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lncRNA GAS5靶向miR-103影响人牙髓干细胞向成牙骨质分化的作用 被引量：1
1
作者 黄毅斌 郑雅茹 黄丽云 《临床口腔医学杂志》 2023年第5期273-278,共6页
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)靶向miR-103对人牙髓干细胞(hDPSCs)向成牙骨质分化的影响。方法:从成人第三磨牙中分离培养hDPSCs,倒置光学显微镜观察P3代hDPSCs形态,流式细胞术检测hDPSCs表面抗原CD73、C... 目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)靶向miR-103对人牙髓干细胞(hDPSCs)向成牙骨质分化的影响。方法:从成人第三磨牙中分离培养hDPSCs,倒置光学显微镜观察P3代hDPSCs形态,流式细胞术检测hDPSCs表面抗原CD73、CD90、CD105、CD34表达情况。将hDPSCs分为Ct组、si-NC组、si-GAS5组、pcDNA组、pcDNA-GAS5组、pcDNA-GAS5+mimic NC组、pcDNA-GAS5+miR-103mimic组,qRT-PCR检测hDPSCs中GAS5、miR-103表达;CCK-8法检测hDPSCs增殖能力;取经成牙骨质分化培养基诱导7 d后的hDPSCs,Western blot检测成牙骨质细胞标志蛋白牙骨质附着蛋白(CAP)、牙骨质蛋白1(CEMP1)、骨钙素(OCN)的表达,茜素红S染色检测矿化结节形成;双荧光素酶报告基因实验验证GAS5与miR-103的关系。结果:P3代hDPSCs生长状态佳,细胞呈漩涡状或放射状排列。P3代hDPSCs高表达CD73(99.05%)、CD90(98.27%)、CD105(97.88%),低表达CD34(2.02%),证明成功分离出hDPSCs。与Ct组、si-NC组比较,si-GAS5组hDPSCs中GAS5表达、OD_(450nm)值(3 d、5 d)、CAP、CEMP1、OCN蛋白表达、矿化结节形成率降低,miR-103表达升高(P<0.05);与Ct组、pcDNA组比较,pcDNA-GAS5组hDPSCs中GAS5表达、、OD_(450nm)值(3 d、5 d)、CAP、CEMP1、OCN蛋白表达、矿化结节形成率升高,miR-103表达降低(P<0.05);与pcDNA-GAS5组、pcDNA-GAS5+mimic NC组比较,pcDNA-GAS5+miR-103mimic组hDPSCs中GAS5表达变化差异不显著(P>0.05),OD_(450nm)值(3 d、5 d)、CAP、CEMP1、OCN蛋白表达、矿化结节形成率降低,miR-103表达升高(P<0.05)。结论:过表达GAS5可能通过下调miR-103促进hDPSCs向成牙骨质分化。 展开更多
关键词 生长停滞特异性转录本5 miR-103 牙髓干细胞 成牙骨质分化
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MicroRNA-675-5p对成牙骨质细胞分化的影响 被引量：2
2
作者 郝云茹 王云龙 +1 位作者 曹正国 贺红 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2019年第3期395-399,共5页
目的:通过过表达或抑制microRNA-675-5p(miR-675-5p),观察miR-675-5p对小鼠成牙骨质细胞OCCM-30分化的影响。方法:用矿化诱导培养基诱导OCCM-30细胞分化,检测各矿化指标及miR-675-5p的含量变化。而后利用Lipofectamine 3000脂质体分别将... 目的:通过过表达或抑制microRNA-675-5p(miR-675-5p),观察miR-675-5p对小鼠成牙骨质细胞OCCM-30分化的影响。方法:用矿化诱导培养基诱导OCCM-30细胞分化,检测各矿化指标及miR-675-5p的含量变化。而后利用Lipofectamine 3000脂质体分别将miR-675-5p的mimic和inhibitor及对应的negative control转染进OCCM-30细胞,采用real-time PCR技术验证转染是否成功,继而采用real-time PCR和Western Blot的方法检测矿化相关指标ALP,OSX,RUNX2,BSP的含量变化,利用ALP活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性变化。结果:Real-time PCR结果显示在OCCM-30细胞分化过程中miR-675-5p表达下调,在mimic组miR-675-5p表达上调明显,同时ALP,OSX,RUNX2表达下降,Western Blot证明OSX,RUNX2与BSP在蛋白水平上表达同样明显降低,ALP活性试剂盒检测提示ALP活性被抑制。Inhibitor组结果与mimic组恰好相反。结论:miR-675-5p抑制OCCM-30细胞的分化能力。 展开更多
