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食管癌细胞株Eca109中cdc42基因启动子区CpG岛甲基化调控报告基因的表达 被引量：2
1
作者 刘玲 陈艳 +5 位作者 李卉 张法煌 李依珂 伊丽达娜.斯提瓦尔地 喻亮 李惠武 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第5期691-695,共5页
目的研究细胞周期分裂蛋白42(cdc42)的启动子区CpG岛是否作为调节因子参与基因表达的调控。方法选择消化道肿瘤早期相关基因cdc42为研究对象,构建氯霉素乙酰基转移酶3-增强子(pCAT3-Enhancer)重组体:内含cdc42基因启动子区第一个CpG岛... 目的研究细胞周期分裂蛋白42(cdc42)的启动子区CpG岛是否作为调节因子参与基因表达的调控。方法选择消化道肿瘤早期相关基因cdc42为研究对象,构建氯霉素乙酰基转移酶3-增强子(pCAT3-Enhancer)重组体:内含cdc42基因启动子区第一个CpG岛的序列及一段不含CpG岛序列,非甲基化修饰的重组体和pCAT3-Enhancer空载体转化至甲基化酶缺陷大肠杆菌中(ER1793),经甲基化酶修饰后的重组体及空载体转化至可持续甲基化状态的大肠杆菌中(JM109),阳性克隆转染至Eca109中,提取蛋白,通过薄层层析检测氯霉素乙酰基转移酶(CAT)活性。结果转染至细胞株后,甲基化空载体CAT的活性显著低于非甲基化的;任意DNA-pCAT3-Enhancer重组体甲基化及非甲基化CAT的活性无差异;cdc42启动子区CpG岛-pCAT3-Enhancer重组体,甲基化CAT的活性显著低于非甲基化CAT的活性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过食管癌细胞株Eca109实验,cdc42启动子区CpG岛的甲基化修饰后,CAT的活性降低,非甲基化CAT仍保持较高活性。说明cdc42启动子区CpG岛甲基化程度的改变具有调节下游基因表达的作用。 展开更多
关键词 Eca109细胞株 cdc42 甲基化 报告基因
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Cdc42基因对不同发育阶段无尾鸡骨骼的共表达调控 被引量：1
2
作者 齐旺梅 胡斯乐 +3 位作者 徐斯日古楞 哈登楚日亚 白小英 张文广 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期3905-3917,共13页
为阐明细胞分裂周期42(cell division cycle 42,Cdc42)基因在无尾鸡骨骼发育过程的潜在调控机制,本试验通过混池重测序与转录组测序方法,综合运用基因组学和骨骼转录组学来揭示Cdc42基因对无尾鸡尾部发育的遗传影响。结果显示,在无尾品... 为阐明细胞分裂周期42(cell division cycle 42,Cdc42)基因在无尾鸡骨骼发育过程的潜在调控机制,本试验通过混池重测序与转录组测序方法,综合运用基因组学和骨骼转录组学来揭示Cdc42基因对无尾鸡尾部发育的遗传影响。结果显示,在无尾品种的强正向选择下,无尾鸡与有尾鸡之间高度分化的基因显著富集到神经发育、基础代谢与细胞骨架重排等生物类别;骨骼发育过程的差异表达基因数从胚胎第8、11和14天逐渐升高后下降,到第16天到达最低后又升高,到第21天达到最高;在基因组与转录组层面识别的公共候选基因为Cdc42;公共生物学过程富集到GTPases活性与细胞生长程度的调节,公共信号通路富集到紧密连接与黏着连接;差异表达基因构建的权重基因共表达网络发现,无尾鸡比有尾鸡的基因网络密度高6倍以上,平均连接度高8倍以上。无尾鸡共表达网络中,Cdc42基因与其他基因的相关性较弱。相比而言,在有尾鸡组,Cdc42基因处于网络的核心连接节点处,对于多基因的共同调节起到桥梁作用;此外,证明了Cdc42基因在多物种间具有保守性。本研究最终确定瓢鸡无尾性状的形成可能通过Cdc42及其共表达的基因共同调控紧密连接信号通路,联动影响Wnt信号通路,进而干扰生长板和尾骨的发育,是尾骨提前终止的重要影响环节,将为瓢鸡无尾表型的早期启动和遗传基础认识提供理论指导。 展开更多
关键词 无尾鸡 cdc42基因 骨骼发育 基因组选择 共表达基因
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半滑舌鳎细胞分裂周期蛋白42基因克隆与结构预测
