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CRISPR-Cas系统与细菌和噬菌体的共进化 被引量:33
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作者 李铁民 杜波 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期213-218,共6页
细菌在适应噬菌体攻击的过程中,进化了多种防御系统,噬菌体在细菌的选择压力下,也在不断进化反防御策略,双方的这种进化关系与发生机制一直尚不完全清楚。近年在细菌和古细菌中发现一种新的免疫防御系统,即CRISPR-Cas(clustered regular... 细菌在适应噬菌体攻击的过程中,进化了多种防御系统,噬菌体在细菌的选择压力下,也在不断进化反防御策略,双方的这种进化关系与发生机制一直尚不完全清楚。近年在细菌和古细菌中发现一种新的免疫防御系统,即CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated system)系统。在对其功能和作用机制深入研究的同时,也不断地揭示了细菌和噬菌体之间的共进化关系。为此,文章在介绍原核细胞中CRISPR-Cas系统介导的免疫机制基础上,重点综述了CRISPR系统在细菌和噬菌体进化中的作用。 展开更多
关键词 crispr crispr-cas系统 噬菌体 共进化 免疫防御
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CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的研究进展 被引量:27
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作者 郑小梅 张晓立 +2 位作者 于建东 郑平 孙际宾 《生物技术进展》 2015年第1期1-9,I0003,F0003,共11页
CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated proteins)系统为细菌与古生菌中抵御外源病毒或质粒DNA入侵的获得性免疫系统。该系统在crRNA的指导下,使核酸酶Cas识别并降解外源DNA。其中,... CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated proteins)系统为细菌与古生菌中抵御外源病毒或质粒DNA入侵的获得性免疫系统。该系统在crRNA的指导下,使核酸酶Cas识别并降解外源DNA。其中,Ⅱ型CRISPR-Cas系统最为简单,仅包括一个核酸酶Cas9与tracrRNA:crRNA二聚体便可完成其生物功能。基于CRISPR-Cas9的基因组编辑技术的核心为将tracrRNA:crRNA设计为引导RNA,在引导RNA的指导下Cas9定位于特定DNA序列上,进行DNA双链切割,实现基因组的定向编辑。CRISPR-Cas9系统以设计操纵简便、编辑高效与通用性广等优势成为新一代基因组编辑技术,为基因组定向改造调控与应用等带来突破性革命。从CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的发展与应用等方面综述其最新研究进展,并着重介绍该技术的关键影响因素,为相关研究者提供参考。 展开更多
关键词 crispr-cas系统 cas9 基因组编辑技术
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CRISPR/Cas9系统在植物基因组定点编辑中的研究进展 被引量:16
3
作者 解莉楠 宋凤艳 张旸 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1669-1677,共9页
当外源DNA通过转基因技术导入植物细胞后,会以同源重组或非同源重组两种不同的方式整合到基因组中,进而获得相应的目标性状。外源DNA与受体细胞序列相同或相近的位点发生重新组合,从而整合到受体细胞的染色体上称之为同源重组;当发生了... 当外源DNA通过转基因技术导入植物细胞后,会以同源重组或非同源重组两种不同的方式整合到基因组中,进而获得相应的目标性状。外源DNA与受体细胞序列相同或相近的位点发生重新组合,从而整合到受体细胞的染色体上称之为同源重组;当发生了DNA双链断裂的细胞为了避免DNA或染色体断裂而造成DNA降解或对生命力的影响,而强行将2个DNA断端彼此连接在一起时则为非同源重组。发生非同源重组的细胞其基因组常出现核苷酸片段的插入和/或缺失以及其他突变等多种情况,使得研究者无法得到精确控制的突变结果;而发生同源重组的细胞基因组序列通常不变,通过加入同源重组的供体DNA,可以实现对基因组的精确修饰和改造。由于在植物中产生自发同源重组的概率很低,对植物基因组进行精确修饰和改造非常困难,位点特异性核酸酶的出现和应用,大大提升了同源重组的效率,使基因组编辑变得更加高效和精确,从而使得对包括植物在内的任何物种进行基因组编辑都将成为可能。锌指核酸酶(ZFN)和TALE核酸酶(TALENs)是能够使DNA的靶位点产生DNA双链断裂进而实现基因组定点编辑的常用系统,但在具体应用中发现这两种系统存在着许多缺陷和不足,如脱靶效应、与基因组进行特异结合与染色体位置及邻近序列有关等,另外技术难度大、构建组装时间长也限制了其应用。CRISPR/Cas系统广泛存在于细菌及古生菌中,是机体长期进化形成的RNA指导的降解入侵病毒或噬菌体DNA的适应性免疫系统。Ⅱ型CRISPR/Cas系统经过密码子优化等改造后已成为继锌指核酸酶ZFNs和TALENs后的新型高效定点编辑的新技术,具有突变效率高、制作简单、易操作及成本低的特点。目前,该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌的基因组精确编辑,编辑的类型包括基因的定点插入、小片段的缺� 展开更多
关键词 crispr/cas系统 基因组编辑 植物基因工程
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碳青霉烯类抗生素超级耐药细菌检测及抗菌策略研究进展 被引量:16
4
作者 周宏 时黎明 +2 位作者 李桂霞 张志军 史卫峰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期432-435,439,共5页
