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乳糖诱导重组鸡γ干扰素基因在大肠杆菌中的表达 被引量:7
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作者 王宏华 凌红丽 +3 位作者 马向东 王雷 孙海新 赵玉惠 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第6期25-27,共3页
本文考察了乳糖代替IPTG诱导鸡γ干扰素(ChIFN-γ)在重组大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性。分别对乳糖作为诱导剂时的诱导时机、乳糖浓度、诱导持续时间和添加方式等方面进行了分析,并在最优诱导条件下与IPTG诱导进行比较。结果表明,... 本文考察了乳糖代替IPTG诱导鸡γ干扰素(ChIFN-γ)在重组大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性。分别对乳糖作为诱导剂时的诱导时机、乳糖浓度、诱导持续时间和添加方式等方面进行了分析,并在最优诱导条件下与IPTG诱导进行比较。结果表明,工程菌在对数生长中后期(OD600为1.5)添加终浓度为2g/L的乳糖诱导7h对蛋白的表达和菌体量最为有利。由于乳糖本身可作为碳源被菌体利用,分批流加乳糖效果优于一次性添加。与IPTG诱导相比,乳糖诱导的蛋白表达量为29.8%,稍低于IPTG的32.3%,诱导后蛋白表达时间也有所滞后,但收获的菌体量则显著高于IPTG诱导,约为1.21倍,显示出了乳糖作为诱导剂的自身的优势。研究结果证明乳糖可以作为诱导剂应用于重组鸡γ干扰素的工业化生产,同时也为其它重组基因工程药物的生产提供了有益的参考和借鉴。 展开更多
关键词 乳糖诱导 IPTG γ干扰素
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重组鸡γ-干扰素对H5亚型禽流感灭活苗的免疫增强作用 被引量:7
2
作者 曾岩 任晓峰 +4 位作者 蔡皓 刘明 牛泽 李广兴 理番 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期87-90,共4页
为研究重组鸡γ-干扰素(Chicken interferonγ,ChIFN-γ)对禽流感灭活疫苗的免疫增强效果,使用重组鸡γ-干扰素作为免疫佐剂,联合禽流感灭活疫苗采用胸部肌肉注射的方式免疫SPF雏鸡,免疫后每周测定血清抗体效价、免疫器官T、B淋巴细胞... 为研究重组鸡γ-干扰素(Chicken interferonγ,ChIFN-γ)对禽流感灭活疫苗的免疫增强效果,使用重组鸡γ-干扰素作为免疫佐剂,联合禽流感灭活疫苗采用胸部肌肉注射的方式免疫SPF雏鸡,免疫后每周测定血清抗体效价、免疫器官T、B淋巴细胞转化水平,攻毒后计算攻毒保护率。结果表明,鸡γ-干扰素提高了血清抗体水平,免疫器官T、B淋巴细胞转化水平和攻毒保护率,与疫苗组相比多数指标差异显著(P<0.05)。鸡γ-干扰素对H5亚型禽流感灭活疫苗具有免疫增强作用。 展开更多
关键词 γ-干扰素 禽流感病毒 灭活苗 免疫增强
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重组酵母鸡γ干扰素的抗病毒活性测定及临床初步应用 被引量:5
3
作者 蔡梅红 张素芳 +2 位作者 曹瑞兵 郭伟玲 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期115-119,共5页
为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素,以ConA(刀豆素A)诱导培养4-10h的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板,通过RT-PCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因。通过EcoRⅠ和XbaⅠ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插... 为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素,以ConA(刀豆素A)诱导培养4-10h的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板,通过RT-PCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因。通过EcoRⅠ和XbaⅠ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插入到酵母表达载体pPICZa-A上,得到了重组酵母鸡γ干扰素表达载体pPICZa-A-CHIFN-γ,经Bstx Ⅰ线性化后的重组载体被转入酵母菌株X33中,通过PCR的方法来筛选重组酵母菌,在甲醇诱导表达后,SDS-PAGE结果显示有两株重组菌在诱导72h后其表达上清中有大小为16kDa的目的条带。干扰素生物活性测定经典实验(微量病变抑制实验)和临床初步应用结果皆说明重组酵母鸡γ干扰素具有较强的抗病毒的生物活性和较好的临床使用前景。 展开更多