3
作者 刘厚孚 谭静 +3 位作者 胡秀彩 管振国 吕爱军 孙敬锋 《天津农学院学报》 CAS 2022年第3期36-42,共7页
细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是Rho超家族酶中的一个亚类,具有调节细胞骨架和肌动蛋白作用,并参与免疫与炎症反应。设计半滑舌鳎Cdc42基因(即CsCdc42)特异性引物,采用RT-PCR方法、生物信息学方法等进行CsCdc42基因克隆及结构预测。结果获... 细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是Rho超家族酶中的一个亚类,具有调节细胞骨架和肌动蛋白作用,并参与免疫与炎症反应。设计半滑舌鳎Cdc42基因(即CsCdc42)特异性引物,采用RT-PCR方法、生物信息学方法等进行CsCdc42基因克隆及结构预测。结果获得CsCdc42基因片段长度为847 bp,推测编码191个氨基酸,含有7个抗原表位(27-28、61-63、90-92、120-122、131-133、164-166和181-183 aa)、1个RHO结构域(6-179 aa),其中含有1个ATP/GTP结合位点和1个酰基化位点;蛋白结构预测主要为α螺旋(30.9%)、β折叠(24.6%)和无规则卷曲(44.5%)。序列比对结果表明,CsCdc42与斑马鱼、青鳉、虹鳟、大菱鲆和虾等氨基酸序列同源性分别为99.43%、97.91%、95.81%、94.76%和91.10%;构建系统发育树显示CsCdc42与斑马鱼、人和海水鱼类Cdc42亲缘关系最近,自然聚为一支。以上结果为研究半滑舌鳎细胞分裂周期蛋白相关基因功能提供科学参考。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 细胞分裂周期蛋白42 基因克隆 结构预测
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靶向CDC42基因小干扰RNA分子的制备
4
作者 邵圣文 薛利军 +4 位作者 周洪昌 段劲 王洁 卢添宝 徐菊玲 《中国慢性病预防与控制》 CAS 北大核心 2011年第1期69-71,共3页
目的制备靶向CDC42基因的小干扰RNA分子(siRNA)并检测其对CDC42基因表达的抑制效果。方法针对CDC42基因的不同区域设计4条siRNA分子,体外转录法合成siRNA分子,将siRNA与CDC42基因真核表达载体共转染HEK293T细胞,Westernblot法测定CDC42... 目的制备靶向CDC42基因的小干扰RNA分子(siRNA)并检测其对CDC42基因表达的抑制效果。方法针对CDC42基因的不同区域设计4条siRNA分子,体外转录法合成siRNA分子,将siRNA与CDC42基因真核表达载体共转染HEK293T细胞,Westernblot法测定CDC42蛋白含量。结果合成了siR1、siR2、siR3、siR4共4条siRNA分子,siR3对CDC42基因表达的抑制率为95%,siR1、siR2以及siR4对CDC42基因表达的抑制作用不明显。siR3对HEK293T细胞生长无明显影响。结论体外转录法制备的siR3分子能够高效特异地抑制CDC42基因表达。 展开更多
关键词 cdc42基因 小干扰RNA 体外转录
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CD151基因转移对大鼠缺血后肢Rac1和Cdc42信号通路的影响
5
作者 刘伟峰 于晓晖 +1 位作者 刘正湘 左后娟 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期2054-2056,共3页
目的观察CD151在大鼠后肢缺血模型中的表达以及对Rac1和Cdc42信号通路的影响,进一步研究CD151促血管新生的分子机制。方法将实验大鼠随机分为4组,分别给予生理盐水,rAAV-GFP和rAAV-CD151分点注射至大鼠左后肢肌肉组织内,基因转染1 w后... 目的观察CD151在大鼠后肢缺血模型中的表达以及对Rac1和Cdc42信号通路的影响,进一步研究CD151促血管新生的分子机制。方法将实验大鼠随机分为4组,分别给予生理盐水,rAAV-GFP和rAAV-CD151分点注射至大鼠左后肢肌肉组织内,基因转染1 w后行股动脉切除术建立大鼠后肢缺血模型,假手术组不切除股动脉。6 w后用Western印迹方法检测各组大鼠缺血肢体局部CD151以及Rac1和Cdc42的表达。结果术后5 w,Western印迹检测CD151组的CD151蛋白表达水平明显高于其余各组(P<0.05),同时CD151组p-Rac1/Cdc42蛋白表达水平明显高于其余各组(P<0.05)。结论 CD151蛋白表达可以激活Rac1和Cdc42信号通路,促进缺血组织的血管新生。 展开更多
