狂犬病毒疫苗株CTN-1八代次N和G基因序列测定及分析 被引量：14

1

作者 孟胜利 徐葛林 +4 位作者 明平刚 孙文 吴杰 杨晓明 严家新 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期327-332,335,共7页

目的测定八个代次CTN-1疫苗株核蛋白（N）和糖蛋白（G）基因序列，并与代表性疫苗株和街毒株进行比较。方法用RT-PCR反应扩增八代次CTN-1的N和G基因，获得cDNA，进行序列测定。结果八个代次CTN-1的N和G基因序列与其它疫苗株比较，核苷... 目的测定八个代次CTN-1疫苗株核蛋白（N）和糖蛋白（G）基因序列，并与代表性疫苗株和街毒株进行比较。方法用RT-PCR反应扩增八代次CTN-1的N和G基因，获得cDNA，进行序列测定。结果八个代次CTN-1的N和G基因序列与其它疫苗株比较，核苷酸的同源性分别为82．7％～84．5％和86．6％～88．5％，氨基酸同源性分别为88．9％～92．5％和95．3％～98．2％；与在我国分离的街毒株相比，核苷酸的同源性分别为84．2％～95．0％和80．4％～94．3％，氨基酸同源性分别为92．1％～99．6％和88．7％～98．5％。CTN-1株八个代次之间的核苷酸序列几乎完全相同。结论CTN-1株在传代过程中N和G基因变异小，与中国流行的代表性街毒株的同源性高于其它疫苗株。 展开更多

关键词 狂犬病毒 传代 ctn-1 序列测定

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铁皮石斛对异丙肾上腺素诱导心肌肥厚的保护作用 被引量：6

2

作者 肖小春 陈伟鸿 +6 位作者 曹媛媛 娄勇军 刘源 王瑾 翟旭峰 李年生 李莹 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期800-804,共5页

该文研究铁皮石斛对异丙肾上腺素（ISO）诱导的大鼠心肌肥厚影响及其作用机制。取健康SD大鼠60只，雌雄各半，随机分为5组，每组12只，即正常组，模型组，铁皮石斛样品低、中、高剂量组（0．09，0．18，1．1g·kg^-1）。除正常组外... 该文研究铁皮石斛对异丙肾上腺素（ISO）诱导的大鼠心肌肥厚影响及其作用机制。取健康SD大鼠60只，雌雄各半，随机分为5组，每组12只，即正常组，模型组，铁皮石斛样品低、中、高剂量组（0．09，0．18，1．1g·kg^-1）。除正常组外，其余各组每天背部皮下注射ISO（5mg·kg^-1）连续．10扎在注射ISO的同时，样品组开始灌胃给予不同剂量的铁皮石斛样品共30d，模型组给予同等量的生理盐水。颈总动脉插管检测各组左心室收缩压（LVSP）、计算左心室（LW）／胫骨长、心脏质量指数（HWI）和心肌羟脯氨酸含量（Hydro）；心肌组织HE染色观察心肌结构，MASSON染色观察心肌纤维化程度；酶联免疫分析（ELISA）检测血浆中心房利尿肽（ANP）、脑钠肽（BNP）、心肌肌钙蛋白I（cTN-I）浓度。结果显示，与正常组相比，ISO诱导大鼠心肌肥厚明显，且血浆中ANP、BNP和cTN-I的水平显著上升（P〈0．05）；与模型组相比，铁皮石斛样品能显著抑制ISO诱导的心室压力升高（P〈0．05）和心室肥厚，改善心肌纤维化，减少心肌胶原合成（P〈0．05），同时显著下调血浆ANP，BNP和cTN-I的水平（P〈0．05）。结果提示，铁皮石斛对异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚具有保护作用。 展开更多

关键词 铁皮石斛 心肌肥厚 ANP BNP ctn-1

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狂犬病病毒CTN-1株在鸡胚细胞驯化过程中G基因和滴度分析 被引量：4

