CPUY013对胰腺癌Capan2的生长抑制与诱导凋亡作用

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作者 周建华 陈晓光 +1 位作者 尤启冬 季宇彬 《哈尔滨商业大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第2期136-142,共7页

探讨CPUY013对体外培养人胰腺癌细胞Capan2生长抑制及诱导凋亡作用.采用MTT法、克隆原形成法检测CPUY013对Capan2细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪分析CPUY013对细胞周期的影响,Western Blot法检测TopoⅠ、野生型p53、caspase-3、bcl-... 探讨CPUY013对体外培养人胰腺癌细胞Capan2生长抑制及诱导凋亡作用.采用MTT法、克隆原形成法检测CPUY013对Capan2细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪分析CPUY013对细胞周期的影响,Western Blot法检测TopoⅠ、野生型p53、caspase-3、bcl-2和bax蛋白表达的变化.MTT法、集落形成试验结果显示,CPUY013对体外培养的人胰腺癌细胞Capan2有明显的生长抑制作用,处理72 h的IC50值为7.3×10-7mol/L(MTT法),CPUY013在8.0×10-8mol/L浓度可以明显抑制Ca-pan2细胞的集落形成,抑制率为69.6%.同时,CPUY013可剂量依赖地降低Capan2细胞G1期细胞的比例,升高S期细胞的比例,呈现明显的S期阻滞.CPUY013可下调TopoⅠ蛋白的表达,上调细胞中p53、caspase-3、bax蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达,并呈剂量依赖性.CPUY013对Capan2细胞具有明显的生长抑制作用,阻滞细胞周期进程,诱导Capan2细胞凋亡,其可能与降低细胞内TopoⅠ蛋白表达,增加p53、caspase-3、bax蛋白表达,降低bcl-2蛋白表达有关. 展开更多

关键词 TOPOⅠ抑制剂 胰腺癌 capan2细胞 细胞周期 细胞凋亡

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激活和抑制Stat3信号途径对胰腺癌细胞侵袭能力的影响 被引量：8

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作者 杨光 裘正军 +4 位作者 张放 江弢 黄克俭 曹俊 黄陈 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期645-649,共5页

目的:通过激活和阻断人胰腺癌细胞中的Stat3信号转导通路,观察细胞株侵袭能力的变化并探讨其作用机制。方法:采用IL-6处理人胰腺癌细胞Capan-2,AG490处理人胰腺癌细胞SW1990后,MTT法检测细胞的增殖状态,免疫细胞化学法和Western印迹法检... 目的:通过激活和阻断人胰腺癌细胞中的Stat3信号转导通路,观察细胞株侵袭能力的变化并探讨其作用机制。方法:采用IL-6处理人胰腺癌细胞Capan-2,AG490处理人胰腺癌细胞SW1990后,MTT法检测细胞的增殖状态,免疫细胞化学法和Western印迹法检测p-Stat3的表达,实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)mRNA及其蛋白的表达,体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果:IL-6可促进Capan-2细胞的增殖能力提高(P<0.05),p-Stat3的表达增强,VEGF和MMP-2mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),细胞侵袭能力增强。AG490可抑制SW1990细胞株的增殖(P<0.05),p-Stat3的表达下降,VEGF和MMP-2 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05),侵袭能力减弱。结论:Stat3信号转导通路在胰腺癌侵袭过程中起着重要作用,以Stat3信号转导通路为靶点的基因治疗可能为胰腺癌治疗提供新的方向。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 STAT3转录因子 肿瘤浸润 capan-2细胞 SW1990细胞

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阳离子脂质体Lipofectamine2000对人胰腺癌Capan-2细胞的毒性作用 被引量：4

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作者 钟英强 魏菁 +5 位作者 傅玉如 邵静 梁倚文 林燕华 刘娟 朱兆华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1981-1984,共4页

