GPI锚固型CD46/CD55嵌合分子的设计及构建 被引量：5

1

作者 张利永 白云 +1 位作者 姜曼 黎万玲 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期33-36,共4页

目的　选取调控补体活化中心环节C3转化酶的两种膜调节蛋白CD4 6和CD5 5 ,设计构建了新型的GPI锚固型CD4 6 /CD5 5嵌合分子。方法　以CD4 6cDNA和CD5 5cDNA为模板 ,通过PCR及PCR重叠延伸技术 (SOE)得到CD4 6 /CD5 5嵌合cDNA。为避免双... 目的　选取调控补体活化中心环节C3转化酶的两种膜调节蛋白CD4 6和CD5 5 ,设计构建了新型的GPI锚固型CD4 6 /CD5 5嵌合分子。方法　以CD4 6cDNA和CD5 5cDNA为模板 ,通过PCR及PCR重叠延伸技术 (SOE)得到CD4 6 /CD5 5嵌合cDNA。为避免双分子连接后的空间结构和功能的变化 ,在CD4 6与CD5 5之间引入了多肽氨基酸接头 (Linker) ,然后克隆构建GPI锚固型CD4 6 /CD5 5 BluescriptM13克隆载体。结果　获得了阅读框完整、连接部位正确的GPI锚固型CD4 6 /CD5 5嵌合分子cDNA。结论　本研究为研制开发新一代的多功能。 展开更多

关键词 CD46 CD55 嵌合分子 SOE 膜调节蛋白

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组织型纤溶酶原激活剂A链与尿激酶原B链嵌合分子的构建与表达 被引量：1

2

作者 赵春梅 张洪涛 胡美浩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第4期528-531,共4页

利用 Ｄ Ｎ Ａ 重组技术和定位删除技术，将组织型纤溶酶原激活剂（ｔ Ｐ Ａ）的 Ａ 链（ Ｓｅｒｌ Ｔｈｒ２６３）基因与尿激酶原（ｐｒｏ Ｕ Ｋ）的 Ｂ链（ Ｓｅｒ１３８ Ｌｅｕ４１１）基因相连，得到嵌合分子基因ｔｕ... 利用 Ｄ Ｎ Ａ 重组技术和定位删除技术，将组织型纤溶酶原激活剂（ｔ Ｐ Ａ）的 Ａ 链（ Ｓｅｒｌ Ｔｈｒ２６３）基因与尿激酶原（ｐｒｏ Ｕ Ｋ）的 Ｂ链（ Ｓｅｒ１３８ Ｌｅｕ４１１）基因相连，得到嵌合分子基因ｔｕｐａ，并在昆虫杆状病毒系统中进行表达，表达量可达 ５００ Ｉ Ｕ／ｍ ｌ．经单克隆抗体免疫亲和层析纯化细胞表达上清液，得到ｔｕ Ｐ Ａ 嵌合分子，其比活为 ２００ ０００ Ｉ Ｕ／ｍ ｇ 蛋白． Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 及 Ｗ ｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定证明此表达产物分子量约为 ６０ ｋ Ｄ，与预期值相符．纤维蛋白平板测活及纤维蛋白亲和性分析初步证明，此嵌合分子的溶纤活性与ｐｒｏ Ｕ Ｋ 相近，而纤维蛋白亲和性高于 ｐｒｏ Ｕ Ｋ． 展开更多

关键词 纤溶酶原激活剂 嵌合分子 原激酶 构建 表达

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雄激素非依赖性前列腺癌细胞雄激素受体靶向降解的实验研究 被引量：3

3

作者 施云峰 唐悦清 +4 位作者 孙晓文 于殿军 韩邦旻 洪艳 夏术阶 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1059-1063,共5页