3

作者 李慧 刘永娣 +5 位作者 罗姗 王春华 朱士茂 张佩 丁玉江 郭采平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期143-147,共5页

目的研究狂犬病病毒CTN-1株在鸡胚细胞驯化过程中的特性。方法利用RT-PCR反应扩增CTN-1株19个代次的G蛋白基因,获得cDNA进行序列测定;并以免疫荧光法测定各代次毒株在细胞中的滴度。结果序列测定显示：CTN-1株在鸡胚细胞驯化过程中G蛋... 目的研究狂犬病病毒CTN-1株在鸡胚细胞驯化过程中的特性。方法利用RT-PCR反应扩增CTN-1株19个代次的G蛋白基因,获得cDNA进行序列测定;并以免疫荧光法测定各代次毒株在细胞中的滴度。结果序列测定显示：CTN-1株在鸡胚细胞驯化过程中G蛋白基因序列发生不同程度变异且逐步积累,从第30代开始,G蛋白基因序列趋于稳定。与CTN-1株相比,CTN-1鸡胚细胞驯化株在G蛋白的第147、333、389、421和485位氨基酸发生了突变。与此相对应,CTN-1株鸡胚细胞驯化株滴度逐渐趋于稳定,并于第33-58代滴度维持在10-101g细胞荧光转化灶单位/mL左右。G蛋白同源性分析表明,CTN-1株鸡胚细胞驯化株与我国近期不同区域分离得到的街毒株具有较高同源性,其G蛋白氨基酸同源性为89.3%-99.0%。结论 CTN-1株在鸡胚细胞驯化过程中G蛋白基因发生稳定变异,滴度在传代后33-58代达到较高水平,稳定性较好,适于我国狂犬病防治的实际应用。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 ctn-1 G蛋白 序列测定 滴度

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CTn-I、Mb及CK-MB同时检测对判定溶栓再通的价值

4

作者 张更荣 陈电容 《江西医学检验》 2000年第4期280-281,共2页

关键词 血清诊断 ctn-1 MB CK-MB 化学发光免疫分析

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狂犬病毒CTN-1株在Vero细胞上的适应传代研究 被引量：20

5

作者 董关木 刘增顺 +2 位作者 俞永新 严子林 刘景华 《微生物学免疫学进展》 1995年第2期82-85,共4页

本文报导了用我国狂犬病毒固定毒人二倍体细胞适应株（ＣＴＮ－１）进行Ｖｅｒｏ细胞适应传代研究。通过连续传代培养，滴度可达８．０ｌｏｇＬＤ_（５０）ｍｌ，达到了ＷＨＯ规定的不需浓缩的标准。病毒用０．０１ＭＯＩ感染细胞其产... 本文报导了用我国狂犬病毒固定毒人二倍体细胞适应株（ＣＴＮ－１）进行Ｖｅｒｏ细胞适应传代研究。通过连续传代培养，滴度可达８．０ｌｏｇＬＤ_（５０）ｍｌ，达到了ＷＨＯ规定的不需浓缩的标准。病毒用０．０１ＭＯＩ感染细胞其产量与１Ｍｏｌ感染量相仿。病毒增殖高峰在４－５天，维持达１５天无明显下降，且可连续收获４－５次。因此，该毒种符合ＷＨＯ提出的疫苗生产毒种要求，可用于狂犬病疫苗生产。 展开更多

关键词 狂犬病疫苗 VERO细胞 二倍体细胞 适应株 制备

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中国狂犬病疫苗生产株CTN-1全基因序列分析 被引量：16

6

作者 石磊泰 俞永新 +6 位作者 刘景华 唐建蓉 吴小红 曹守春 李加 曲效民 董关木 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期195-201,共7页

