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CTLA-4/Ig在CHO/DG44细胞中的高效表达
1
作者 许松梅 郑立恒 刘全胜 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期370-373,共4页
目的研究CTLA-4/Ig融合蛋白在CHO真核表达系统中的表达,并纯化所表达的CTLA-4/Ig融合蛋白,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法将线性化的pMM-CTLA-4-IgG4/WG和pMMGR转染CHO/DG44细胞,对阳性克隆进行无血清悬浮培养,Western blot检测... 目的研究CTLA-4/Ig融合蛋白在CHO真核表达系统中的表达,并纯化所表达的CTLA-4/Ig融合蛋白,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法将线性化的pMM-CTLA-4-IgG4/WG和pMMGR转染CHO/DG44细胞,对阳性克隆进行无血清悬浮培养,Western blot检测细胞培养液中CTLA-4/Ig融合蛋白的表达,筛选出高效稳定表达CTLA-4/Ig融合蛋白的CHO细胞;Protein A亲和层析纯化所表达的CTLA-4/Ig融合蛋白;SDS-PAGE电泳、Western印迹等对纯化的CTLA-4/Ig融合蛋白的相对分子质量、纯度、抗原特异性进行生物学鉴定。结果筛选出了能高效稳定表达CTLA-4/Ig融合蛋白的CHO细胞;纯化后的CTLA-4/Ig融合蛋白在SDS-PAGE电泳后出现一条与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带;该蛋白能与羊抗人IgG-HRP抗体特异结合。结论获得了能够高效稳定表达具有生物学活性的CTLA-4/Ig融合蛋白的CHO细胞。 展开更多
关键词 ctla-4/ig融合蛋白 pMMGR 转染 共扩增 地塞米松 诱导 高表达 亲和层析 纯化
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CTLA-4 Ig融合蛋白抗小鼠同种心脏移植排斥的效果及其机制 被引量：1
2
作者 丁国善 王全兴 +5 位作者 张明 孙文佶 刘玉杉 陈国友 付志仁 曹雪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期554-557,共4页
目的 :研究细胞毒性 T淋巴细胞相关抗原 4(CTL A - 4,CD15 2 ) Ig融合蛋白 (CTL A- 4Ig)抗小鼠同种心脏移植排斥的效果及其体内作用的机制。 方法 :以 C5 7BL / 6小鼠为供者 ,BAL B/ c小鼠为受者行异位心脏移植术 ,分别腹腔注射 CTL A-4... 目的 :研究细胞毒性 T淋巴细胞相关抗原 4(CTL A - 4,CD15 2 ) Ig融合蛋白 (CTL A- 4Ig)抗小鼠同种心脏移植排斥的效果及其体内作用的机制。 方法 :以 C5 7BL / 6小鼠为供者 ,BAL B/ c小鼠为受者行异位心脏移植术 ,分别腹腔注射 CTL A-4Ig[10 0μg/ d,共 15次 ]、γ-球蛋白对照抗体及 PBS,观察移植供心的存活时间 ;研究腹腔注射 CTL A- 4Ig后受体小鼠 T细胞对同种抗原反应性的变化以及对 T细胞亚群分化的影响。结果 :同种心脏移植的小鼠腹腔注射 CTL A- 4Ig后 ,移植心脏存活时间较对照组显著延长 ,40 %移植心脏的存活时间长达 2个月以上。 CTL A- 4Ig治疗后诱导受体小鼠 T细胞对同种抗原低反应性 ,但对第三者抗原的反应性无影响。受体血清中的 Th1来源的 IL - 2、IFN-γ均明显低于 PBS对照组 ,而 Th2来源的 IL - 10的水平则明显高于对照组 ,IL- 4未见明显的改变。结论 :CTL A- 4Ig治疗后可通过诱导受体小鼠 T细胞对同种抗原低反应性以及受体 T细胞由 Th1向 Th2分化 ,诱导供者特异性免疫耐受的产生 。 展开更多
关键词 ctla-4ig融合蛋白 异位心脏移植 移植物排斥 小鼠
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CTLA4Ig融合蛋白在CHO细胞中的表达 被引量：1
3
作者 陈兴 于继云 +8 位作者 沈倍奋 黎燕 王嘉玺 程绍辉 贺永怀 曲梅花 胡美茹 孙瑛勋 于鸣 《生物技术通讯》 CAS 2004年第4期357-358,共2页
CTLA4Ig是人CTLA4胞外区与人免疫球蛋白铰链区、CH2区、CH3区组成的融合蛋白,可以与B7结合,通过阻断B7与CD28的结合,从而阻断B7介导的T细胞活化必需的共刺激信号,可作为免疫抑制剂用于器官移植。将CTLA4Ig融合分子克隆到真核表达载体pCI... CTLA4Ig是人CTLA4胞外区与人免疫球蛋白铰链区、CH2区、CH3区组成的融合蛋白,可以与B7结合,通过阻断B7与CD28的结合,从而阻断B7介导的T细胞活化必需的共刺激信号,可作为免疫抑制剂用于器官移植。将CTLA4Ig融合分子克隆到真核表达载体pCI-dhfr,并用脂质体方法转染到COS7和CHO-dhfr-细胞中,用氨甲喋呤筛选转染的CHO-dhfr-细胞。用RT-PCR、ELISA、细胞免疫荧光染色和Western-blot鉴定重组蛋白的表达。采用A蛋白纯化重组蛋白。 展开更多
关键词 ctla4ig融合蛋白 CHO细胞 表达 免疫抑制剂
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阻断糖尿病小鼠共刺激分子延长异种胰岛移植细胞功能
4
作者 尹朝晖 张敬成 权燕 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2009年第6期464-466,469,共4页
目的阻断多种共刺激分子而诱导免疫耐受,以延长移植到糖尿病小鼠体内的猪胰岛细胞的功能。方法将猪胰岛细胞移植于链脲佐菌素诱导的雄性C57BL/6糖尿病小鼠左肾被膜下,应用CTLA-4Ig融合蛋白、抗LFA-1抗体和抗CD40L抗体阻断多种共刺激分子... 目的阻断多种共刺激分子而诱导免疫耐受,以延长移植到糖尿病小鼠体内的猪胰岛细胞的功能。方法将猪胰岛细胞移植于链脲佐菌素诱导的雄性C57BL/6糖尿病小鼠左肾被膜下,应用CTLA-4Ig融合蛋白、抗LFA-1抗体和抗CD40L抗体阻断多种共刺激分子,观察移植效果及移植物存活时间。结果猪胰岛细胞移植后可降低糖尿病小鼠血糖;与对照组相比,实验组胰岛细胞存活时间明显延长。结论应用CTLA-4Ig融合蛋白、抗LFA-1抗体和抗CD40L抗体可延长异种移植胰岛细胞存活时间。 展开更多
关键词 胰岛移植 ctla-4ig融合蛋白 抗LFA-1抗体 抗CD40L抗体
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