目的:研究合成的嵌合分子DHT-PROTAC通过泛素蛋白酶体途径对雄激素非依赖性前列腺癌C4-2B细胞表达雄激素受体(AR)的靶向降解作用,以及AR降解后该细胞分泌、增殖和凋亡的变化。方法:实验细胞分3组:空白对照组(RPMI1640培养液)、溶剂对照... 目的:研究合成的嵌合分子DHT-PROTAC通过泛素蛋白酶体途径对雄激素非依赖性前列腺癌C4-2B细胞表达雄激素受体(AR)的靶向降解作用,以及AR降解后该细胞分泌、增殖和凋亡的变化。方法:实验细胞分3组:空白对照组(RPMI1640培养液)、溶剂对照组[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]及实验组(100μmol/LDHT-PRO-TAC);制备细胞爬片,免疫组化和Western印迹检测C4-2B细胞中AR蛋白和Caspase-3表达情况的改变;ELISA法测定细胞培养液上清中PSA的浓度改变。噻唑兰(MTT)比色法检测细胞增殖抑制,细胞计数并绘制生长曲线观察细胞增殖能力。结果:与空白对照组和溶剂对照组相比,DHT-PROTAC处理后,C4-2B细胞中表达的AR蛋白明显减少,Western印迹检测结果表现为信号减弱(P<0.05);免疫组化见AR阳性细胞明显减少,阳性率降低达40%;与空白对照组和溶剂对照组相比,DHT-PROTAC处理后细胞培养上清液中PSA浓度降低约60%(P<0.05)。MTT试验显示随着DHT-PROTAC处理时间延长,对C4-2B细胞的抑制率逐渐增大,细胞生长呈时间依赖性抑制(P<0.05)。结论:嵌合分子DHT-PROTAC能靶向降解C4-2B细胞表达的AR,抑制细胞分泌PSA,并抑制该细胞的体外生长和增殖。 展开更多

关键词 雄激素受体 雄激素非依赖性前列腺癌 蛋白水解作用 嵌合分子

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嵌合分子靶向降解鼻咽癌细胞表皮生长因子受体的实验研究 被引量：2

4

作者 董洁 李双 +2 位作者 王庆 肖伟 尹述成 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS 北大核心 2017年第4期297-300,共4页

目的:检测合成的蛋白靶向嵌合分子(EGF-PROTAC)通过泛素-蛋白酶体途径体外对人鼻咽癌CNE-2细胞表皮生长因子受体(EGFR)靶向降解作用,并证实对该细胞增殖、凋亡的影响。方法:EGF-PROTAC处理细胞后,应用Western blot技术分析EGFR蛋白表达... 目的:检测合成的蛋白靶向嵌合分子(EGF-PROTAC)通过泛素-蛋白酶体途径体外对人鼻咽癌CNE-2细胞表皮生长因子受体(EGFR)靶向降解作用,并证实对该细胞增殖、凋亡的影响。方法:EGF-PROTAC处理细胞后,应用Western blot技术分析EGFR蛋白表达水平;CKK-8、流式细胞术、Transwell侵袭实验检测EGF-PROTAC对CNE-2产生的生物学效应。结果:Western blot技术显示EGF-PROTAC组EGFR蛋白的表达水平显著低于对照组(P<0.05);CKK-8法显示EGF-PROTAC组3、6、9、12hCNE-2细胞存活率显著低于溶剂对照组(P<0.05);流式细胞术显示EGF-PROTAC组细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.05);Transwell法显示EGF-PROTAC组CNE-2细胞侵袭到Transwell小室滤膜下细胞数显著低于溶剂对照组(P<0.05)。结论:EGF-PROTAC能够靶向降解CNE-2细胞的EGFR,在体外能抑制鼻咽癌细胞的生长、促进凋亡。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 嵌合分子 泛素化 表皮生长因子受体

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嵌合分子(DHT-PROTAC)在前列腺癌研究中的进展 被引量：1

5

作者 魏海彬 王悦童 +4 位作者 孙丰 邵怡 卓见 庞昆 孙晓文 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第3期590-592,共3页

前列腺癌多发于老年男性,已成为老年男性常见肿瘤之一。内分泌治疗目前是晚期前列腺癌主要治疗方法,但仍避免不了前列腺癌最终进展成激素非依赖性前列腺癌,导致内分泌治疗的失败。当前,对前列腺癌细胞株的AR表达的研究,主要集中在DNA水... 前列腺癌多发于老年男性,已成为老年男性常见肿瘤之一。内分泌治疗目前是晚期前列腺癌主要治疗方法,但仍避免不了前列腺癌最终进展成激素非依赖性前列腺癌,导致内分泌治疗的失败。当前,对前列腺癌细胞株的AR表达的研究,主要集中在DNA水平及mRNA水平,而对AR蛋白翻译后调控的研究较少。近些年来,嵌合分子(DHT-PROTAC)是基于蛋白水平,调控AR蛋白的表达,成为研究前列腺癌转归新的热点。DHT-PROTAC是一种新型人工合成的异型双功能小分子;这种小分子是DHT与泛素连接酶E3识别基团的嵌合体,它不仅能与AR结合,而且能在结合后,诱导AR的泛素化,从而通过泛素-蛋白酶途径降解AR;本文介绍了嵌合分子的作用原理,回顾了近些年前列腺癌的治疗进展,分析了嵌合分子将来在前列腺癌治疗中的应用前景。 展开更多