目的探讨阳离子脂质体Lipofectamine2000(Lipo)在一定浓度下对细胞毒性的作用机制。方法应用一定毒性浓度的Lipo作用于胰腺癌Capan-2细胞,利用细胞直接记数法和流式细胞术检测其对Capan-2细胞生长、细胞凋亡和周期的影响。结果Lipo与si... 目的探讨阳离子脂质体Lipofectamine2000(Lipo)在一定浓度下对细胞毒性的作用机制。方法应用一定毒性浓度的Lipo作用于胰腺癌Capan-2细胞,利用细胞直接记数法和流式细胞术检测其对Capan-2细胞生长、细胞凋亡和周期的影响。结果Lipo与siRNA的浓度均影响转染率的高低。在2ml转染体积中,Lipo在5μl的浓度下,使Capan-2细胞生长明显减慢,以第3天后更加明显(P<0.001)。随着转染细胞按常规培养的时间延长,早期凋亡细胞明显增多(P<0.05),活性细胞明显减少(P<0.01),而损伤细胞和死亡细胞明显增多(P<0.001),以48h后更明显;G0～G1期细胞明显增多(P<0.05),G2-M期细胞明显减少(P<0.01),S期细胞明显减少(P<0.01),晚期凋亡细胞减少(P<0.05)。结论在一定浓度下,Lipo可影响细胞的生长、早期凋亡和细胞周期分布,因此,利用Lipo在不同的细胞系进行基因转染过程中Lipo应进行浓度梯度筛选。 展开更多

关键词 脂质体 LIPOFECTAMINE 胰腺肿瘤 capan-2细胞 细胞生长 细胞凋亡 细胞周期 流式细胞术

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鸦胆子素D联合紫杉醇对胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及机制研究 被引量：6

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作者 黄玉玉 饶明君 +2 位作者 谭笔琴 王慧铭 林能明 《中国药房》 CAS 北大核心 2019年第6期789-795,共7页

目的:探讨鸦胆子素D(BD)联合紫杉醇(Taxol)对人胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及可能机制。方法:以Capan-2细胞为对象,采用磺酰罗丹明B法检测不同剂量BD(5、10、15、20μmol/L)、Taxol(10、20、30、40 nmol/L)、BD+Taxol(5μmol/L+10n... 目的:探讨鸦胆子素D(BD)联合紫杉醇(Taxol)对人胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及可能机制。方法:以Capan-2细胞为对象,采用磺酰罗丹明B法检测不同剂量BD(5、10、15、20μmol/L)、Taxol(10、20、30、40 nmol/L)、BD+Taxol(5μmol/L+10nmol/L、10μmol/L+20 nmol/L、15μmol/L+30 nmol/L、20μmol/L+40 nmol/L)作用48 h后的细胞增殖情况,并计算细胞存活率和药物合用指数(CI)。采用克隆形成试验检测BD(20μmol/L,下同)、Taxol(40 nmol/L,下同)、BD+Taxol(20μmol/L+40 nmol/L,下同)作用24 h后的细胞克隆集落形成情况,并计算克隆形成率;采用DAPI染色法观察BD、Taxol、BD+Taxol作用24 h后的细胞凋亡情况,采用Western blotting法检测的BD、Taxol、BD+Taxol作用后凋亡相关蛋白[Bcl-2、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、切割胱天蛋白酶3(Cleaved-caspase-3);药物作用48 h]以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白(药物作用4、6、12 h)的表达情况。结果:经10、15、20μmol/L BD,20、30、40 nmol/L Taxol以及两药上述剂量联合作用48 h后,细胞的存活率均显著降低,且联用组显著低于BD、Taxol同剂量单药组(P<0.05),各联用组(BD 5μmol/L+Taxol10 nmol/L、BD 10μmol/L+Taxol 20 nmol/L、BD 15μmol/L+Taxol 30 nmol/L、BD 20μmol/L+Taxol 40 nmol/L)的CI值分别为0.63±0.04、0.68±0.08、0.89±0.12、0.84±0.05。经20μmol/L BD、40 nmol/L Taxol以及两药上述剂量联合作用后,细胞的克隆集落形成有所减少,并伴有不同程度的染色质浓聚和细胞核皱缩,细胞的克隆形成率(24 h)以及Bcl-2(48 h)、RAPR(48 h)、Caspase-3(48h)、JNK(4、6 h,Taxol单药组除外)的相对表达量均显著降低,Cleaved-caspase-3(48 h)、p-JNK(4、6、12 h)的相对表达量均显著升高,且BD+Taxol联用组均显著优于同时间点BD、Taxol同剂量单药组[JNK(4、6、12 h)、p-JNK(4 h)除外](P<0.05或P<0.01)。结论:BD、Taxol均可抑制人胰腺癌Capan-2细胞的增� 展开更多