本文首次对我国现行狂犬病疫苗生产用毒株CTN-1进行全长基因组序列测定和分析,为CTN-1疫苗在我国实际应用中的优势提供理论基础。利用RT-PCR方法分段扩增CTN-1全基因组序列,随后将PCR产物克隆到T载体、测序、拼接,用MegAlign软件比较CT... 本文首次对我国现行狂犬病疫苗生产用毒株CTN-1进行全长基因组序列测定和分析,为CTN-1疫苗在我国实际应用中的优势提供理论基础。利用RT-PCR方法分段扩增CTN-1全基因组序列,随后将PCR产物克隆到T载体、测序、拼接,用MegAlign软件比较CTN-1全基因组序列与国内外狂犬病疫苗株和街毒株全基因组序列的同源性;再以糖蛋白(G)基因为模板,用ClustalX和MEGA4软件进行系统进化分析。测序结果表明CTN-1全基因组序列的长度为11925nt(GenBank登录号FJ959397),序列分析表明CTN-1为基因Ⅰ型;CTN-1株全基因组序列与国内外狂犬病疫苗株和街毒株全基因组之间的同源性是81.5%～93.4%;与美国蝙蝠分离株SHBRV18的同源性最低,仅为81.5%;与新近从中国国内分离的野毒株HN10株的同源性最高,达93.4%。系统进化分析结果表明,CTN-1与国内不同地区大多数分离的狂犬病街毒株聚类于同一组内;而我国另一疫苗株aG株与国外疫苗株如Flury、PM、PV、ERA、RC-HL和个别中国街毒株分在另一组内。G基因氨基酸对比也显示CTN-1株与国内大多数街毒株的同源性高于其他疫苗株,结果说明CTN-1株较其他疫苗株病毒更适合制备用于预防中国狂犬病的灭活疫苗。 展开更多

关键词 ctn-1狂犬病疫苗株 全基因组序列 基因同源性 进化分析

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国产CTN-1V株人用狂犬病疫苗(Vero细胞)在健康人群中的安全性及免疫原性 被引量：11

7

作者 黄腾 李艳萍 +9 位作者 莫顺平 李加 南日范 周蕾 王明惠 聂飞 陈建民 杨天兵 李玉华 俞永新 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期624-628,637,共6页

目的评价国产CTN-1V株人用狂犬病疫苗(Vero细胞)在10~60岁健康人群中的安全性和免疫原性。方法采用随机、盲法、同类制品平行对照的设计,将900名受试者按2∶1随机配对分别接种试验疫苗及对照疫苗,观察安全性;所有受试者于首剂免前和免... 目的评价国产CTN-1V株人用狂犬病疫苗(Vero细胞)在10~60岁健康人群中的安全性和免疫原性。方法采用随机、盲法、同类制品平行对照的设计,将900名受试者按2∶1随机配对分别接种试验疫苗及对照疫苗,观察安全性;所有受试者于首剂免前和免后14及45 d采集静脉血,通过快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)测定血清中狂犬病病毒中和抗体滴度,计算几何平均浓度水平(GMC)。结果试验组与对照组不良反应发生率分别为32.33%和38.67%,试验组明显低于对照组(P<0.05)。局部反应主要为接种部位疼痛、发红、肿胀、瘙痒,全身反应主要为发热、头痛、乏力等,大部分为轻度(1级)。免后14、45 d试验组的狂犬病病毒中和抗体阳转率均为100.00%,抗体GMC分别为9.96和28.83 IU/m L,且与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论国产CTN-1V株人用狂犬病疫苗(Vero细胞)具有良好的安全性和免疫原性。 展开更多

关键词 狂犬病疫苗 ctn-1V株 安全性 免疫原性

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我国人用狂犬病疫苗株病毒糖蛋白生物信息学分析 被引量：8

8

作者 李加 曹守春 +4 位作者 石磊泰 唐建蓉 田宏 高向东 董关木 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第3期257-261,共5页