关键词 miR-675-5p 成牙骨质细胞分化 牙骨质
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熊果酸对小鼠成牙骨质细胞系OCCM-30细胞分化的促进作用 被引量：1
3
作者 李梦红 姜欢 +3 位作者 王六一 冯旭 刘楠 胡敏 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期986-991,共6页
目的:探讨熊果酸对小鼠成牙骨质细胞系OCCM-30细胞分化的影响,为牙根吸收的修复提供理论依据。方法:将对数生长期的OCCM-30细胞分为对照组和不同浓度熊果酸组。其中熊果酸组OCCM-30细胞以3种浓度(0.625、1.250和2.500μmol·L^-1)... 目的:探讨熊果酸对小鼠成牙骨质细胞系OCCM-30细胞分化的影响,为牙根吸收的修复提供理论依据。方法:将对数生长期的OCCM-30细胞分为对照组和不同浓度熊果酸组。其中熊果酸组OCCM-30细胞以3种浓度(0.625、1.250和2.500μmol·L^-1)的熊果酸处理,对照组不做任何处理。采用MTT法检测不同时间点(24、48和72h)各组OCCM-30细胞增殖抑制率,碱性磷酸酶(ALP)法检测细胞体外分化和矿化情况,实时定量PCR法检测24 h内骨桥蛋白(OPN)mRNA表达水平,Westernblotting法检测给药3和5d时OPN蛋白表达水平。结果:不同浓度熊果酸组与对照组OCCM-30细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,2.500 μmol·L^-1熊果酸组熊果酸处理3、5和7d后,OCCM-30细胞中ALP活性明显升高(P<0.05),不同浓度熊果酸组OCCM-30细胞中OPNmRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:一定浓度熊果酸对小鼠成牙骨质细胞系OCCM-30细胞增殖无明显抑制作用,但可促进其分化并上调OPNmRNA和蛋白表达水平。 展开更多
关键词 熊果酸 成牙骨质细胞 细胞增殖 细胞分化
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机械张应力刺激对成牙骨质细胞功能活性的影响 被引量：1
4
作者 杨祯瑾 胡海琨 +2 位作者 潘洁 李昱煜 邹淑娟 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期321-324,共4页
目的探讨机械性张应力作用对成牙骨质细胞增殖及分化功能的影响。方法采用流式细胞术及RT-PCR对接受了不同时间点张应力作用的成牙骨质细胞OCCM30进行细胞周期活性变化的检测及成骨相关矿化基因m RNA的检测。结果各时间点间加力组增殖指... 目的探讨机械性张应力作用对成牙骨质细胞增殖及分化功能的影响。方法采用流式细胞术及RT-PCR对接受了不同时间点张应力作用的成牙骨质细胞OCCM30进行细胞周期活性变化的检测及成骨相关矿化基因m RNA的检测。结果各时间点间加力组增殖指数(PI)与0h相比差异均具统计学意义;3h,6h,12h,18h加力组与各自的对照组差异具有统计学意义;周期性张应力可规律性促进OCCM30相关矿化基因Runx2、Osterix、ALP、ColⅠm RNA的表达。结论周期性张应力刺激可引起成牙骨质细胞的细胞周期和增殖活性的变化,可促进OCCM30相关矿化基因Runx2、Osterix、ALP、ColⅠm RNA的表达。 展开更多
关键词 机械应力 成牙骨质细胞 细胞增殖 细胞分化
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内皮素B受体激动剂对小鼠成牙骨质细胞生物学行为的影响
5
