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犬博卡病毒流行病学调查及基因序列分析
1
作者 程群 韩宏晓 +6 位作者 郁达义 赵秋华 孙安帮 马福余 陈美松 王海根 孙清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期200-204,共5页
犬博卡病毒(CBoV)属于细小病毒科的无囊膜病毒,是一种从犬粪便中检测发现的新发病原,该病毒现已在多个国家和地区犬粪便中检测到,但其在上海地区的流行情况及其致病机制目前还不是很清楚。为了调查犬博卡病毒在上海犬中的流行情况,本研... 犬博卡病毒(CBoV)属于细小病毒科的无囊膜病毒,是一种从犬粪便中检测发现的新发病原,该病毒现已在多个国家和地区犬粪便中检测到,但其在上海地区的流行情况及其致病机制目前还不是很清楚。为了调查犬博卡病毒在上海犬中的流行情况,本研究于2019年6月至2019年12月,从上海市采集犬新鲜粪便206份,通过PCR扩增方法进行鉴定并进一步通过进化树对其基因组进行分析。结果显示在所搜集的206份样品中有3份为CBoV阳性(1.5%),为了对检测出的CBoV基因组特性进行分析,我们扩增出CBoV的全基因组,发现其基因组共含有5246个核苷酸,其中包含大小为249 bp的5'UTR、4853 bp的开放阅读框和144 bp的3'UTR。从系统进化树中可以看出该病毒与其他亚洲分离株亲缘关系较近,处于同一个分支,同属于CBoV2。本研究通过对CBoV的流行情况进行调查,揭示了CBoV在上海犬中的感染情况,为进一步研究CBoV的致病性及潜在的CBoV传染病的预警和防控提供科学依据和理论参考。 展开更多
关键词 犬博卡病毒 基因特性 进化树分析
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犬源牛犬细小病毒和犬圆环病毒二联PCR检测方法的建立及应用 被引量：1
2
作者 于永乐 姚延珠 +6 位作者 韩先杰 张传美 秦志华 杨瑞梅 张洪亮 刘维全 单虎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期978-982,共5页
本研究旨在建立可同时检测犬源牛犬细小病毒(CBoV)和犬圆环病毒(CCV)的二联PCR检测方法,并对两种病毒病当前的流行情况进行监测和调查。分别将已发表的CBoV和CCV基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5计算机软... 本研究旨在建立可同时检测犬源牛犬细小病毒(CBoV)和犬圆环病毒(CCV)的二联PCR检测方法,并对两种病毒病当前的流行情况进行监测和调查。分别将已发表的CBoV和CCV基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的片段大小分别为170 bp(CBoV)和239 bp(CCV)。分别提取CBoV和CCV重组质粒作为模板,进行二联PCR扩增试验。结果表明,本研究成功建立了可同时检测CBoV和CCV的二联PCR检测方法。并对其重复性、特异性和灵敏度进行验证,二联PCR最低检测限度为3.0 pg总DNA,而对犬细小病毒2型、犬瘟热病毒和犬副流感病毒的PCR检测结果均为阴性。对送检的30份病料进行检测,其中,4份为CBoV阳性,3份为CCV阳性,未检测到混合感染。综上所述,本研究所建立的CBoV和CCV二联PCR诊断方法特异性高,敏感性好,可用于临床犬腹泻病的流行病学调查。 展开更多
关键词 犬源牛犬细小病毒 犬圆环病毒 二联PCR
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犬博卡病毒结构基因VP2多克隆抗体的制备与应用 被引量：2
3
作者 张茜 闫琰 +4 位作者 马婧 李建宁 张薇 黄菱 孙玉宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期253-257,共5页
目的构建犬博卡病毒(CBV)结构蛋白VP2的兔抗VP2多克隆抗体并进行特异性鉴定。方法应用PCR方法扩增获得CBV结构蛋白VP2 C末端区域300个氨基酸所对应的基因片段。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体p ET-32a(+),构建重组质粒p ET-32... 目的构建犬博卡病毒(CBV)结构蛋白VP2的兔抗VP2多克隆抗体并进行特异性鉴定。方法应用PCR方法扩增获得CBV结构蛋白VP2 C末端区域300个氨基酸所对应的基因片段。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体p ET-32a(+),构建重组质粒p ET-32a(+)-VP2,转化至E.coli BL21中,异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物SDS-PAGE分析鉴定;纯化融合蛋白后免疫新西兰家兔,制备多克隆抗体,检测抗体效价及特异性。结果通过酶切和测序证实成功构建原核表达载体p ET-32a(+)-VP2,转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶6 400 000,Western blot法及免疫荧光染色鉴定抗体的特异性。结论成功制备了抗CBV结构蛋白VP2的多克隆抗体。 展开更多
关键词 犬博卡病毒(CBV) 结构基因VP2 多克隆抗体
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犬博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用 被引量：1
4
作者 陈意伟 温肖会 +3 位作者 朱学良 吕殿红 翟少伦 魏文康 《安徽农业科学》 CAS 2016年第10期148-149,285,共3页
[目的]建立犬博卡病毒(Canine bocavirus,CBo V)的PCR检测方法,了解其流行情况。[方法]根据Gen Bank数据库上CBo V的VP2基因序列合成1对引物,建立PCR检测方法,并运用该方法对临床样品进行检测。[结果]特异性试验中,除CBo V有目的条带出... [目的]建立犬博卡病毒(Canine bocavirus,CBo V)的PCR检测方法,了解其流行情况。[方法]根据Gen Bank数据库上CBo V的VP2基因序列合成1对引物,建立PCR检测方法,并运用该方法对临床样品进行检测。[结果]特异性试验中,除CBo V有目的条带出现外,犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬传染性肝炎(ICHV)、犬副流感病毒(CPIV)、猫瘟热(FDV)等均无条带出现。敏感性试验表明,此检测方法对CBo V的最低检测量为4.806 2 pg/μL。重复性试验表明,多次重复试验结果一致,表明此方法重复性好。425份样品中仅有1份样品扩增出目的条带,经测序比对鉴定为CBo V。初步的流行病学调查结果表明,CBo V在犬中的流行率与感染率极低。[结论]建立的PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、可重复性强等特点。 展开更多
关键词 犬博卡病毒 PCR检测方法 应用
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