目的测定我国人用狂犬病疫苗株4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒糖蛋白G基因序列,并对其进行生物信息学分析。方法 RT-PCR扩增3株病毒糖蛋白G基因,分别克隆至pGEM-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,进行测序。应用DNAstar MegAlign软... 目的测定我国人用狂犬病疫苗株4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒糖蛋白G基因序列,并对其进行生物信息学分析。方法 RT-PCR扩增3株病毒糖蛋白G基因,分别克隆至pGEM-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,进行测序。应用DNAstar MegAlign软件分析3株病毒糖蛋白的同源性,AntheProt 5.0及DNAstar Protean软件分析3株病毒糖蛋白的结构及潜在B细胞抗原表位的差异。结果 4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒均属基因Ⅰ型狂犬病病毒;其糖蛋白G区基因同源性为76.0%～88.4%,G区ORF基因同源性为84.4%～91.5%,氨基酸序列同源性为90.5%～92.2%;3株病毒糖蛋白前19位氨基酸中均存在潜在信号肽结构,其中第19位氨基酸为三者潜在信号肽断裂位点,第17位氨基酸为4aGV株病毒糖蛋白潜在信号肽断裂位点;3株病毒糖蛋白分别在第463～476、464～475及463～475位氨基酸存在潜在可折叠螺旋的疏水性区域,为明显跨膜区域;4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒糖蛋白氨基酸残基均富含潜在α螺旋、β折叠及卷曲结构,其比例分别为30%、31%、39%,28%、30%、41%和29%、30%、41%,易发生扭曲、折叠,形成丰富的二级结构;3株病毒糖蛋白潜在B细胞抗原表位位置与数量相似。结论已对3株人用狂犬病疫苗株G基因进行了全面生物信息学分析,为完善我国人用狂犬病疫苗生产用毒种的质控标准提供了支持。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 aG ctn-1V PV2061 糖蛋白 生物信息学

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狂犬病病毒CTN-1株在人用狂犬病疫苗中的应用及研究进展 被引量：5

9

作者 石磊泰(综述) 李玉华(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1375-1381,共7页

狂犬病病毒CTN-1株在我国分离、驯化、减毒、建立和应用,具有自主知识产权,并已完全适应Vero细胞。具有效价高、免疫原性好、浓缩倍数少、生产成本低等优点。该毒株对人群有较好的保护作用。经生物学、免疫学、免疫化学、分子生物学、... 狂犬病病毒CTN-1株在我国分离、驯化、减毒、建立和应用,具有自主知识产权,并已完全适应Vero细胞。具有效价高、免疫原性好、浓缩倍数少、生产成本低等优点。该毒株对人群有较好的保护作用。经生物学、免疫学、免疫化学、分子生物学、基因测序和动物流行病学等综合验证,该毒株符合国家和WHO相关人类疫苗生产的要求和质量标准,目前已实现产业化生产。本文对狂犬病病毒CTN-1株在狂犬病疫苗中应用的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 ctn-1株 狂犬病疫苗

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无血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒工艺的建立 被引量：5

10

作者 孙燕 张香玲 +4 位作者 陈军 刘鹏 马超 张生琰 李薇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第10期1099-1103,共5页

目的建立无血清培养基(virus production-serum-free medium,VP-SFM)培养Vero细胞制备狂犬病病毒CTN-1V株的工艺。方法分别采用VP-SFM和含5%牛血清DMEM于方瓶中培养Vero细胞制备狂犬病病毒CTN-1V株,比较无血清培养基培养不同代次Vero细... 目的建立无血清培养基(virus production-serum-free medium,VP-SFM)培养Vero细胞制备狂犬病病毒CTN-1V株的工艺。方法分别采用VP-SFM和含5%牛血清DMEM于方瓶中培养Vero细胞制备狂犬病病毒CTN-1V株,比较无血清培养基培养不同代次Vero细胞间及无血清与含血清培养基培养Vero细胞间制备的狂犬病病毒滴度及效力。将2 g/L微载体cytodex-1加至250 ml spinner flask中,加入Vero细胞,37℃培养3 d,按MOI=0.02接种狂犬病病毒CTN-1V株,检测病毒收获液的病毒滴度及效力,每天显微镜下观察细胞生长情况,计算细胞比生长速率。结果无血清培养基培养不同代次Vero细胞制备狂犬病病毒的滴度和效力差异无统计学意义(P>0.05);无血清和含血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒的滴度差异无统计学意义(P>0.05),但无血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒效力明显高于含血清的培养基(P<0.05)。搅拌瓶微载体系统培养Vero细胞制备狂犬病病毒,细胞贴壁均匀,生长良好,收获病毒液的平均病毒滴度为6.50 lg FFU/ml,平均病毒效力为6.77 IU/ml。结论初步建立了微载体系统无血清培养Vero细胞制备狂犬病病毒的工艺,为无血清规模化制备狂犬病疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 无血清培养基 VERO细胞 狂犬病病毒 ctn-1V株