关键词 γ干扰素 分泌表达 临床应用
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鸡γ干扰素基因在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:3
4
作者 周庆丰 毕英佐 +2 位作者 马静云 陈峰 曹永长 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期105-108,共4页
为了获得高效分泌表达ChIFNγ的重组毕赤酵母菌株,利用基因工程技术,将435 bp的ChIFNγ成熟肽编码基因亚克隆到巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达载体PPICZαC中,将该重组质粒用BstX Ⅰ线性化并通过电击法转化毕赤酵母X-33菌株,用500 ... 为了获得高效分泌表达ChIFNγ的重组毕赤酵母菌株,利用基因工程技术,将435 bp的ChIFNγ成熟肽编码基因亚克隆到巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达载体PPICZαC中,将该重组质粒用BstX Ⅰ线性化并通过电击法转化毕赤酵母X-33菌株,用500 μ/mL抗生素Zeocin筛选高拷贝阳性重组菌.甲醇诱导表达的重组ChIFNγ经SDS-PAGE电泳,可在相对分子质量约2.0×104处检测到目的蛋白带,目的蛋白占酵母表达上清液总蛋白质的35%.微量细胞病变抑制法检测表达产物的生物学活性,检测结果表明,巴斯德毕赤酵母表达的重组ChIFNγ的抗病毒效价为6 400 U/mL. 展开更多
关键词 γ干扰素基因 毕赤酵母 基因表达 抗病毒活性
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鸡干扰素-γ抗球虫作用研究进展 被引量:4
5
作者 张步彩 李祥瑞 +2 位作者 刘玉华 周广生 刘俊栋 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2008年第1期61-63,共3页
干扰素-γ(IFN-γ)是一种重要的细胞因子,主要由T细胞、NK细胞产生,具有广谱抗病毒、抗肿瘤和双向免疫调节作用。重组鸡干扰素-γ(rChIFN-γ)已被证明与鸡球虫病的免疫有关。本文就鸡干扰素-γ(ChIFN-γ)的生物学特性及其抗球虫作用的... 干扰素-γ(IFN-γ)是一种重要的细胞因子,主要由T细胞、NK细胞产生,具有广谱抗病毒、抗肿瘤和双向免疫调节作用。重组鸡干扰素-γ(rChIFN-γ)已被证明与鸡球虫病的免疫有关。本文就鸡干扰素-γ(ChIFN-γ)的生物学特性及其抗球虫作用的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 鸡干扰素-γ 细胞因子 鸡球虫病
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鸡干扰素γ与白介素2对外周血中Th1细胞分化相关细胞因子的影响 被引量:3
6
作者 刘玲 焦鹏涛 +4 位作者 王萌 李晶 孙蕾 范文辉 刘文军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期3329-3343,共15页