关键词 鸦胆子素D 紫杉醇 人胰腺癌 capan-2细胞 增殖 凋亡 胱天蛋白酶 C-JUN氨基末端激酶

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白血病抑制因子在胰腺癌细胞中的表达及意义 被引量：5

5

作者 彭飞 周建平 +2 位作者 盛伟伟 张丹华 董明 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期90-95,共6页

目的了解胰腺导管腺癌（PDAC）中白血病抑制因子（LIF）表达相关性及其临床病理学意义，并探讨白血病抑制因子对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法应用免疫组织化学方法检测53例配对的PDAC及癌旁组织石蜡标本LIF蛋白表达水平，并分析LI... 目的了解胰腺导管腺癌（PDAC）中白血病抑制因子（LIF）表达相关性及其临床病理学意义，并探讨白血病抑制因子对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法应用免疫组织化学方法检测53例配对的PDAC及癌旁组织石蜡标本LIF蛋白表达水平，并分析LIF表达与患者临床病理学各项指标的关系，再以Western印迹法检测14对配对冷冻保存的新鲜PDAC和癌旁组织中LIF表达水平，然后运用Western印迹和聚合酶链反应（PCR）检测6株胰腺癌细胞系（AsPC-1、BxPC-3、PANC-1、SW-1990、Capan-2与Miapaca．2）中自血病抑制因子（LIF）蛋白和LIF—RmRNA表达水平，再运用MTr、Transwell实验检测LIF对胰腺癌细胞系增殖、侵袭及迁移的影响。结果在53例胰腺癌组织中LIF的阳性表达率为66．O％（35／53），在癌旁非肿瘤性胰腺导管中阳性表达率为35．8％（19／53）；LIF在癌组织中表达明显高于配对的癌旁组织（66．0％与35．8％；t：3．031，P=0．004）；LIF表达与肿瘤TNM分期（）（2=3．635，P=0．057）、浸润深度（x。=3．726，P：0．054）差异无统计学意义，但有明显的趋势效应。LIF在14对PDAC中表达水平同样高于癌旁组织（t：5．283，P〈0．01）。免疫印迹和PCR显示：LIF因子在Capan-2中的表达水平相对低于其他5株细胞系，而其受体mRNA在Capan-2细胞中的表达水平相对高于其余5株细胞系。LIF因子能够促进Capan-2细胞的增殖（P〈0．05）。并且能够增加Capan-2细胞的迁移及侵袭能力（P〈0．05）。结论LIF在胰腺癌高表达可能参与胰腺癌的发生进展，且在部分胰腺癌细胞系中，LIF能够促进胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 白血病抑制因子 capan-2细胞株

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siRNA沉默COX-2基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响 被引量：3

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作者 钟英强 黄花荣 +3 位作者 刘娟 林莹 夏忠胜 昝慧 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1290-1296,共7页

目的:研究siRNA沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响。方法:以Lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染siRNA-COX-2至Capan-2细胞。应用RT-PCR、realtime PCR检测COX-2-mRNA表达,Western b... 目的:研究siRNA沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响。方法:以Lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染siRNA-COX-2至Capan-2细胞。应用RT-PCR、realtime PCR检测COX-2-mRNA表达,Western blotting检测COX-2蛋白的表达。应用细胞直接计数法检测细胞的增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡与周期。应用裸鼠模型评估COX-2-siRNA转染的Capan-2细胞成瘤能力的影响。结果:在siRNA-COX-2浓度为50 nmol/L、Lipo为5μL∶2 mL转染容积条件下,在Capan-2细胞的转染效率可达96.47%。siRNA-COX-2沉默Capan-2细胞中COX-2基因表达的最佳序列为siR-NA006,转染24 h以后沉默效率达73%,COX-2蛋白表达水平在转染后48 h和72 h分别被下调了67%和61%。转染48 h后,Capan-2细胞生长明显减慢(P<0.05),48 h和72 h抑制细胞增殖率分别为35.48%和56.32%。细胞凋亡率较对照组高(P<0.05),48 h和72 h细胞凋亡率为2.03%和3.27%。转染24 h、48 h和72 h G0/G1期的比例分别是58.03%、63.31%和65.66%,S期的比例分别是30.27%、24.87%和22.2%。siRNA-COX-2转染Capan-2细胞在裸鼠的皮下形成的肿瘤体积和重量明显减少(P<0.05)。结论:siRNA006-COX-2可有效沉默COX-2基因的表达,可明显抑制Capan-2细胞的生长并降低其成瘤能力。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 capan-2细胞 环氧合酶-2 RNA干扰 细胞增殖 细胞凋亡 细胞周期