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狂犬CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的病毒收获液制备工艺研究 被引量：5

11

作者 徐道俊 段清堂 +5 位作者 鲁卫东 杨燕羽 马波 李子财 李宛馀 刘馨 《药物生物技术》 CAS 2017年第5期381-385,共5页

采用狂犬病病毒株CTN-1V株接毒于人二倍体细胞Walvax-2株进行病毒收获液制备工艺研究。接毒时,采用不同的人二倍体细胞量、不同的接毒方式及不同的moi进行比较;接毒后,待带毒细胞长至致密单层即95%以上,采用直接换病毒维持液和带毒传一... 采用狂犬病病毒株CTN-1V株接毒于人二倍体细胞Walvax-2株进行病毒收获液制备工艺研究。接毒时,采用不同的人二倍体细胞量、不同的接毒方式及不同的moi进行比较;接毒后,待带毒细胞长至致密单层即95%以上,采用直接换病毒维持液和带毒传一代后再换维持液的方式进行比较;同时采用不同培养基维持液、不同pH值的维持液及对不同的病毒收获时间进行比较;通过测定病毒收获液的滴度来确定狂犬病病毒株CTN-1V株接毒于人二倍体细胞Walvax-2株上的病毒收获液最适制备工艺条件。接毒时,采用人二倍体细胞量≥2亿,37℃悬浮混合吸附30 min的方式及0.05 moi;接毒后采用美迪DMEM+0.3%人血白蛋白作为病毒维持液、pH为7.8~8.0的维持液及从换维持液d 3开始收获病毒液,并换上新的维持液,之后再进行5 d及7 d病毒液的收获,通过动物法和细胞法测定收获液的病毒滴度,3次收获液的病毒滴度均大于7.0 lg LD50/m L。建立起了稳定的狂犬病病毒株CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的病毒收获液制备工艺。 展开更多

关键词 人二倍体细胞Walvax-2株 狂犬病病毒株ctn-1V株 病毒维持液 病毒收获液 病毒滴度 moi

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狂犬病病毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株的适应传代 被引量：4

12

作者 何丽芳 陈敏 +8 位作者 张益丽 任正勇 胡超 高显专 赵振鑫 马万 李兵 白梅 马波 《微生物学免疫学进展》 2014年第5期1-4,共4页

目的：建立狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的传代适应株。方法用狂犬病病毒固定毒CTN-1V株经昆明小鼠鼠脑回传后的病毒接种Walvax-2细胞，连续传代，检测各代次病毒的滴度及免疫原性。结果CTN-1V株能较好地适应Wal... 目的：建立狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的传代适应株。方法用狂犬病病毒固定毒CTN-1V株经昆明小鼠鼠脑回传后的病毒接种Walvax-2细胞，连续传代，检测各代次病毒的滴度及免疫原性。结果CTN-1V株能较好地适应Walvax-2细胞，通过连续带毒传代至第7代，病毒滴度可达6．78lgLD50/mL，并在第10～15代内滴度维持在7．0lgLD50/mL以上，15～30代滴度稳定在7．0lgLD50/mL左右。以15代适应毒株CTN-1V-HDCP15制备的疫苗原液，各项指标均符合《中华人民共和国药典》三部（2010版）的要求，疫苗效力在6．0IU/剂以上。结论所获人胚肺二倍体细胞Walvax-2株传代适应狂犬病毒固定毒株CTN-1V-HDC可用于人用狂犬病疫苗的生产开发。 展开更多