为了探讨鸡干扰素γ(chicken interferon-γ,ChIFN-γ)与白介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)对1型辅助性T细胞(type 1 helper T lymphocytes,Th1)分化的影响,本研究原核表达、纯化了ChIFN-γ与ChIL-2,并以不同浓度刺激刀豆球蛋白A(c... 为了探讨鸡干扰素γ(chicken interferon-γ,ChIFN-γ)与白介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)对1型辅助性T细胞(type 1 helper T lymphocytes,Th1)分化的影响,本研究原核表达、纯化了ChIFN-γ与ChIL-2,并以不同浓度刺激刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)活化的鸡外周血淋巴细胞,检测其对Th1细胞分化相关细胞因子表达的影响。结果表明,不同浓度的ChIFN-γ与ChIL-2均可上调Th1细胞分化相关细胞因子的转录水平,最佳刺激浓度分别为12.5μg/mL和25.0μg/mL。然后将ChIFN-γ和ChIL-2分别与H9N2灭活疫苗联用,以口服或肌肉注射方式免疫无特定病原体(specific pathogen free,SPF)鸡,检测其对Th1细胞分化相关细胞因子表达的影响。结果表明,与单独使用H9N2疫苗相比,ChIFN-γ和ChIL-2均能显著上调H9N2疫苗诱导的Th1细胞分化相关细胞因子的转录水平,且肌肉注射的效果优于口服。本研究通过对Th1细胞分化相关细胞因子进行检测,从体外和体内水平证实了ChIFN-γ与ChIL-2能够增强ConA或H9N2灭活疫苗诱导的Th1细胞分化,为其作为疫苗佐剂使用提供了理论依据。 展开更多
关键词 鸡干扰素γ 鸡白介素2 Th1细胞分化 细胞因子 疫苗佐剂
原文传递
鸡γ-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性研究 被引量:4
7
作者 刘新文 王秀丽 +5 位作者 郭东春 邹敏 郭伟伟 宫晓 李陆梅 范根成 《中国家禽》 北大核心 2017年第1期30-33,共4页
将克隆的鸡γ-干扰素(Ch IFNγ)基因亚克隆至酵母表达载体p PICZα-A中,构建重组质粒p PIC-Ch IFNγ。将鉴定正确的质粒p PIC-Ch IFNγ线性化,通过电转化整合到毕赤酵母菌株X-33基因组中,得到阳性菌株。经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经S... 将克隆的鸡γ-干扰素(Ch IFNγ)基因亚克隆至酵母表达载体p PICZα-A中,构建重组质粒p PIC-Ch IFNγ。将鉴定正确的质粒p PIC-Ch IFNγ线性化,通过电转化整合到毕赤酵母菌株X-33基因组中,得到阳性菌株。经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经SDS-PAGE检测,结果表明Ch IFNγ在酵母中获得了分泌型表达,表达产物分子量约为20 ku。表达产物粗提后以细胞病变抑制法检测其活性,效价为107.69U/m L;在鸡胚中能有效抑制H9N2亚型禽流感病毒的增殖;动物攻毒保护试验结果显示,表达的蛋白具有较好的抗病毒活性。 展开更多
关键词 γ-干扰素 分泌表达 抗病毒活性
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鸡γ-干扰素基因的克隆与序列分析 被引量:3
8
作者 敖艳华 任涛 孔令辰 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期86-89,共4页
为了研究鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)基因的功能并进一步探究其在控制家禽传染病方面的应用,根据GenBank已发表的ChIFN-γcDNA基因序列自行设计引物,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从伴刀豆球蛋白A(Co-nA)刺激培养鸡脾淋巴细胞中提... 为了研究鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)基因的功能并进一步探究其在控制家禽传染病方面的应用,根据GenBank已发表的ChIFN-γcDNA基因序列自行设计引物,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从伴刀豆球蛋白A(Co-nA)刺激培养鸡脾淋巴细胞中提取的总RNA中扩增得到ChIFN-γ,然后连接到pMD18-T载体上并转化到Top10感受态细胞中,获得阳性重组质粒并进行正确性序列测序.核甘酸序列结果表明,试验得到了长为513 bp的ChIFN-γ基因,与原鸡(Gu llus)IFN-γ的同源性可高达100%,其含有1个495 bp的开放性阅读框架,编码164个氨基酸,推测其成熟蛋白的相对分子质量约为18 000. 展开更多
关键词 γ-干扰素 克隆 序列分析
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鸡γ-干扰素在杆状病毒系统中的表达 被引量:2