关键词 CD151基因 缺血模型 血管新生 RAC1 cdc42
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CDC42在HBx介导肝细胞恶性转化中作用的定量蛋白质组学研究
6
作者 徐永茹 齐英姿 +2 位作者 徐平 李湘萍 徐锋 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期697-702,共6页
目的寻找在乙肝病毒X蛋白(HBx)诱发肝细胞恶性转化过程中CDC42信号通路发挥作用的介导因子。方法利用基于质量亏损的准等重二甲基标记(p IDL)的定量蛋白质组学方法,检测CDC42基因敲除前后HBx转基因细胞蛋白质组的差异。筛选差异蛋白并... 目的寻找在乙肝病毒X蛋白(HBx)诱发肝细胞恶性转化过程中CDC42信号通路发挥作用的介导因子。方法利用基于质量亏损的准等重二甲基标记(p IDL)的定量蛋白质组学方法,检测CDC42基因敲除前后HBx转基因细胞蛋白质组的差异。筛选差异蛋白并对差异蛋白进行基因本体(gene ontology,GO)功能分析。结果与结论共定量到3409个蛋白,筛选出220个差异蛋白,通过GO分析发现与细胞骨架组织相关的palladin、成蛋白样亚家族1(formin-like 1,FMNL1)和角蛋白-19均发生显著下调。该研究为CDC42在HBx介导Huh7细胞恶性转化的机制研究提供了候选基因和蛋白。 展开更多
关键词 定量蛋白质组学 细胞骨架 肝细胞癌 cdc42 基因缺失
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长爪沙鼠NAFLD模型中CIP4基因的表达及与β-catenin蛋白相互作用的免疫共沉淀验证
7
作者 吴鸿儒 吴旧生 +1 位作者 王志远 刘月环 《浙江医学》 CAS 2020年第10期995-999,I0003,共6页
目的获得长爪沙鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型中CDC42作用蛋白4(CIP4)基因的表达规律及是否受β连环蛋白(β-catenin)调控的证据。方法3月龄雄性长爪沙鼠30只采用随机数字表法分为正常组6只和模型组24只,模型组按饲喂高脂饲料的时间... 目的获得长爪沙鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型中CDC42作用蛋白4(CIP4)基因的表达规律及是否受β连环蛋白(β-catenin)调控的证据。方法3月龄雄性长爪沙鼠30只采用随机数字表法分为正常组6只和模型组24只,模型组按饲喂高脂饲料的时间不同分为2周组、4周组、8周组、12周组,每组6只。按组采集肝脏大叶标本4份,HE染色及Masson染色检测肝脏的病理变化,荧光定量PCR(qPCR)法检测CIP4 mRNA相对表达量,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测CIP4蛋白相对表达量,免疫共沉淀(CoIP)验证CIP4与β-catenin的相互作用。结果肝病理学检测结果显示,随着造模时间的延长,模型组沙鼠均出现肝脏脂肪病变(单纯脂肪肝,2~4周造模,S0~S1),脂肪性肝炎(4~8周造模,脂堆积形成肝细胞的肿胀,坏死和空泡,少量纤维化出现,S1~S2),肝纤维化(8~12周造模,S2~S3),部分有假小叶形成。qPCR和Western blot结果显示,随着造模时间延长,CIP4 mRNA和蛋白相对表达量均下降。模型组被CoIP下来的CIP4蛋白明显下降,这表明模型组β-catenin与CIP4的相互作用减少。结论随着NAFLD病程的进展,长爪沙鼠模型CIP4呈现降低趋势,其作用受β-catenin的调控。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪性肝病模型 长爪沙鼠 cdc42作用蛋白基因 免疫共沉淀
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