关键词 嵌合分子 DHT—PROTAC 前列腺癌 进展

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抗人活化血小板单抗的Fab片段与尿激酶B链的嵌合分子制备及其体外溶栓研究 被引量：1

6

作者 吴国新 杜鸰 +1 位作者 朱德熙 阮长耿 《苏州医学院学报》 1993年第1期1-5,84,共5页

抗体介导的纤溶剂是以抗体与血栓呈高选择的结合为基础的。本研究利用自制的抗人活化血小板α-颗粒膜蛋白(GMP—140)的单抗SZ—51,经木瓜蛋白酶消化制备抗体的Fab片段,与纤溶剂尿激酶的B链经化学双功能交联剂SPDP交联后,其嵌合分子的体... 抗体介导的纤溶剂是以抗体与血栓呈高选择的结合为基础的。本研究利用自制的抗人活化血小板α-颗粒膜蛋白(GMP—140)的单抗SZ—51,经木瓜蛋白酶消化制备抗体的Fab片段,与纤溶剂尿激酶的B链经化学双功能交联剂SPDP交联后,其嵌合分子的体外溶栓率较尿激酶高3～5倍,而血浆中纤维蛋白原及纤溶酶原的消耗减少,提示溶栓率的提高与嵌合分子的选择性增高有关,这种新型的嵌合分子将为体内特异性溶栓剂的研制提供一条新的途径。 展开更多

关键词 膜蛋白 抗体 尿激酶 嵌合分子 溶栓

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B7-TNFR嵌合分子的构建及其在真核细胞中的表达

7

作者 王蓉 喻红 +3 位作者 周伟国 应蓓蓓 赵寿元 李昌本 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期259-263,共5页

B7-CD2 8/CTLA 4共刺激旁路在免疫应答中的T细胞激活中有重要功能 ,B7分子的肿瘤基因疗法是目前肿瘤基因治疗的热点和方向 .TNFα能通过TNFR诱导细胞凋亡 ,直接杀伤肿瘤细胞 .构建了由共刺激分子B7 1的细胞外区与TNFRⅠ的越膜区和细胞... B7-CD2 8/CTLA 4共刺激旁路在免疫应答中的T细胞激活中有重要功能 ,B7分子的肿瘤基因疗法是目前肿瘤基因治疗的热点和方向 .TNFα能通过TNFR诱导细胞凋亡 ,直接杀伤肿瘤细胞 .构建了由共刺激分子B7 1的细胞外区与TNFRⅠ的越膜区和细胞内区组成的嵌合分子B7 TNFR ,并在细胞表面得到了表达 .这种分子可能从 2个方面达到肿瘤治疗的目的 :(1)增强肿瘤细胞激活机体免疫系统的能力 ;(2 )诱导细胞凋亡 ,直接杀伤肿瘤细胞 ,从而增强肿瘤基因治疗的效果 . 展开更多

关键词 共刺激分子 基因治疗 嵌合分子 B7-TNFR 肿瘤

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结核杆菌Ag85A与协同刺激分子CD80融合DNA真核表达质粒的构建与鉴定