9
作者 戴华 季琰 +3 位作者 郑佳玉 徐正中 潘志明 焦新安 《生物技术通讯》 CAS 2009年第6期810-813,共4页
目的:获得具有生物学活性的重组鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)。方法:应用RT-PCR方法扩增ChIFN-γ基因cDNA,将其克隆入杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1,构建重组质粒pFast-ChIFN-γ,通过位点特异性转座,将ChIFN-γ基因整合到Bacmid穿梭载... 目的:获得具有生物学活性的重组鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)。方法:应用RT-PCR方法扩增ChIFN-γ基因cDNA,将其克隆入杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1,构建重组质粒pFast-ChIFN-γ,通过位点特异性转座,将ChIFN-γ基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建重组质粒pBac-ChIFN-γ并转染昆虫细胞Sf9,采用间接免疫荧光试验(IFA)、ELISA试验鉴定重组ChIFN-γ的表达,通过细胞病变抑制法检测重组蛋白的抗病毒活性。结果:IFA、ELISA与细胞病变抑制试验结果显示,重组ChIFN-γ在杆状病毒系统中获得表达,其抗病毒活性达5×103~1×104U/mL。结论:重组ChIFN-γ的获得为其开发应用提供了重要的生物材料。 展开更多
关键词 γ-干扰素 杆状病毒 重组蛋白
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鸡γ-干扰素与新城疫病毒F蛋白抗原表位融合基因的构建与表达 被引量:1
10
作者 刘雪兰 戴银 +3 位作者 程宝艳 彭明义 王骏俊 余为一 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第7期3862-3864,共3页
[目的]研究鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)的免疫佐剂功能,构建ChIFN-γ与新城疫F蛋白抗原表位(NDV F2-3)的融合基因,并进行原核表达。[方法]以头尾相连的方式构建鸡γ-干扰素基因与NDVF2-3的pET-32a重组质粒,经PCR扩增、双酶切和测序鉴定后,重... [目的]研究鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)的免疫佐剂功能,构建ChIFN-γ与新城疫F蛋白抗原表位(NDV F2-3)的融合基因,并进行原核表达。[方法]以头尾相连的方式构建鸡γ-干扰素基因与NDVF2-3的pET-32a重组质粒,经PCR扩增、双酶切和测序鉴定后,重组子在E.coliBL21细胞进行IPTG诱导融合蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blot方法分别检测表达的产物。[结果]获得了726 bpChIFN-γ与NDVF2-3融合基因,经原核表达,融合蛋白分子量约为35 000,能与相应的抗体结合。[结论]ChIFN-γ与NDVF2-3串联基因在原核细胞中能有效表达,且融合蛋白具有一定的免疫活性。 展开更多
关键词 鸡IFN-γ NDVF2-3 融合蛋白
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鸡γ干扰素与补体C3d主要片段的串联表达及活性测定 被引量:1
11
作者 牛明福 范逸文 +3 位作者 杜梦璇 鲍永毅 宫强 侯颖 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期662-666,共5页