关键词 狂犬病毒ctn-1V株 人胚肺二倍体细胞 适应 传代 狂犬病疫苗

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兽用狂犬病灭活疫苗(CTN-1株)的临床应用效果评价 被引量：3

13

作者 赵浩军 陈静 +8 位作者 韦海涛 刘晓冬 赵景义 徐发荣 余琦 李栋梁 马志军 岳雷 张小飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期396-400,共5页

为进一步评价兽用狂犬病灭活疫苗(CTN-1株)的安全性和免疫效力,本研究通过受试犬免疫后的临床观察、荧光抗体病毒中和试验(FAVN)检测血清中和抗体(NA)及攻毒保护性试验等方法进行检测。结果表明:试验犬接种该疫苗中试产品后无严重不良反... 为进一步评价兽用狂犬病灭活疫苗(CTN-1株)的安全性和免疫效力,本研究通过受试犬免疫后的临床观察、荧光抗体病毒中和试验(FAVN)检测血清中和抗体(NA)及攻毒保护性试验等方法进行检测。结果表明:试验犬接种该疫苗中试产品后无严重不良反应;5个批次的中试疫苗产品免疫效果稳定;免后第7 d,抗体阳转率97.5%,90%的免疫犬抗体达到有效保护水平;免后第360 d试验组的群体有效保护率开始下降,为90.5%;免后第390 d仍有83%的试验犬达到有效保护水平;采用狂犬病病毒(RV)街毒CNX8511株攻击免后第390 d随机抽样的30条免疫犬,其保护率达100%。结果证明,唐山怡安生物工程有限公司生产的兽用狂犬病灭活疫苗(CTN-1株)的临床免疫效力不低于同类进口疫苗,可以用于我国动物狂犬病的预防和控制。 展开更多

关键词 狂犬病灭活疫苗 ctn-1株 效果评价

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3种传代细胞系对狂犬病病毒CTN-1V株敏感性的比较 被引量：3

14

作者 孙怡 李秀锦 +4 位作者 吴炳元 杨宇飞 仲飞 刘瑜瑄 郭鑫 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第10期880-883,共4页

目的比较3种传代细胞系(Vero细胞、BHK-21细胞、MDCK细胞)对狂犬病病毒CTN-1V株的敏感性。方法采用混种的方法,将狂犬病病毒CTN-1V株分别接种于上述3种不同来源的连续传代细胞系,在不同时间观察3种细胞的病变情况,同时应用快速免疫荧光... 目的比较3种传代细胞系(Vero细胞、BHK-21细胞、MDCK细胞)对狂犬病病毒CTN-1V株的敏感性。方法采用混种的方法,将狂犬病病毒CTN-1V株分别接种于上述3种不同来源的连续传代细胞系,在不同时间观察3种细胞的病变情况,同时应用快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)和ELISA法检测病毒滴度和抗原含量,分析不同来源细胞对狂犬病病毒CTN-1V株的敏感性。结果Vero细胞培养的狂犬病病毒滴度在第8天达到高峰,为7.80LogFFD50/ml,BHK-21细胞病毒滴度在第6天达到高峰,为7.30LogFFD50/ml,而MDCK细胞在第6天病毒最高滴度只有5.55LogFFD50/ml。BHK-21细胞培养的狂犬病病毒抗原含量(A492)值,在各代次均高于Vero细胞和MDCK细胞。结论Vero细胞和BHK-21细胞对狂犬病病毒CTN-1V株的敏感性高于MDCK细胞,且BHK-21细胞产毒高峰比Vero细胞提前。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 ctn-1V株 传代细胞系 敏感性

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狂犬病病毒CTN-1株G蛋白的原核表达及基本功能评价 被引量：2

15

作者 巩蔚 严丽蔚 +6 位作者 朱文兵 张雪梅 徐婧雯 吴忠香 卢孔杰 孙明 董少忠 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第10期1032-1036,共5页