8

作者 赵晔 张帆 +2 位作者 史小玲 张建军 钟森 《泸州医学院学报》 2003年第5期382-385,共4页

目的 :采用基因重组技术 ,将结核杆菌Ag85A与协同刺激信号CD80基因融合 ,构建成融合结核DNA疫苗 ,旨在提高结核DNA疫苗的免疫效果 ,可望通过基因免疫 ,获得免疫原性强 ,以低剂量即可有效刺激机体产生T细胞和B细胞应答 ,安全可靠的新型... 目的 :采用基因重组技术 ,将结核杆菌Ag85A与协同刺激信号CD80基因融合 ,构建成融合结核DNA疫苗 ,旨在提高结核DNA疫苗的免疫效果 ,可望通过基因免疫 ,获得免疫原性强 ,以低剂量即可有效刺激机体产生T细胞和B细胞应答 ,安全可靠的新型结核病疫苗 .方法①pcDNA3-tPA -Ag85A质粒的构建和鉴定以V1Jns-tPA-Ag85A质粒为模板 ,PCR扩增tPA -Ag85A ,(不含终止密码 ) ,定向插入pcDNA3载体的BamHⅠ和EcoRⅠ位点之间 ,构建成pcDNA3-tPA -Ag85A质粒。②pcDNA3-tPA -Ag85A/CD80质粒的构建与鉴定以pcDNA3CD80质粒为模板 ,扩增CD80 (含终止密码 )定向插入pcDNA3-tPA -Ag85A质粒的EcoRⅠ和XbaⅠ位点之间 ,构建成pcDNA -tPA-Ag85A/CD80融合DNA真核表达质粒。结果 :重组质粒pcDNA3-tPA -Ag85A和pcDNA3-tPA -Ag85A/CD80经酶切鉴定和测序鉴定均构建正确。结论 :结核杆菌Ag85A与协同刺激分子CD80融合DNA真核表达质粒构建成功 ,为进一步研究比较其免疫保护效果 。 展开更多

关键词 结核杆菌 抗原85A 协同刺激分子 DNA疫苗 融合质粒 真核表达质粒 AG85A CD80 基因融合

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新型嵌合补体抑制分子HCl-3的设计构建及真核细胞表达的研究

9

作者 张晓平 白云 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2003年第4期296-300,共5页

目的基于抑制补体活化的两个关键环节,即C3/C5转化酶及MAC的形成,设计、构建及制备一种新型、高效的补体抑制剂.方法首先设计引物,通过PCR技术扩增重组可溶性CD46/CD55/CD59嵌合分子cDNA片段,重组于pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建兼有... 目的基于抑制补体活化的两个关键环节,即C3/C5转化酶及MAC的形成,设计、构建及制备一种新型、高效的补体抑制剂.方法首先设计引物,通过PCR技术扩增重组可溶性CD46/CD55/CD59嵌合分子cDNA片段,重组于pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建兼有三分子功能的CD46/CD55/CD59嵌合补体抑制分子,命名为HCI-3(Human Chimeric Complement Inhibitor, HCI-3).分别利用COS-7细胞和CHO细胞进行表达,并用抗人CD46多抗及抗人CD55,CD59单抗对表达产物进行Western Blotting鉴定.结果 DNA测序结果证实,前端带有CD59信号肽序列,后端融合有编码6个组氨酸碱基的HCI-3cDNA片段的阅读框完整.免疫印迹结果显示,表达的重组蛋白分别能与抗人CD46多克隆抗体和抗人CD55,CD59单抗结合.结论成功构建并在真核细胞内表达了重组可溶性HCI-3分子,为进一步研制和开发新一代多功能、多靶点补体抑制剂奠定了基础. 展开更多

关键词 CD46/CD55/CD59 PCR 嵌舍分子 免疫印迹

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可溶性嵌合补体抑制分子的构建及表达

10

作者 张晓平 白云 +1 位作者 黎万玲 姜曼 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期426-429,共4页

目的　制备能抑制补体活化的 2个关键环节 (C3 C5转化酶和MAC的形成 )的一种新型、高效补体抑制剂。方法　先设计引物 ,然后通过PCR技术扩增重组可溶性CD46 CD55 CD59嵌合分子cDNA片段 ,重组于pSecTagA真核表达载体上 ,分别利用COS 7细... 目的　制备能抑制补体活化的 2个关键环节 (C3 C5转化酶和MAC的形成 )的一种新型、高效补体抑制剂。方法　先设计引物 ,然后通过PCR技术扩增重组可溶性CD46 CD55 CD59嵌合分子cDNA片段 ,重组于pSecTagA真核表达载体上 ,分别利用COS 7细胞和中国仓鼠卵巢 (Chinesehamsterovary ,CHO )细胞进行表达 ,并用抗人CD46多克隆抗体及抗人CD55、CD59单克隆抗体对表达产物进行westernblotting鉴定。结果　DNA测序证实 ,前端带有小鼠IgGκ链前导序列 ,后端融合有编码 6个组氨酸碱基的CD46 CD55 CD59嵌合分子cDNA片段的阅读框完整。免疫印迹结果显示 ,表达的重组蛋白分别能与抗人CD46多克隆抗体和抗人CD55、CD59单克隆抗体结合。结论　成功构建并在真核细胞内表达了重组可溶性CD46 CD55 CD59嵌合分子 ,为进一步研制和开发新一代多功能、多靶点补体抑制剂奠定了基础。 展开更多