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CD74低表达对人胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响 被引量：3

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作者 黄耀星 贾林 +3 位作者 王康玮 余丹纯 孙小娟 江舒曼 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2017年第5期363-368,共6页

目的探讨干扰CD74表达对人胰腺癌细胞株Capan-2细胞生物学行为的影响。方法设计CD74．短发夹RNA（CD74-shRNA）干扰序列构建CD74干扰质粒转染Capan-2细胞（CD74-shRNA组），以转染pSUPER空载质粒为对照，采用MTr法检测细胞增殖活力，划... 目的探讨干扰CD74表达对人胰腺癌细胞株Capan-2细胞生物学行为的影响。方法设计CD74．短发夹RNA（CD74-shRNA）干扰序列构建CD74干扰质粒转染Capan-2细胞（CD74-shRNA组），以转染pSUPER空载质粒为对照，采用MTr法检测细胞增殖活力，划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭，实时定量PCR和免疫印迹法检测CD74mRNA和蛋白表达，实时定量PCR检测细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9mRNA表达。结果细胞增殖活力检测和划痕实验显示，干扰CD74表达可降低Capan-2细胞的增殖活力、抑制细胞迁移（均P〈0．05）。Transwell实验显示，培养48h后CD74-shRNA组和对照组的穿膜细胞数分别为（102．5±9．03）个/孔、（139．1±9．89）个／孔，CD74-shRNA组显著低于对照组（P〈0．05）。相对于对照组，CD74-shRNA组细胞CD74mRNA和蛋白表达抑制率分别为61％、90％，MMP-2和MMP-9mRNA表达抑制率分别为84％、85％。结论CD74低表达可抑制Capan-2细胞增殖、迁移和侵袭，CD74可能作为胰腺癌治疗的新靶点。 展开更多

关键词 胰腺癌 抗原 CD74 细胞增殖 细胞迁移 侵袭 capan-2细胞系

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siRNA靶向沉默hTERT基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡和周期的影响 被引量：1

8

作者 钟英强 魏菁 +4 位作者 罗招凡 傅玉如 邵静 刘娟 朱兆华 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2008年第10期36-42,共7页

目的研究hTERT-siRNA对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。方法利用RNAi技术靶向沉默Capan-2的hTERT基因表达,应用细胞直接计数法和流式细胞术(FCM)检测Capan-2细胞的增殖、凋亡和细胞周期的变化。结果在hTERT-siRNA的使... 目的研究hTERT-siRNA对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。方法利用RNAi技术靶向沉默Capan-2的hTERT基因表达,应用细胞直接计数法和流式细胞术(FCM)检测Capan-2细胞的增殖、凋亡和细胞周期的变化。结果在hTERT-siRNA的使用浓度为50nm、Lipo转染浓度为3μl/2ml转染体积和hTERT沉默效率为100%的条件下,转染hTERT-siRNA24h后,细胞生长已明显减慢,抑制细胞增殖率为26.39%(P<0.05),第2、3、5、7天抑制细胞增殖率分别为46.77%、70.61%、84.71%和85.99%(P<0.001)。随着转染细胞按常规培养时间的延长,早期凋亡细胞明显增多(P<0.001),以24h后更明显;活性细胞明显减少(P<0.001),而损伤细胞明显增多(P<0.001),以6h后明显;死亡细胞明显增多(P<0.001),以24h后更明显。siRNA组与阴性对照组和Lipo对照组均有明显差异(P<0.001)。G0～G1期细胞明显增多(P<0.01),S期细胞明显减少(P<0.01),以24h后明显;G2～M期细胞明显减少(P<0.01),以48h后明显;晚期凋亡细胞增多(P<0.05),以48h后明显。结论hTERT-siRNA可抑制人胰腺癌Capan-2细胞生长,使较多的细胞停留在G0～G1期,而进入G～M期和S期的细胞减少,可促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 capan-2细胞株 RNA指导的DNA聚合酶 RNA 小分子干扰 细胞增殖 细胞凋亡 细胞周期