目的原核表达狂犬病病毒(rabies virus,RV)CTN-1株G蛋白,并评价其基本功能。方法采用RT-PCR法扩增RV CTN-1株G蛋白基因,插入原核表达载体p GEX-5X-1,构建重组表达质粒p GEX-5X-1-CTN,转化入Rosetta(DE3)p Lys S,IPTG诱导表达。表达的重... 目的原核表达狂犬病病毒(rabies virus,RV)CTN-1株G蛋白,并评价其基本功能。方法采用RT-PCR法扩增RV CTN-1株G蛋白基因,插入原核表达载体p GEX-5X-1,构建重组表达质粒p GEX-5X-1-CTN,转化入Rosetta(DE3)p Lys S,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,采用间接ELISA法检测其与阳性血清的结合性能及亲和力。结果重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;纯化的重组蛋白RV-G相对分子质量约85 000,纯度可达85%,能与阳性血清特异性结合,且具有较好的区分性,与阳性血清的亲和力常数为1.2×1010 M-1。结论成功原核表达、纯化获得了纯度较高、特异性较好、亲和力较强、灵敏度较高的RV CTN-1株G蛋白,为研究G蛋白的抗原表位、建立针对RV G蛋白的ELISA抗体检测方法及其中和抗体的分选检测奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 ctn-1株 G蛋白 原核细胞 基因表达 亲和力 酶联免疫吸附测定

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密码子优化提高狂犬病病毒CTN-1株核蛋白在大肠埃希菌中的表达 被引量：2

16

作者 任元雪 高鑫 +2 位作者 刘茜 卢学新 朱武洋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期333-337,共5页

目的:获取具有生物活性的狂犬病病毒核蛋白在大肠埃希菌表达系统中高效表达。方法:实验使用密码子优化技术重新编码狂犬病病毒CTN-1株核蛋白基因,人工合成全长基因并克隆至pET-43.1a表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)株中诱导表达,并使用W... 目的:获取具有生物活性的狂犬病病毒核蛋白在大肠埃希菌表达系统中高效表达。方法:实验使用密码子优化技术重新编码狂犬病病毒CTN-1株核蛋白基因,人工合成全长基因并克隆至pET-43.1a表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)株中诱导表达,并使用Western blot检测其反应原性。结果:诱导后SDS-PAGE分析显示在相对分子质量50×103处出现明显的表达条带,与预期蛋白质条带大小一致。其中在大肠埃希菌A600为0.5左右,37℃诱导5 h时表达产量最高(约为32.3%)。大量表达时核蛋白的表达形式主要为包涵体,后经Ni 2+螯合层析纯化,获得纯度为95%以上的目的蛋白。纯化产物经Western blot鉴定,与疫苗免疫小鼠血清呈阳性反应,表明大肠埃希菌表达CTN-1株核蛋白具有生物活性。结论:本实验成功建立了CTN-1株核蛋白在大肠埃希菌表达系统的高效表达方法,并获得了高纯度目的蛋白,为进一步的临床诊断和新型疫苗制备提供基础资料。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 ctn-1株 核蛋白 原核表达 密码子优化

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狂犬病病毒CTN-1V株糖蛋白遗传稳定性研究分析 被引量：2

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作者 李加 曹守春 +6 位作者 石磊泰 王云鹏 吴小红 刘景华 唐建蓉 俞永新 董关木 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期265-269,共5页