关键词 可溶性 补体抑制 PCR 嵌合分子 免疫印迹 分子生物学

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嵌合跨膜型人CD55基因的重组逆病毒表达质粒的构建 被引量：1

11

作者 杜瑞琴 白云 +1 位作者 黎万玲 姜曼 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期48-51,共4页

目的　构建嵌合跨膜型CD5 5基因的重组逆病毒表达质粒。方法　采用PCR技术扩增编码CD5 5信号肽及成熟蛋白胞外区 (-3 4 -3 0 4aa)的DNA片段 ,双侧引入EcoRⅠ、SspⅠ位点 ,与编码CD46分子的跨膜区及膜内区 (2 70～ 3 5 0aa)的DNA片段的5... 目的　构建嵌合跨膜型CD5 5基因的重组逆病毒表达质粒。方法　采用PCR技术扩增编码CD5 5信号肽及成熟蛋白胞外区 (-3 4 -3 0 4aa)的DNA片段 ,双侧引入EcoRⅠ、SspⅠ位点 ,与编码CD46分子的跨膜区及膜内区 (2 70～ 3 5 0aa)的DNA片段的5’末端自身的StuI位点连接 ,构建嵌合跨膜型CD5 5DNA片段 ,序列测定后将此嵌合CD5 5片段与pLXSN逆病毒载体连接构建重组表达质粒 ,酶切鉴定插入片段的方向。结果　DNA序列测定证实所构建的嵌合跨膜型CD5DNA阅读框完整、连接部位序列正确 ;HindⅢ酶切鉴定得到了正向插入的CD5 5TM pLXSN重组表达质粒。结论　我们成功构建了嵌合跨膜型CD5 5DNA片段及含此片段的重组逆病毒表达载体CD5 5TM pLXSN ,为进一步在真核细胞中表达嵌合分子 ,比较研究GPI锚固型CD5 5分子与细胞活化信号转导的关系建立良好对照并为应用跨膜型的CD5 5分子对PNH进行基因治疗奠定了分子生物学基础。 展开更多

关键词 嵌合跨膜型分子 重组逆转录病毒表达载体 CD55基因 质粒

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PROTACs靶向蛋白质降解技术及其在合理药物设计中的应用 被引量：1

12

作者 梁倩倩 曹亚权 +1 位作者 杨鹏 李亚楠 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期442-450,共9页

近年来,合成蛋白水解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimeric molecule,PROTAC)作为一种新颖的诱导蛋白降解策略引起了药物化学家们的广泛关注。这种双能嵌合分子通过连接体将靶蛋白配体与E3连接酶配体连接,招募E3至靶蛋白表面,引... 近年来,合成蛋白水解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimeric molecule,PROTAC)作为一种新颖的诱导蛋白降解策略引起了药物化学家们的广泛关注。这种双能嵌合分子通过连接体将靶蛋白配体与E3连接酶配体连接,招募E3至靶蛋白表面,引发多聚泛素化过程诱导蛋白降解。这种策略已经成功降解多种与人类疾病相关的蛋白质,并具有高效能、高选择性、以及靶向"不可成药"蛋白等优势。本文将重点介绍PROTACs技术的独特优势和研究进展,以及设计PROTAC分子时亟待解决的难题。 展开更多

关键词 蛋白水解靶向嵌合体 泛素化 降解剂 靶点 药物设计

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Chimeraplasty基因修复技术及其应用

13

作者 李中 曹明富 《杭州师范学院学报（自然科学版）》 CAS 2003年第2期57-59,66,共4页

基因治疗是目前生物学和医学领域里的一个研究热点 ,传统的基因替代方法有许多很难克服的缺点 ,与之相比 ,基因修复策略有着明显的优点 .在此 ,文章介绍了近年来发展起来的具有较好应用价值和医学前景的一种基因修复新技术——

关键词 基因治疗 基因修复 chimeraplasty技术 RNA/DNA嵌合分子

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嵌合分子ut-PA(1)sf-9表达产物的纯化及其性质的初步鉴定

14

作者 张拥军 余瑞元 徐长法 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第2期224-226,共3页

