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去除信号肽有利鸡白细胞介素-10在哺乳动物细胞胞浆的表达 被引量:3
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作者 彭蔚宇 王丽廷 +4 位作者 王兴童 杨柳 孟兴 陈洪岩 韩凌霞 《实验动物科学》 2017年第2期16-20,25,共6页
目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-... 目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-10M)的chIL-10编码基因,克隆入含有报告基因e GFP和新霉素抗性基因(neo)的真核表达载体pEGFP-N1中,获得重组质粒N1-euchIL-10F和N1-euchIL-10M。分别转染中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1),经G418加压筛选、纯化,获得稳定表达chIL-10蛋白的CHO-K1细胞系,利用激光共聚焦试验观察外源蛋白的细胞定位。结果通过RT-PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验,表明euchIL-10F和euchIL-10M均整合入细胞基因组中,且N1-euchIL-10M在胞浆大量表达较强的绿色荧光,而N1-euchIL-10F表达的荧光较弱,且胞浆内含量很低。结论去除信号肽利于chIL-10基因在体外真核细胞胞浆的表达。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-10 信号肽 真核表达 CHO-K1细胞
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Dietary supplementation of sulfur amino acids improves intestinal immunity to Eimeria in broilers treated with anti-interleukin-10 antibody
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作者 Zhouzheng Ren Jiakun Yan +6 位作者 Rose Whelan Xujie Liao Daniel E.Bütz Maria K.Arendt Mark E.Cook Xiaojun Yang Thomas D.Crenshaw 《Animal Nutrition》 SCIE CSCD 2022年第3期382-389,共8页
Oral antibody to interleukin-10(anti-IL-10)enhances the intestinal immune defense against Eimeria.The sulfur amino acids methionine and cysteine(MtC)play essential roles in inducing and maintaining protective immune r... Oral antibody to interleukin-10(anti-IL-10)enhances the intestinal immune defense against Eimeria.The sulfur amino acids methionine and cysteine(MtC)play essential roles in inducing and maintaining protective immune responses during intestinal infections.Hence,increased dietary MtC may support the anti-IL-10-induced intestinal immunity to Eimeria.Broilers(n=640)were arranged in a 2×2×2 factorial design with 2 levels of each of the 3 main factors:dietary standardized ileal digestible(SID)MtC levels(0.6%or 0.8%),dietary anti-IL-10 supplementation(with or without),and coccidiosis challenge(control or challenge).Briefly,the broilers were supplied with either 0.6%or 0.8%SID MtC,each with or without anti-IL-10(300 mg/kg),from d 10 to 21.On d 14,broilers from each diet were gavaged with either PBS or Eimeria.The resulting Eimeria infection induced fecal oocyst shedding and intestinal lesions.Broilers fed 0.8%SID MtC(main effects,P≤0.05)had decreased feed-to-gain ratio,increased duodenum and cecum luminal anti-Eimeria IgA titers,and decreased fecal oocyst counts,when compared to 0.6%SID MtC.The supplementation of anti-IL-10(main effects,P≤0.05)increased cecum luminal total IgA concentration and decreased cecum lesions.Interactions(P≤0.05)were detected for growth performance and cecum luminal IFN-γ.Briefly,the highest body weight gain and feed intake were reached in PBS-gavaged broilers fed 0.8%SID MtC with no anti-IL-10 and in Eimeria-challenged broilers fed 0.8%SID MtC with anti-IL-10.In Eimeria-infected broilers,anti-IL-10 increased intestinal luminal IFN-γ and body weight gain only at 0.8%SID MtC.Collectively,anti-IL-10 increased intestinal luminal IFN-γ levels,decreased cecum lesions and restored growth only when fed with adequate amounts of sulfur amino acids.Our findings underscore the importance of providing sufficient essential nutrients to support the anti-IL-10 induced immunity against coccidiosis. 展开更多
关键词 chicken COCCIDIOSIS Egg yolk antibody interleukin-10 Sulfur amino acid
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鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1
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作者 高俊峰 柳亚楠 +3 位作者 王永强 曹红 李晓齐 郑世军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第12期3-6,共4页
为制备鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体,以常规分子生物学技术从禽细胞系MDCC-MSB1克隆chIL-10基因,将去信号肽chIL-10基因亚克隆至原核表达载体p ET-30a,并在大肠杆菌中表达,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经4次免疫后,取小鼠脾细胞... 为制备鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体,以常规分子生物学技术从禽细胞系MDCC-MSB1克隆chIL-10基因,将去信号肽chIL-10基因亚克隆至原核表达载体p ET-30a,并在大肠杆菌中表达,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经4次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。将原核表达的GST-chIL-10融合蛋白作为包被抗原,利用间接ELISA筛选阳性克隆。阳性细胞株经3次亚克隆后,获得3株稳定分泌chIL-10抗体的杂交瘤细胞克隆,分别命名为4B2、4F3以及1E3。经间接ELISA测定,以上3株杂交瘤细胞腹水效价为1∶3.2×10~6,亲和力解离常数(Kd)分别为1.05×10^(-9)、5.01×10^(-10)以及7.59×10^(-10)。抗体重链类型分别为Ig G2a、Ig G2a以及Ig G1。经Western Blot试验证明,3株单抗均能特异地识别原核或真核表达的chIL-10蛋白,4B2、4F3单抗识别的抗原表位区域为chIL-10 N端的1 aa^52 aa,1E3识别的是N端的52 aa^102 aa。这些单抗为鸡IL-10的检测及生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡IL-10 原核表达 单克隆抗体
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原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析
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作者 王丽廷 王兴童 +5 位作者 杨柳 彭蔚宇 孟兴 陈洪岩 高文伟 韩凌霞 《实验动物科学》 2017年第3期1-5,共5页
目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原... 目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。 展开更多
关键词 鸡白介素-10 原核表达 鼠抗血清 体内实验
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