目的测定6代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列，并研究其致病力稳定性。方法RT-PCR方法扩增6代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列，分别将产物克隆入pGEM-T载体中，测定并拼接序列，应用DNAStar和Mega4．0软件包中的相应软件对基因组序列... 目的测定6代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列，并研究其致病力稳定性。方法RT-PCR方法扩增6代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列，分别将产物克隆入pGEM-T载体中，测定并拼接序列，应用DNAStar和Mega4．0软件包中的相应软件对基因组序列进行分析，并与近期我国分离且具有地域代表性的狂犬病病毒街毒株进行基因同源性分析；测定6代次CTN-1V株病毒滴度（LD卯／m1）和细胞荧光滴度（FFU／m1），采用FFU／LD∞指标来对病毒的毒力进行评价。结果6代次CTN-1V株病毒序列测定结果表明，仅第1222位的G突变为A，导致408位氨基酸由谷氨酸突变为赖氨酸，而1320位核苷酸由A突变为G，但显示为无义突变；5代次CTN-1V株病毒致病力指标均在1．00～1．07之间；糖蛋白生物信息学分析表明，CTN-1V株病毒与我国近期分离的街毒株均具有较高同源性。结论CTN-1V株病毒糖蛋白传代稳定，且与我国近期分离的街毒株高度同源，各代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列的测定及致病力研究，为完善该毒株的质量控制提供数据支持。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 ctn-1V 糖蛋白 致病力 生物信息学分析

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狂犬病毒CTN-1株在Vero细胞上的适应传代 被引量：2

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作者 王宏伟 沈飞 +6 位作者 李慧君 李华 李春英 于伟 钱浩 鲁宏 窦志勇 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第2期38-40,共3页

以我国狂犬病固定毒人二倍体细胞适应株 (CTN - 1)作Vero细胞适应传代研究。显示CTN - 1株能较好适应Vero细胞 ,经 5代培养病毒滴度可达 7 5logLD5 0 /ml,且在 5～ 2 0代以内均稳定在 7 0logLD5 0 /ml左右 。

关键词 狂犬病毒 ctn-1株 VERO细胞 狂犬病疫苗 适应传代

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中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组序列分析 被引量：1

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作者 卢学新 李艳荣 +5 位作者 于鹏程 陶晓燕 刘淑清 闫江泓 周蕾 朱武洋 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第2期113-120,共8页

目的对中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组序列进行分析。方法通过RT-PCR法获取CTN-1和PV-2061株主种子批的全基因组序列,与国内分离的全基因组序列进行比对,并对狂犬病病毒主要抗原进行比对分析。结果 CTN-1和PV-2061株具有较高... 目的对中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组序列进行分析。方法通过RT-PCR法获取CTN-1和PV-2061株主种子批的全基因组序列,与国内分离的全基因组序列进行比对,并对狂犬病病毒主要抗原进行比对分析。结果 CTN-1和PV-2061株具有较高的同源性,CTN-1株与我国街毒株的亲缘关系更近,符合作为疫苗候选株的要求。PV-2061株在氨基酸序列中具有独特的突变,推测与中和抗体的产生相关。结论对中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组进行了多重比对,为研制安全高效的狂犬病疫苗奠定了理论基础。 展开更多

关键词 狂犬病疫苗 ctn-1株 PV-2061株 全基因组 序列比对 位点突变

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狂犬病毒CTN-1v株毒种的不良反应与免疫学效果研究 被引量：1

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作者 钱浩 于伟 +3 位作者 刘芸 窦志勇 杜晓兰 王强 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期946-947,共2页

目的　观察CTN - 1v株毒种的不良反应及免疫学效果。方法　选择 2 0例健康者接种应用CTN - 1v株毒种制备的狂犬病疫苗 ,观察接种者的不良反应进行中和抗体测定。结果　接种者的不良反应率为 35 % (7/ 2 0 ) ,中和抗体阳转率为 10 0 % ,... 目的　观察CTN - 1v株毒种的不良反应及免疫学效果。方法　选择 2 0例健康者接种应用CTN - 1v株毒种制备的狂犬病疫苗 ,观察接种者的不良反应进行中和抗体测定。结果　接种者的不良反应率为 35 % (7/ 2 0 ) ,中和抗体阳转率为 10 0 % ,免疫后 14天中和抗体水平平均为 13 0 8IU/ml(5 83～ 2 2 16IU/m1)。结论　CTN - 1v株毒种 ,不良反应轻微而且免疫原性良好 。 展开更多

关键词 狂犬病毒 ctn-1v株毒种 不良反应 免疫学效果 狂犬疫苗

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