目的:本研究将干扰素和补体C3d主要片段进行串联表达,以研究共同刺激细胞的活性,观察它们的免疫佐剂效应,以期获得一种更高效的免疫佐剂。方法:本实验合成了chIFN-γ、chIFN-γ-C3d基因,利用pET29a(+)构建重组载体,并在大肠杆菌BL21中... 目的:本研究将干扰素和补体C3d主要片段进行串联表达,以研究共同刺激细胞的活性,观察它们的免疫佐剂效应,以期获得一种更高效的免疫佐剂。方法:本实验合成了chIFN-γ、chIFN-γ-C3d基因,利用pET29a(+)构建重组载体,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达。将重组蛋白纯化后进行鸡胚内抗新城疫病毒活性研究;并与DNA疫苗共同免疫雏鸡,HI法测定抗体水平,MTT法测定淋巴细胞增殖情况,并分析免疫器官指数变化。结果:成功表达纯化了chIFN-γ和chIFN-γ-C3d两个蛋白,SDS-PAGE电泳检测分子量分别约为17 kD和21 kD,His标签抗体检测表明蛋白表达正确。鸡胚内抗病毒活性测定表明一定浓度的chIFN-γ和chIFN-γ-C3d均可以抑制新城疫病毒的增殖,低浓度时chIFN-γ-C3d抗病毒活性高于chIFN-γ;与DNA疫苗联合免疫后,HA组、γ+HA和γ+C+HA组抗体水平持续升高,且与HA组相比,γ+C+HA组抗体水平更高,差异有极显著统计学意义(P<0.01)。第7周开始γ+C+HA组的抗体水平均高于γ+HA组,差异有极显著统计学意义(P<0.01)。HA、γ+HA和γ+c+HA组淋巴细胞均显示出较高的增殖活性,且γ+c-HA组增殖活性更高,与HA组差异有极显著统计学意义(P<0.01),与γ+HA相比差异有显著统计学意义(P<0.05),说明chIFN-γ-C3d、chIFN-γ都具有促进淋巴细胞增殖的作用,并且chIFN-γ-C3d比chIFN-γ作用更强,差异有显著统计学意义(P<0.05)。第9周时,γ+C+HA组胸腺指数和法氏囊指数都高于其他组,与γ+HA组相比差异有极显著统计学意义(P<0.01)。结论:实验表明,相比于单独的DNA疫苗,chIFN-γ-C3d或chIFN-γ与DNA疫苗联合免疫具有更强的免疫效果,chIFN-γ-C3d比单独的chIFN-γ效果更好,可作为一种新的免疫佐剂应用于DNA疫苗的免疫。 展开更多
关键词 γ-干扰素 补体C3d 原核表达 抗病毒活性 免疫佐剂
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重组鸡γ-干扰素在家蚕中的表达及抗病毒活性 被引量:1
12
作者 赵泽 赵璐璐 +4 位作者 刘兴健 王朋 李轶女 张志芳 易咏竹 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期898-904,共7页
鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)是一类具有免疫调节及抗病毒活性的细胞因子。利用家蚕杆状病毒表达系统表达具有高生物活性的鸡γ-干扰素。首先,对ChIFN-γ基因序列进行优化与合成,再将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393多克隆位点中,与缺少orf1... 鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)是一类具有免疫调节及抗病毒活性的细胞因子。利用家蚕杆状病毒表达系统表达具有高生物活性的鸡γ-干扰素。首先,对ChIFN-γ基因序列进行优化与合成,再将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393多克隆位点中,与缺少orf1629基因的家蚕杆状病毒reBmBac共转染BmN细胞获得重组病毒reBm-ChIFN-γ。将reBm-ChIFN-γ注射感染家蚕5龄幼虫,检测感染后96~120 h之间发病蚕体的血淋巴。PCR扩增结果显示成功构建了重组杆状病毒reBm-ChIFN-γ,Western blot检测重组杆状病毒在家蚕体内表达了目的干扰素,微量细胞病变抑制法检测表达产物具有明显的抗病毒活性,效价约为(3.24±0.32)×10^6 U/mL。试验结果表明,利用家蚕杆状病毒表达系统成功地表达出具有较高抗病毒活性的鸡γ-干扰素,为鸡γ-干扰素相关生物制剂的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 γ-干扰素 杆状病毒表达系统 家蚕 抗病毒活性
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鸡γ-干扰素的克隆·表达和序列分析
13
作者 谢昆 王传铭 +2 位作者 林丽飞 王栋 李河 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第17期7138-7140,共3页
