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CTB-FimA融合蛋白原核表达纯化及其免疫效果 被引量:1
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作者 梁梦歌 李智涛 +3 位作者 韩海芳 王烁 陈义祥 高社干 《生物技术》 CAS 2024年第1期12-19,共8页
[目的]构建牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌毛蛋白(FimA)与霍乱毒素B亚基(CTB)重组质粒pET-32a/CTB-FimA,表达纯化CTB-FimA融合蛋白并对其黏膜免疫效果进行研究。[方法]根据GenBank查找FimA基因和CTB基因,利用(Gly4Ser)... [目的]构建牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌毛蛋白(FimA)与霍乱毒素B亚基(CTB)重组质粒pET-32a/CTB-FimA,表达纯化CTB-FimA融合蛋白并对其黏膜免疫效果进行研究。[方法]根据GenBank查找FimA基因和CTB基因,利用(Gly4Ser)3连接肽序列构建pET-32a/CTB-FimA原核表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),确定IPTG诱导浓度及温度,SDS-PAGE分析目的蛋白的可溶性;采用亲和层析和凝胶过滤层析纯化目的蛋白CTB-FimA;用纯化的目的蛋白作为免疫原鼻腔滴注免疫BALB/c小鼠观察其黏膜免疫效果。[结果]经双酶切和测序鉴定pET-32a/CTB-FimA重组表达质粒构建成功;IPTG最适诱导浓度为0.5 mmol/L,最适诱导温度为23℃,重组蛋白CTB-FimA主要以可溶形式表达;Expasy软件ProtParam工具预测重组蛋白分子量约为72.08 kDa,亲水性总平均值为-0.313;每升发酵液表达CTB-FimA蛋白约100 mg;免疫BALB/c小鼠产生sIgA抗体效价显著高于对照组。[结论]成功构建pET-32a/CTB-FimA重组蛋白表达质粒,获得可溶性CTB-FimA重组蛋白,鼻腔滴注免疫BALB/c小鼠能够产生高效价的sIgA抗体,为防治口腔牙龈卟啉单胞菌感染疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 ctb-fima组蛋白 诱导表达 亲和层析 凝胶过滤层析 鼻腔黏膜免疫
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