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CD74/MIF信号通路对Capan-2细胞神经侵袭力及HIF-1α表达的影响 被引量：1

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作者 黄耀星 贾林 +3 位作者 余丹纯 孙小娟 江舒曼 李伟冬 《广州医科大学学报》 2018年第6期20-24,共5页

目的:探讨应用小干扰RNA(siRNA)沉默CD74和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因对Capan-2细胞神经侵袭力及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响及其机制。方法:空白载体处理Capan-2细胞设为对照组,CD74-siRNA慢病毒稳定感染Capan-2细胞设为... 目的:探讨应用小干扰RNA(siRNA)沉默CD74和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因对Capan-2细胞神经侵袭力及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响及其机制。方法:空白载体处理Capan-2细胞设为对照组,CD74-siRNA慢病毒稳定感染Capan-2细胞设为实验组。Transwell实验检测细胞侵袭能力,体外嗜神经侵袭(PNI)实验检测细胞神经侵袭力。靶向MIF的siRNA进一步处理两组细胞,免疫印迹法检测CD74、MIF、HIF-1α、CX3CR1和ERK1/2蛋白表达。结果:Transwell实验显示,对照组和实验组穿膜细胞数分别为(139.1±9.9)个/孔、(102.5±9.0)个/孔;体外PNI实验显示,对照组和实验组的穿膜细胞数分别为(144.9±13.1)个/孔、(104.6±10.4)个/孔,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01),显示沉默CD74基因可显著抑制Capan-2细胞的侵袭能力和PNI能力。免疫印迹显示沉默CD74基因可明显抑制Capan-2细胞CD74蛋白表达,HIF-1α和CX3CR1等蛋白表达量也同时下降(均P<0.01)。MIFsiRNA不影响Capan-2细胞CD74蛋白表达(P>0.05); CD74-siRNA或MIF-siRNA均明显降低ERK1/2蛋白表达,二者联合转染抑制ERK1/2蛋白表达的效能最大(均P<0.01)。结论:沉默CD74可能通过MIFERK1/2信号通路,降低HIF-1α和CX3CR1蛋白表达而抑制Capan-2细胞侵袭和PNI能力。 展开更多

关键词 capan-2细胞 CD74 巨噬细胞移动抑制因子 小干扰RNA 嗜神经侵袭 缺氧诱导因子1Α

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土木香乙酸乙酯提取物对人胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及机制研究 被引量：4

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作者 王霖玲 曾健梅 +2 位作者 阎优优 张博 林能明 《中国药房》 CAS 北大核心 2017年第31期4384-4388,共5页

目的:研究土木香乙酸乙酯提取物(IHE)对人胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及机制。方法:采用MTT法测定0、0.5、1、2、4、8μg/mL的IHE作用48 h后细胞的增殖抑制率,克隆形成试验观察0、1、2μg/mL的IHE作用1周后对细胞克隆形成的影响,Ho... 目的:研究土木香乙酸乙酯提取物(IHE)对人胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及机制。方法:采用MTT法测定0、0.5、1、2、4、8μg/mL的IHE作用48 h后细胞的增殖抑制率,克隆形成试验观察0、1、2μg/mL的IHE作用1周后对细胞克隆形成的影响,Hoechst 33342染色法观察0、2、4μg/mL的IHE作用48 h后细胞核形态的变化,流式细胞术检测0、4、8、16μg/mL的IHE作用48 h后细胞的凋亡率,JC-1染色法观察0、4、8、16μg/mL的IHE作用24 h后细胞线粒体膜电位变化,Western blot法检测0、4、8、16μg/mL的IHE作用48 h后细胞线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Mcl-1和p53上调凋亡因子(PUMA)、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)蛋白的表达。结果:2、4、8μg/mL的IHE对细胞的增殖有明显抑制作用,且呈浓度依赖性,半数抑制浓度为6.6μg/mL;1、2μg/mL的IHE可明显抑制细胞的克隆形成;4μg/mL的IHE可明显造成细胞核固缩;8、16μg/mL的IHE可明显促进细胞凋亡,16μg/mL的IHE作用48 h后细胞凋亡率达到45.53%;16μg/mL的IHE作用24 h后可引起82.47%的细胞线粒体膜电位下降;8μg/mL的IHE可明显下调细胞中Bcl-2、Mcl-1、PUMA、PARP蛋白表达,16μg/mL的IHE可明显下调细胞中Mcl-1、PUMA表达。结论:IHE可能通过引起细胞线粒体膜电位的下降,下调细胞中PUMA、Mcl-1蛋白的表达,引起细胞的凋亡,从而发挥其抑制人胰腺癌Capan-2细胞增殖的作用。 展开更多