[目的]为鸡γ-干扰素的进一步研究奠定基础。[方法]根据GenBank发表的鸡γ-干扰素核苷酸序列,设计1对特异性引物。利用RT-PCR技术从ConA诱导培养的鸡脾脏淋巴细胞中克隆鸡γ-干扰素基因,并在IPTG诱导下在大肠杆菌中表达重组菌。[结果]... [目的]为鸡γ-干扰素的进一步研究奠定基础。[方法]根据GenBank发表的鸡γ-干扰素核苷酸序列,设计1对特异性引物。利用RT-PCR技术从ConA诱导培养的鸡脾脏淋巴细胞中克隆鸡γ-干扰素基因,并在IPTG诱导下在大肠杆菌中表达重组菌。[结果]克隆的鸡γ-干扰素基因全长495bp,编码165个氨基酸,与国外克隆的鸡γ-干扰素基因序列的同源性为100%。鸡γ-干扰素蛋白含有12个α螺旋,3个β折叠,7个β转角。它具有强抗原性,而第16~23位氨基酸无抗原性。重组蛋白的分子量约18kD,其经IPTG诱导表达4h后,表达量最高,表达产率高达25%。[结论]鸡γ-干扰素具有一定的抗原性,预示其在免疫反应中起一定作用。 展开更多
关键词 γ-干扰素 克隆 表达
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鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的表达
14
作者 吴树华 宫鹏涛 +2 位作者 张西臣 吴玲 李建华 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2009年第1期8-11,共4页
构建鸡γ-干扰素基因(lFN-γ)的融合表达质粒,并在原核系统表达。根据GenBank发表的鸡γ-干扰素核苷酸序列,使用prim er5设计一对特异性引物,通过RT-PCR技术从ConA诱导培养的鸡脾脏淋巴细胞中克隆出鸡γ-干扰素基因并对其进行测序。测... 构建鸡γ-干扰素基因(lFN-γ)的融合表达质粒,并在原核系统表达。根据GenBank发表的鸡γ-干扰素核苷酸序列,使用prim er5设计一对特异性引物,通过RT-PCR技术从ConA诱导培养的鸡脾脏淋巴细胞中克隆出鸡γ-干扰素基因并对其进行测序。测序结果表明,鸡γ-干扰素基因全长495bp,具有一个完整的开放阅读框,编码164个氨基酸,与国外发表的序列同源性为100%。将序列连接到原核表达载体pET28 a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳分析。结果表明鸡γ-干扰素表达蛋白大小为20.8KD,并以包涵体形式表达。为鸡γ-干扰素生物制剂或疫苗佐剂的开发奠定基础。 展开更多
关键词 γ-干扰素 克隆 原核表达
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重组鸡γ-干扰素在昆虫细胞中的高效表达 被引量:10
15
作者 孔桂美 许金俊 +2 位作者 秦爱建 金文杰 刘岳龙 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期697-701,共5页
将鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)基因克隆到载体pFASTBAC1中,构建转移载体pFASTBAC1-ChIFN-γ,然后转化DH10Bac感受态大肠杆菌,通过位点特异性转座,将ChIFN-γ基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建表达质粒Bacmid-ChIFN-γ;通过脂质体将表达质粒转... 将鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)基因克隆到载体pFASTBAC1中,构建转移载体pFASTBAC1-ChIFN-γ,然后转化DH10Bac感受态大肠杆菌,通过位点特异性转座,将ChIFN-γ基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建表达质粒Bacmid-ChIFN-γ;通过脂质体将表达质粒转染Sf9昆虫细胞,用间接免疫荧光试验鉴定重组鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)的表达;通过水泡性口炎病毒感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的细胞病变抑制试验,检测rChIFN-γ的活性.研究结果表明,感染重组杆状病毒的Sf9细胞能高效表达rChIFN-γ,且当每个细胞的感染量为1个病毒时,细胞在感染96h后,rChIFN-γ基因表达产物的活性最高,达到106~107.2U/mL.以rChIFN-γ进行对新城疫病毒(NDV)F48E8株、禽流感H5N1病毒(AIV-H5)和马立克氏病病毒(MDV)GA株的抗病毒活性试验,发现rChIFN-γ对AIV-H5和MDV GA株病毒有明显的抑制其致细胞病变作用,但对NDV F48E8株病毒在体外不能抑制其致细胞病变作用,仅能在病毒滴度上表现抑制效果. 展开更多
关键词 重组鸡γ-干扰素 杆状病毒 表达 抗病毒作用