嵌合蛋白 ut- PA( u- PA与 t- PA的嵌合型纤溶酶原激活剂 )基因删除编码 u- PA中 R1 78—R1 81的 1 2个核苷酸后 ,得到的嵌合分子 ut- PA( 1 )在昆虫细胞 sf- 9中表达 ,通过苯甲脒 -Sepharose 6B亲和柱层析对表达产物进行纯化 .得到的... 嵌合蛋白 ut- PA( u- PA与 t- PA的嵌合型纤溶酶原激活剂 )基因删除编码 u- PA中 R1 78—R1 81的 1 2个核苷酸后 ,得到的嵌合分子 ut- PA( 1 )在昆虫细胞 sf- 9中表达 ,通过苯甲脒 -Sepharose 6B亲和柱层析对表达产物进行纯化 .得到的纯品走 SDS- PAGE,结果显示 ,其分子量为60 k D.血凝块溶解实验结果表明 ,嵌合分子 ut- PA( 1 )有良好的体外溶栓能力 .在不同剂量 PAI- 1的抑制条件下测定 ,亲本嵌合蛋白 ut- PA的活力分别下降 2 2 .7%和 1 3.8%时 ,嵌合分子 ut- PA( 1 )只分别下降了 1 2 .9%和 9.1 % .说明突变体 ut- PA( 1 )具有一定的对 PAI- 展开更多

关键词 嵌合分子ut--PA(1) 纯化 抗PAI-1抗性 鉴定

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鸡Igλ轻链基因克隆、序列分析及其在COS7细胞膜上的定位表达 被引量：1

15

作者 张红 王健 +4 位作者 王丽 席俊 易明林 张改平 章金刚 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第8期132-136,共5页

为了研究鸡B细胞膜免疫球蛋白(mIg)的功能,深入了解鸡免疫系统抗体基因的特点,从鸡法氏囊B细胞cDNA中扩增出Igλ轻链基因,对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了分析和比较。该基因cDNA全长873bp,编码含226个氨基酸的Igλ轻链,N-端21个氨基... 为了研究鸡B细胞膜免疫球蛋白(mIg)的功能,深入了解鸡免疫系统抗体基因的特点,从鸡法氏囊B细胞cDNA中扩增出Igλ轻链基因,对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了分析和比较。该基因cDNA全长873bp,编码含226个氨基酸的Igλ轻链,N-端21个氨基酸构成轻链信号肽,随后是2个Ig样结构域。运用融合PCR的方法将该基因与牛IgG Fc受体γRⅡ跨膜区序列嵌合形成重组跨膜分子,构建真核表达载体pcDNA-λR2T,转染COS7细胞,荧光抗体染色及流式细胞术检测到重组鸡Igλ轻链在细胞膜上的表达。所扩增的鸡Igλ轻链基因以及构建表达于细胞膜上的重组鸡Igλ轻链跨膜分子,为研究鸡免疫系统中的抗体轻链基因,探索Igλ轻链和B细胞膜免疫球蛋白的功能奠定技术基础。 展开更多

关键词 鸡Igλ轻链 重组跨膜分子 COS7细胞 膜定位表达 牛IgGFc受体γRⅡ

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重组Dsg3EC_(1-2)及其嵌合毒素蛋白的原核表达及纯化

16

作者 翟志芳 刁庆春 +2 位作者 郝飞 钟白玉 唐书谦 《中国麻风皮肤病杂志》 2005年第3期169-171,共3页

目的:在大肠杆菌中高效表达并纯化重组天疱疮抗原桥粒芯糖蛋白3(Dsg3)的胞外结构域EC1-2片段及其与假单胞菌外毒素PE40的嵌合毒素Dsg3EC1-2PE40。方法:在大肠杆菌中对目的蛋白进行诱导表达,并用金属鏊合亲和层析法进行分离纯化,经Wester... 目的:在大肠杆菌中高效表达并纯化重组天疱疮抗原桥粒芯糖蛋白3(Dsg3)的胞外结构域EC1-2片段及其与假单胞菌外毒素PE40的嵌合毒素Dsg3EC1-2PE40。方法:在大肠杆菌中对目的蛋白进行诱导表达,并用金属鏊合亲和层析法进行分离纯化,经WesternBlot试验鉴定。结果:所得重组蛋白可以和寻常型天疱疮抗体IgG发生特异性结合,而与正常人IgG不发生反应,其纯化后纯度分别达85%及80%。结论:Dsg3EC1-2片段及其嵌合毒素Dsg3EC1-2PE40在原核细胞中得到成功表达,为天疱疮的治疗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 DSG3 天疱疮 EC 嵌合 治疗 纯化 抗体IGG 桥粒芯糖蛋白 人IgG 正常人

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