关键词 土木香 乙酸乙酯提取物 人胰腺癌capan-2细胞 线粒体 细胞凋亡

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新型小分子激酶抑制剂Ibr-7对人胰腺癌Capan-2细胞的抑制作用及机制研究

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作者 阎优优 张博 +2 位作者 张琪 周冬梅 林能明 《中国药房》 CAS 北大核心 2019年第4期499-506,共8页

目的:观察新型小分子激酶抑制剂Ibr-7[依鲁替尼(Ibr)衍生物]对人胰腺癌Capan-2细胞的抑制作用及其可能机制。方法:以Capan-2细胞为对象,采用CCK-8法检测1、2、4、8μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后的细胞增殖情况,计算细胞存活率;同法检测1... 目的:观察新型小分子激酶抑制剂Ibr-7[依鲁替尼(Ibr)衍生物]对人胰腺癌Capan-2细胞的抑制作用及其可能机制。方法:以Capan-2细胞为对象,采用CCK-8法检测1、2、4、8μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后的细胞增殖情况,计算细胞存活率;同法检测1μmol/L Ibr、Ibr-7对不同剂量吉西他滨/紫杉醇(均分别为0.062 5、0.125、0.25、0.5、1μmol/L)的增敏作用。采用克隆形成试验检测1、2、4μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后的细胞克隆形成情况,并记录细胞集落形成数量。采用流式细胞术或JC-1法检测2、4、8μmol/L Ibr-7作用24或16 h后细胞凋亡情况和线粒体膜电位变化情况,并计算总凋亡率及细胞线粒体膜电位下降比例。采用Westernblotting法检测细胞中相关凋亡蛋白[多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、Noxa、Bcl-2、Bax、髓样细胞白血病1(Mcl-1)、B淋巴细胞瘤x L(Bcl-xL)]的表达情况。结果:1、2、4、8μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后,细胞的存活率均显著下降,各剂量Ibr-7组均显著低于同剂量Ibr组,且Ibr-7的半数抑制浓度显著低于Ibr(P<0.05或P<0.01)。联用Ibr、Ibr-7后,细胞的存活率均显著低于同剂量吉西他滨/紫杉醇单用组,且Ibr-7联用组显著低于同剂量Ibr联用组(P<0.05或P<0.01)。经2、4μmol/L Ibr以及1、2、4μmol/L Ibr-7作用48 h后,细胞集落形成数量均显著减少,且各剂量Ibr-7组均显著低于同剂量Ibr组(P<0.01)。经不同剂量Ibr-7作用24或16h后,Capan-2细胞的总凋亡率(2、4、8μmol/L组)、细胞线粒体膜电位下降比例(8μmol/L组)以及Noxa(2、4、8μmol/L组)、Bax(8μmol/L组)蛋白的相对表达量均显著上升,PARP(8μmol/L组)、Bcl-2(4μmol/L组)、Mcl-1(2、4、8μmol/L组)蛋白的相对表达量均显著下降,且8μmol/L Ibr-7组上述指标(PARP、Bcl-2相对表达量除外)均显著优于同剂量Ibr组(P<0.05或P<0.01)。而各组细胞Bcl-xL蛋白的相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:与Ibr相比,Ibr-7对人胰� 展开更多

关键词 依鲁替尼 依鲁替尼衍生物 人胰腺癌capan-2细胞 增殖 凋亡 线粒体膜电位 凋亡相关蛋白

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