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植物甜蛋白Mabinlin Ⅱ在大肠杆菌中的表达 被引量：4
1
作者 王昌博 黄东彦 +4 位作者 胡文锋 罗文华 李雪玲 颜少帆 陈永泉 《现代食品科技》 EI CAS 2011年第4期384-389,共6页
本研究从马槟榔种子中扩增得到天然植物甜蛋白Mabinlin Ⅱ的全长cDNA序列(M1),并通过特异引物PCR去除部分5’端序列得到修饰型的基因序列(M2)。将M1与M2分别克隆至表达载体pET43.1a(+),并分别转化表达宿主菌Escherichia coli BL21(DE3)... 本研究从马槟榔种子中扩增得到天然植物甜蛋白Mabinlin Ⅱ的全长cDNA序列(M1),并通过特异引物PCR去除部分5’端序列得到修饰型的基因序列(M2)。将M1与M2分别克隆至表达载体pET43.1a(+),并分别转化表达宿主菌Escherichia coli BL21(DE3)和Rosetta(DE3),成功构建出BL21(DE3)/pET43.1a-M1(缩写B-M1)、BL21(DE3)/pET43.1a-M2(缩写B-M2)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M1(缩写R-M1)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M2(缩写R-M2)四个表达系统。经IPTG诱导表达后证明,R-M1的重组甜蛋白表达量最高,并可检测到轻微甜味和后甜感。同时利用镍柱对R-M1诱导表达的目的蛋白进行纯化,得到单一条带的重组甜蛋白。 展开更多
关键词 甜味蛋白 马槟榔 Mabinlin Ⅱ 大肠杆菌 诱导表达
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重组植物甜蛋白马宾灵的食品级乳酸乳球菌诱导表达系统的构建 被引量：4
2
作者 顾文亮 夏启玉 +3 位作者 姚晶 胡新文 符少萍 郭建春 《中国农学通报》 CSCD 2012年第30期196-200,共5页
为了将马宾灵(Mabinlin Ⅱ)直接应用于功能性食品中,通过对Mabinlin Ⅱ基因进行有目的的剪切重组,将重组Mabinlin Ⅱ基因插入到食品级表达载体中,经电击转化和乳糖筛选获得重组的食品级乳酸乳球菌,构建了重组植物甜蛋白马宾灵(MBL-ABH)... 为了将马宾灵(Mabinlin Ⅱ)直接应用于功能性食品中,通过对Mabinlin Ⅱ基因进行有目的的剪切重组,将重组Mabinlin Ⅱ基因插入到食品级表达载体中,经电击转化和乳糖筛选获得重组的食品级乳酸乳球菌,构建了重组植物甜蛋白马宾灵(MBL-ABH)的食品级乳酸乳球菌诱导表达系统。结果表明,该食品级诱导表达系统经乳酸链球菌素(Nisin)诱导后所表达的目的蛋白的含量较低,Western-blot检测表明MBL-ABH成功的在食品级乳酸乳球菌中表达。本研究扩展了植物甜蛋白马宾灵在食品方面的应用,有望开发出能够避免添加食糖类物质的功能性食品。 展开更多
关键词 植物甜蛋白 马槟榔 马宾灵 乳酸乳球菌 蛋白表达
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植物马槟榔及其甜蛋白马宾灵(Mabinlin Ⅱ)的研究进展 被引量：3
3
作者 姚晶 顾文亮 +2 位作者 胡新文 郭建春 符少萍 《中国农学通报》 CSCD 2013年第15期1-4,共4页
马槟榔(Capparis masaikaiLévl.)是中国特有的在果实中富含甜蛋白的野生植物资源,其种子中所含的甜蛋白马宾灵(MabinlinⅡ)的甜度是同等重量蔗糖的400倍。马宾灵在目前已发现的7种植物甜蛋白中具有最佳的热稳定性和耐酸性,将其作... 马槟榔(Capparis masaikaiLévl.)是中国特有的在果实中富含甜蛋白的野生植物资源,其种子中所含的甜蛋白马宾灵(MabinlinⅡ)的甜度是同等重量蔗糖的400倍。马宾灵在目前已发现的7种植物甜蛋白中具有最佳的热稳定性和耐酸性,将其作为一种新型甜味剂在食品领域有着极为广阔的市场前景。本研究概述了植物马槟榔的研究现状,分析了其甜蛋白马宾灵(MabinlinⅡ)的活性结构,总结了甜蛋白马宾灵在基因工程方面的研究进展,以期为进一步研究马槟榔的栽培及马宾灵的体外表达提供参考依据。 展开更多
关键词 马槟榔 马宾灵甜蛋白 活性结构分析 基因工程
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植物甜蛋白Mabinlin　Ⅱ　B亚基cDNA的克隆与序列分析 被引量：1
4
作者 胡新文 郭建春 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1999年第2期57-61,共5页
依据MabinlinⅡB亚基N端与C端氨基酸序列设计两个简并引物。从马槟榔（CapparismasaikaiLevl．）种子中提取总RNA。经反转录合成cDNA第一链，以此为模板进行多聚酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）产物为近22bp的DNA片段。经... 依据MabinlinⅡB亚基N端与C端氨基酸序列设计两个简并引物。从马槟榔（CapparismasaikaiLevl．）种子中提取总RNA。经反转录合成cDNA第一链，以此为模板进行多聚酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）产物为近22bp的DNA片段。经克隆及序列测定结果表明，该片段为MabinlinⅡB亚基cDNA的185bp。 展开更多
关键词 马槟榔 植物甜蛋白 基因克隆与测序
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Mabinlin基因分离与克隆中T－载体技术的应用 被引量：1
5
作者 胡新文 郭建春 +2 位作者 邵寒霜 李晓娟 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1995年第S1期54-58,共5页
从采自云南屏边的马槟榔（ＣａｐｐａｒｉｓｍａｓａｉｋａｉＬｅｖｌ）叶片中分离提纯到ＤＮＡ，依据植物超甜蛋白Ｍａｂｉｎｌｉｎ的氨基酸序列，回译出Ｍａｂｉｎｌｉｎ的核苷酸序列，用简并密码子优先使用的原则和计算机ＤＮＡ系统... 从采自云南屏边的马槟榔（ＣａｐｐａｒｉｓｍａｓａｉｋａｉＬｅｖｌ）叶片中分离提纯到ＤＮＡ，依据植物超甜蛋白Ｍａｂｉｎｌｉｎ的氨基酸序列，回译出Ｍａｂｉｎｌｉｎ的核苷酸序列，用简并密码子优先使用的原则和计算机ＤＮＡ系统分析，设计基因的上、下游引物，通过快速扩增得到Ｍａｂｉｎｌｉｎ基因的ＰＣＲ产物。用平末端内切酶ＥｃｏＲＶ和Ｓｍａｌ分别消化质粒Ｂｌｕｅｓｅｒｉｐｔ和Ｐｖｚ－１在标准缓冲液条件下，使用２ｍｍｏｌ／ＬｄＴＴＰ和Ｔａｑ多聚酶，７０℃温育２ｈ，反应中缺乏ｄＴＴＰ以外任何其它核苷酸均可导致线状载体３’端单－Ｔ的增加，此Ｔ－载体可用于Ｍａｂｉｎｌｉｎ基因的分离与克隆。其克隆效率比将ＰＣＲ扩增产物克隆到平末端载体上的效率高出１００倍以上。 展开更多
关键词 马槟榔 植物超甜蛋白基因 T-载体 载体构建
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