病的抗性,研究这2个基因的抗白粉病特性,为改良欧洲葡萄抗病性提供可用基因。【方法】利用同源克隆的方法获得中国野生华... 【目的】分析华东葡萄抗白粉病株系‘白河-35-1’的Ring型泛素连接酶基因VpUIRP2和VpUIRP3的转基因植株对葡萄白粉病的抗性,研究这2个基因的抗白粉病特性,为改良欧洲葡萄抗病性提供可用基因。【方法】利用同源克隆的方法获得中国野生华东葡萄‘白河-35-1’泛素连接酶基因VpUIRP2和VpUIRP3的编码区序列(CDS);通过实时荧光定量PCR方法检测其在白粉菌诱导和水杨酸处理后的葡萄叶片中的表达;使用聚乙二醇(PEG)介导法转化拟南芥原生质体进行亚细胞定位;通过农杆菌介导法获得转基因‘无核白’和‘红地球’植株;经过苯胺蓝染色,利用血球计数板计数分析白粉菌在转基因植株叶片上的生长情况,鉴定转基因株系的抗病性。【结果】中国野生华东葡萄‘白河-35-1’泛素连接酶基因VpUIRP2和VpUIRP3响应白粉菌和水杨酸处理,表达模式明显区别于感病对照‘赤霞珠’。中国野生华东葡萄‘白河-35-1’VpUIRP2蛋白定位在细胞质,VpUIRP3蛋白定位无特异性。通过农杆菌介导的遗传转化获得4个VpUIRP2的转基因‘红地球’株系和1个‘无核白’株系,转基因株系对白粉病表现出抗性。【结论】中国野生华东葡萄‘白河-35-1’泛素连接酶基因VpUIRP2能增强葡萄对白粉病的抗性,可以作为抗病基因用于改良欧洲葡萄的抗病性。 展开更多

关键词 中国野生华东葡萄 泛素连接酶 白粉病 遗传转化 表达分析

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刺葡萄0943抗白腐病转录因子VdWRKY49的克隆及序列分析 被引量：5

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作者 冯虎 张颖 +3 位作者 樊秀彩 姜建福 孙海生 刘崇怀 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期777-786,共10页

【目的】获得来源于中国野生抗病种质刺葡萄0943的转录因子Vd WRKY49基因,揭示其序列特征、基因功能与抗葡萄白腐病之间的关系,初步揭示抗病种质抗病机制。【方法】利用同源克隆的方法分别获得刺葡萄0943的转录因子Vd WRKY49基因的编码... 【目的】获得来源于中国野生抗病种质刺葡萄0943的转录因子Vd WRKY49基因,揭示其序列特征、基因功能与抗葡萄白腐病之间的关系,初步揭示抗病种质抗病机制。【方法】利用同源克隆的方法分别获得刺葡萄0943的转录因子Vd WRKY49基因的编码区和启动子区域,分析其序列特征,通过实时荧光定量检测其对白腐病菌和水杨酸诱导的反应,同时以感病品种欧亚种‘黑比诺’为对照,分析不同种质中的转录因子Vd WRKY49基因序列及表达差异。【结果】来源于中国野生种质刺葡萄0943的Vd WRKY49基因,在其编码区和启动子区域都有抗病基因的序列特征和位点特征,同时也存在不同,在DNA和氨基酸水平上与来源于欧亚种的‘黑比诺’Vv WRKY49有差异,这些差异可能造成了其结构功能的差异;受到葡萄白腐病和水杨酸诱导后,Vd WRKY49基因的表达量明显高于Vv WRKY49。【结论】来源于刺葡萄0943的Vd WRKY49基因受到白腐病菌和水杨酸诱导后表达量和表达模式明显区别来源于‘黑比诺’的Vv WRKY49基因,推测在葡萄抗病途径中转录因子WRKY49具有重要的生物学作用。 展开更多

关键词 中国野生刺葡萄0943 转录因子 WRKY49 白腐菌

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刺葡萄抗白腐病转录因子VdWRKY53基因克隆及表达 被引量：1

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作者 冯虎 张颖 +3 位作者 樊秀彩 姜建福 孙海生 刘崇怀 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1497-1505,共9页

利用同源克隆的方法,分别获得‘刺葡萄0943’的转录因子VdWRKY53基因的编码区和启动子区域,分析其序列特征,通过实时荧光定量检测其对白腐病菌侵染和水杨酸诱导的反应,并以感病品种欧亚种‘黑比诺’为对照,分析不同种质中转录因子VdWRK... 利用同源克隆的方法,分别获得‘刺葡萄0943’的转录因子VdWRKY53基因的编码区和启动子区域,分析其序列特征,通过实时荧光定量检测其对白腐病菌侵染和水杨酸诱导的反应,并以感病品种欧亚种‘黑比诺’为对照,分析不同种质中转录因子VdWRKY53基因序列及表达差异。结果表明:‘刺葡萄0943’的VdWRKY53基因,在其编码区和启动子区域都有抗病基因的序列和位点特征,在DNA和氨基酸水平上与‘黑比诺’VvWRKY53有5处差异,这5处氨基酸差异可能造成了其功能的差异;‘刺葡萄0943’和‘黑比诺’中的WRKY53基因启动子受葡萄白腐病菌和水杨酸诱导后表达量增加,且VdWRKY53基因表达量和趋势不同于‘黑比诺’VvWRKY53。生物信息学分析和实时荧光定量表明,在‘刺葡萄0943’抗病途径中VdWRKY53转录因子具有重要的生物学作用。 展开更多

关键词 中国野生'刺葡萄0943’ 转录因子 WRKY53 白腐菌 启动子分析

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