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敲除PaLoc毒力岛的无毒性艰难梭菌菌株的构建 被引量：3
1
作者 饶凤琴 程玉梅 +4 位作者 吴昌学 王义 崔古贞 齐晓岚 洪伟 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第10期1128-1133,共6页
目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLo... 目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLoc敲除突变株,测序验证设计位点是否发生等位双交换。结果:PCR结果显示,获得的16株转化子中有8株为敲除PaLoc突变株,阳性率为50%;测序结果显示,获得的8株敲除PaLoc突变株均在设计位点发生了等位双交换。结论:成功构建艰难梭菌毒性毒力岛敲除PaLoc突变株。 展开更多
关键词 艰难梭菌 crispr-cpf1系统 PaLoc毒力岛 基因敲除 活菌疫苗 毒性基因 梭菌感染 载体 质粒
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利用RGR核酶结构拓展家蚕CRISPR基因组编辑系统的应用研究
2
作者 张启超 宋红生 +5 位作者 曾保胜 陈树清 许军 李芝倩 张忠杰 陈旭 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期226-232,共7页
针对目前家蚕基因组编辑平台在基因组特定位点的靶点选择、多靶点同时编辑等方面的技术瓶颈,利用家蚕卵巢培养细胞系（Bm N）验证含有双核酶结构的RGR（Ribozyme-gRNA-Ribozyme）在CRISPR/Cas9基因组编辑系统中的应用效果,用以拓展现有C... 针对目前家蚕基因组编辑平台在基因组特定位点的靶点选择、多靶点同时编辑等方面的技术瓶颈,利用家蚕卵巢培养细胞系（Bm N）验证含有双核酶结构的RGR（Ribozyme-gRNA-Ribozyme）在CRISPR/Cas9基因组编辑系统中的应用效果,用以拓展现有CRISPR/Cas9系统的靶点范围。研究结果显示,采用Cas9系统和Cpf1系统,RGR结构在Bm N细胞中具有良好的定点编辑效果,可成功实现对内源、外源靶基因序列的剪切,且对内外源基因具有高效编辑作用,表明RGR结构可应用于家蚕CRISPR/Cas9和CRISPR/Cpf1基因组编辑系统。利用RGR结构的自剪切功能不仅可以拓展家蚕基因组靶基因的范围,还为进一步实现多靶点编辑打下了基础。 展开更多
关键词 crispr/Cas9系统 crispr/cpf1系统 RGR核酶结构 家蚕基因组编辑 家蚕卵巢培养细胞
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基于CRISPR/Cpf1系统下的诱导型多基因激活体系的建立
3
作者 黄秋月 李中瀚 殷旖珂 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期160-164,共5页
为开发高效率的内源多基因激活工具,利用CRISPR/Cpf1系统能够促使pre-crRNA中多个crRNA自我剪切和释放的特性,将As/Fn/LbCpf1的核酸酶区域定点突变形成dCpf1,并在C端和N端分别引入了VPR三元转录激活域和不稳定结构域(DD-domain)、四环... 为开发高效率的内源多基因激活工具,利用CRISPR/Cpf1系统能够促使pre-crRNA中多个crRNA自我剪切和释放的特性,将As/Fn/LbCpf1的核酸酶区域定点突变形成dCpf1,并在C端和N端分别引入了VPR三元转录激活域和不稳定结构域(DD-domain)、四环素控制的操纵子,构建了TRE3G-DD-dCpf1-VPR激活系统.结果显示,Oct4基因的转录水平提升高达104倍,且Myod1、Oct4基因的转录水平分别在Dox和TMP单药的控制下,能够实现不同程度的转录水平的提升,在加双药的条件下Myod1、Oct4基因可分别提高80、120多倍.证明该系统能够通过靶向DNA快捷、高效的进行诱导内源性多基因激活. 展开更多
关键词 crispr/cpf1系统 诱导性 多基因激活
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