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重组鸡干扰素对E.tenella卵囊免疫后肠上皮组织结构的影响 被引量:6
16
作者 叶秀华 蔡建平 +1 位作者 吴志光 汪明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期484-486,共3页
取AA肉鸡,在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊进行首免和二免,并同时肌肉注射5 000 U重组鸡γ干扰素(rCh IFN-γ)后,于21日龄以同源E.tenella攻虫。试验结果表明,rCh IFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于... 取AA肉鸡,在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊进行首免和二免,并同时肌肉注射5 000 U重组鸡γ干扰素(rCh IFN-γ)后,于21日龄以同源E.tenella攻虫。试验结果表明,rCh IFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于球虫病造成的体质量下降,降低OPG值和肠道病变记分,提高抗球虫指数(AC I);同时还发现,rCh IFN-γ能够显著增加肠道绒毛高度、肠隐窝深度、刷状缘厚度(=α0.05)。由此表明,rCh IFN-γ可以减轻由于球虫感染所造成的肠道黏膜损伤,促进肠道的吸收功能,进而减轻球虫病所造成的增重损失,对球虫活卵囊疫苗的免疫有一定的免疫增强效果。 展开更多
关键词 鸡球虫活卵囊 免疫 重组鸡γ干扰素 肠黏膜上皮结构
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重组鸡γ-干扰素对肉鸡生长性能和免疫功能的影响 被引量:3
17
作者 陈鹏 孙进华 +1 位作者 代丽 单安山 《中国家禽》 北大核心 2011年第11期11-14,共4页
为研究注射重组鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)对肉鸡生长性能和免疫功能的影响,将90只健康14日龄AA肉仔鸡随机分为3组:对照组、试验组Ⅰ和试验组Ⅱ。于14、21和28日龄每只鸡皮下注射含rChIFN-γ50μg(试验组Ⅰ)和100μg(试验组Ⅱ)的PBS缓冲液1... 为研究注射重组鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)对肉鸡生长性能和免疫功能的影响,将90只健康14日龄AA肉仔鸡随机分为3组:对照组、试验组Ⅰ和试验组Ⅱ。于14、21和28日龄每只鸡皮下注射含rChIFN-γ50μg(试验组Ⅰ)和100μg(试验组Ⅱ)的PBS缓冲液1mL,对照组同期每只注射PBS缓冲液1mL。每次注射rChIFN-γ7d后,对各组肉鸡进行翅下静脉采血,并于35日龄剖杀肉鸡摘取免疫器官。研究表明:①35日龄试验组Ⅰ的淋巴细胞刺激指数极显著高于对照组(P<0.01);②35日龄试验组Ⅱ的胸腺指数显著高于对照组(P<0.05);③35日龄试验组Ⅰ的白细胞介素-2水平显著高于其他各组(P<0.05);④35日龄试验组Ⅰ的TNF-α水平显著高于其他各组(P<0.05)。肉鸡每7天注射一次rChIFN-γ,可提高35日龄肉鸡的免疫机能,促进肉鸡免疫器官的生长发育。 展开更多
关键词 重组鸡γ-干扰素 生长性能 免疫器官指数 细胞因子
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重组鸡干扰素-γ对脂多糖引起的肉鸡免疫应激的影响 被引量:2
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作者 陈鹏 单安山 +1 位作者 孙进华 程宝晶 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期126-132,共7页