作者 王六一 刘楠 +3 位作者 冯旭 李梦红 包幸福 胡敏 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期239-243,470,共6页
目的:探讨内皮素B受体(ETBR)激动剂对成牙骨质细胞系OCCM-30生物学行为的影响,为牙源性牙根修复提供实验依据。方法:选取对数生长期的小鼠成牙骨质细胞,分为实验组和对照组。实验组采用10-6 mol·L-1 ETBR激动剂处理成牙骨质细胞,... 目的:探讨内皮素B受体(ETBR)激动剂对成牙骨质细胞系OCCM-30生物学行为的影响,为牙源性牙根修复提供实验依据。方法:选取对数生长期的小鼠成牙骨质细胞,分为实验组和对照组。实验组采用10-6 mol·L-1 ETBR激动剂处理成牙骨质细胞,以未处理的细胞为对照组。采用MTT方法检测培养不同时间点(24、48和72h)2组成牙骨质细胞增殖抑制率,流式细胞术检测培养不同时间点(24、48和72h)2组细胞凋亡率,碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测细胞体外分化及矿化情况,实时定量PCR检测各组细胞中Runx2、BSP、OCN、Col1和Osterix等分化相关基因表达水平。结果:MTT检测,与对照组比较,培养24、48和72h后,实验组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05),培养48h时细胞增殖抑制率最高。流式细胞术检测,与对照组比较,实验组成牙骨质细胞凋亡率无明显变化。碱性磷酸酶和茜素红染色检测,与对照组比较,实验组细胞显色较浅,产生矿化结节较少。实时定量PCR检测,与对照组比较,在培养24h时实验组细胞中Runx2、BSP、Osterix、OCN和Col1表达水平无明显变化,在培养48h时上述基因表达水平开始降低,在培养72h时细胞中Runx2、BSP、Osterix和Col1表达水平明显降低(P<0.01)。结论:ETBR激动剂可抑制成牙骨质细胞增殖和分化,但对细胞凋亡无影响。 展开更多
关键词 成牙骨质细胞 内皮素B受体 细胞增殖 细胞凋亡 细胞分化
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外源性重组Wnt3a蛋白对大鼠牙囊细胞成骨分化的影响
6
作者 刘燕 杨玉娥 凌均棨 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2016年第8期455-459,共5页
目的:研究外源性重组Wnt3a蛋白对大鼠牙囊细胞(DFCs)成骨/成牙骨质向分化的影响。方法:酶消化组织块法获取大鼠DFCs,用ALP活性检测法分别观察5、10、25、50、100 ng/mL重组Wnt3a蛋白刺激DFCs 9 d后对其ALP活性影响的浓度效应,以及100 ng... 目的:研究外源性重组Wnt3a蛋白对大鼠牙囊细胞(DFCs)成骨/成牙骨质向分化的影响。方法:酶消化组织块法获取大鼠DFCs,用ALP活性检测法分别观察5、10、25、50、100 ng/mL重组Wnt3a蛋白刺激DFCs 9 d后对其ALP活性影响的浓度效应,以及100 ng/mL重组Wnt3a蛋白作用于DFCs 3、6、9、13 d后对其ALP活性影响的时间效应;用Western blot法检测100 ng/mL重组Wnt3a蛋白作用于DFCs 2、4 d后,对细胞中成骨/成牙骨质向分化相关蛋白RUNX2、OCN、Ⅰ-胶原蛋白及β-连环蛋白(β-catenin)表达水平的影响。结果:100 ng/mL重组Wnt3a蛋白作用于DFCs 3、6、9、13 d后,各时间细胞ALP活性均较对照组有所升高,其中以6、9 d时升高最明显(P<0.05);实验组细胞的ALP活性随重组Wnt3a蛋白作用时间延长而逐渐增加,各时间点两两相比,除9 d与13 d相比无统计学差异(P>0.05)外,其他各时间点均有统计学差异(P<0.05)。Western blot检测结果显示,100 ng/mL重组Wnt3a蛋白刺激DFCs 2、4 d后,均可使细胞中RUNX2、OCN、Ⅰ-型胶原蛋白、β-catenin的表达水平增加(P<0.05)。结论:重组Wnt3a蛋白可能通过Wnt/β-catenin信号途径促进大鼠DFSc成骨/成牙骨质向分化。 展开更多
关键词 牙囊细胞 WNT3A Β-连环蛋白 成骨/成牙骨质分化
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