文章旨在研究前期注射重组鸡干扰素-γ(rChIFN-γ)对肉鸡免疫应激的影响。将40羽14日龄肉鸡随机平均分成A、B、C和D 4组。于14、21、28和35日龄给A组和B组肉鸡静脉注射PBS缓冲液1mL.只-1,C组同期静脉注射含rChIFN-γ50μg的PBS缓冲液1mL... 文章旨在研究前期注射重组鸡干扰素-γ(rChIFN-γ)对肉鸡免疫应激的影响。将40羽14日龄肉鸡随机平均分成A、B、C和D 4组。于14、21、28和35日龄给A组和B组肉鸡静脉注射PBS缓冲液1mL.只-1,C组同期静脉注射含rChIFN-γ50μg的PBS缓冲液1mL.只-1,D组同期静脉注射含rChIFN-γ100μg的PBS缓冲液1mL.只-1。于36、38、40日龄,给B、C、D组的肉鸡腹腔注射含有大肠杆菌脂多糖(LPS,按体质量以250μg.kg-1计算)的PBS缓冲液1mL.只-1造模,A组同期腹腔注射PBS缓冲液1mL。记录36日龄至41日龄肉鸡的体质量和采食量,测定第3次注射脂多糖(40日龄)12h肉鸡的血常规和T淋巴细胞刺激指数,并于第3次注射脂多糖后12、24和36h,测定肉鸡血清白细胞介素-1(IL-1)、皮质酮(CORT)的含量。研究表明:(1)在整个免疫应激时期(36~41日龄),A组的平均日增体质量(P<0.01)和平均日采食量(P<0.05)均要高于B、C、D 3组,A组的料重比要显著低于B、C、D 3组(P<0.05);(2)第3次注射脂多糖后12h,C组和D组的白细胞总数显著高于A组和B组(P<0.05);(3)第3次注射脂多糖后12h,C组和D组的淋巴细胞刺激指数显著高于A组和B组(P<0.05);(4)第3次注射脂多糖后12h,A组的CORT含量显著低于B组(P<0.05),第3次注射脂多糖后24h,A组的CORT含量低于B组(P<0.01)、C组(P<0.05)和D组(P<0.05),第3次注射脂多糖后36h,A组显著低于B组(P<0.05);(5)第3次注射脂多糖12h后,A组IL-1显著低于B组(P<0.05),第3次注射脂多糖24h后,A组极显著低于其它各组(P<0.01)。结果显示,前期注射rChIFN-γ,可以缓解免疫应激导致的肉鸡血清中IL-1和皮质酮升高,提高免疫应激时期肉鸡的细胞免疫功能,缓解免疫应激对肉鸡的负面影响。 展开更多
关键词 肉鸡 重组鸡干扰素-γ 脂多糖 免疫应激
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鸡γ-干扰素基因的分子克隆与序列测定 被引量:18
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作者 刘胜旺 陈洪岩 +4 位作者 孔宪刚 张宝山 马云燕 童光志 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期228-230,共3页
应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ... 应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ,该基因阅读开放框架由 4 92个核苷酸组成 ,与马和人γ-干扰素基因序列的同源性分别为 3 5%和 3 2 %,与鸡 型干扰素基因的同源性仅为 1 5%,与国外报道的鸡 γ-干扰素基因序列完全一致。表明鸡脾淋巴细胞受到有丝分裂原刺激后 ,其 γ-干扰素基因 m RNA发生了表达 ,试验成功地克隆得到了鸡 展开更多
关键词 γ-干扰素 淋巴细胞 基因克隆 序列分析
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QIAexpress系统高效表达鸡γ-干扰素cDNA的研究 被引量:15
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作者 吴志光 夏春 +1 位作者 汪明 蒋金书 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期89-93,共5页
深入进行基因工程鸡干扰素的研究 ,将前期工作所得到的 p GEM T Easy/ Ch IFN-γ2重组质粒中的 Ch IFN- γ2基因亚克隆到表达质粒 p QE30上 ,构建了重组表达质粒 p QE- Ch IFN- γ2 ,转化大肠杆菌 M1 5,构建了高效表达重组蛋白的双质粒 ... 深入进行基因工程鸡干扰素的研究 ,将前期工作所得到的 p GEM T Easy/ Ch IFN-γ2重组质粒中的 Ch IFN- γ2基因亚克隆到表达质粒 p QE30上 ,构建了重组表达质粒 p QE- Ch IFN- γ2 ,转化大肠杆菌 M1 5,构建了高效表达重组蛋白的双质粒 QIAexpress系统。经对重组蛋白的可溶性判定、包涵体的溶解、纯化、复性及活性测定 ,结果表明 Ch IFN-γ2的表达水平为 2 2 % ,包涵体的纯度为 80 % ,生物学活性为 3 2 0 0~ 6 40 0 U.mg-1 。 展开更多
关键词 QIAexpress系统 高效表达 γ-干扰素 CDNA 抗病毒活性
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