抗生素的滥用导致越来越多"超级细菌"的出现,对几乎所有已知抗生素耐药,严重危害人类健康。碳青霉烯类抗生素是治疗革兰阴性杆菌感染的最强效β-内酰胺类药物,但近年来出现的耐碳青霉烯类肠杆菌可将其水解,对抗感染治疗构成... 抗生素的滥用导致越来越多"超级细菌"的出现,对几乎所有已知抗生素耐药,严重危害人类健康。碳青霉烯类抗生素是治疗革兰阴性杆菌感染的最强效β-内酰胺类药物,但近年来出现的耐碳青霉烯类肠杆菌可将其水解,对抗感染治疗构成极大威胁。由于传统抗生素类治疗发展缓慢且疗效有限,新型抗菌药物和疗法的研究开发成为对抗超级耐药菌感染的重要发展方向。本文总结了超级细菌的新型快速检测技术和抗菌策略等方面的研究进展,为实验室研究和临床治疗提供参考。 展开更多
关键词 超级细菌 耐碳青霉烯类肠杆菌 抗菌策略 crispr/cas系统 综述
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基于CRISPR-Cas系统的基因组定点修饰新技术 被引量:13
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作者 王梦瑶 杨亦农 边红武 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期426-433,共8页
CRISPR(clustered regulatory interspersed short palindromic repeat)序列源于原核生物的一种获得性免疫系统,协同Cas(CRISPR-associated)蛋白家族参与抵抗噬菌体或其它病毒的二次感染,广泛存在于细菌(60%)和古菌(90%)中.病菌和宿主... CRISPR(clustered regulatory interspersed short palindromic repeat)序列源于原核生物的一种获得性免疫系统,协同Cas(CRISPR-associated)蛋白家族参与抵抗噬菌体或其它病毒的二次感染,广泛存在于细菌(60%)和古菌(90%)中.病菌和宿主的共同进化导致了CRISPR-Cas系统具有多样性,可分为3大类(Ⅰ-Ⅲ),又分为10亚类.在Ⅱ型CRISPR-Cas系统基础上建立了RNA介导的CRISPR-Cas系统来修饰(删除、添加、激活、抑制)靶细胞中特定的基因序列,现已在人类细胞、小鼠、斑马鱼、酵母、细菌、果蝇、线虫、拟南芥中得以应用.本文主要介绍了Ⅱ型CRISPR-Cas系统的结构特点、作用机理及作为新型基因组定点修饰技术的研究进展,分析该技术优势,并展望CRISPRCas系统的应用前景. 展开更多
关键词 crispr-cas系统 获得性免疫 基因组编辑
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血流感染肺炎克雷伯菌毒力基因分布及与CRISPR-CAS系统相关性研究 被引量:11
6
作者 宋国滨 王刚 +1 位作者 黄颖 徐元宏 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第3期427-431,共5页
目的分析该院血流感染阳性肺炎克雷伯菌的常见荚膜血清型和毒力基因分布特征,探讨毒力基因与成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关序列(CRISPR-CAS)系统的相关性。方法收集Bac T/ALERT 3D全自动培养仪报告阳性的血培养瓶并经鉴定为... 目的分析该院血流感染阳性肺炎克雷伯菌的常见荚膜血清型和毒力基因分布特征,探讨毒力基因与成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关序列(CRISPR-CAS)系统的相关性。方法收集Bac T/ALERT 3D全自动培养仪报告阳性的血培养瓶并经鉴定为肺炎克雷伯菌61株,运用纸片扩散法和Vitek-compact2仪器法检测菌株对临床常用抗生素的敏感性,用拉丝实验筛选高黏液型肺炎克雷伯菌,聚合酶链式反应(PCR)检测6种常见荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)、7种毒力相关基因(rmpA、aerobactin、alls、Kfu、wcaG、magA、fimH)及3种CRISPR-CAS系统基因(CRISPR-1、CRISPR-2、CAS1)。结果荚膜血清型以K1、K2型为主,检出率分别是19.7%、13.1%。K5、K20、K57各检出1例,未检出K54型。毒力基因rmpA、aerobactin、alls、Kfu、wcaG、magA、fimH检出率分别是32.8%、23.0%、9.8%、31.1%、19.7%、19.7%、98.4%。高黏液表型筛选出14株。CRISPR-CAS系统阳性检出11株,检出率为18%,与CRISPR-CAS系统阴性菌株相比,其毒力基因携带率高,经χ~2检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血流感染肺炎克雷伯菌荚膜血清型以K1、K2为主,毒力基因主要存在于表型为高黏液型的菌株,CRISPR-CAS系统阳性菌株毒力基因携带率高。 展开更多
关键词 高毒力肺炎克雷伯菌 crispr-cas系统 毒力基因
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CRISPR-Cas系统在植物基因组编辑中的研究进展 被引量:10
7
作者 王春 王克剑 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1712-1722,共11页
基因组定点编辑技术是研究基因功能和生物体改造的重要工具。CRISPR-Cas(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated proteins)系统是近年来发展的一种新型基因组编辑技术,该技术通过一段向导RN... 基因组定点编辑技术是研究基因功能和生物体改造的重要工具。CRISPR-Cas(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated proteins)系统是近年来发展的一种新型基因组编辑技术,该技术通过一段向导RNA和配套的核酸酶就可对特定的基因组序列进行定点编辑,具有简单高效、应用广泛的特点,受到了生物学家的广泛关注。本文着重介绍CRISPR-Cas系统在植物中的研究进展,包括CRISPR-Cas9系统在植物中的应用与完善、扩大基因组编辑范围的研究、Cas9切口酶和失活酶的拓展、特异性单碱基突变编辑系统的研究、无外源DNA污染的植物基因编辑技术的发展以及基因组编辑技术在作物育种上的应用等方面。同时也提出了还需解决的问题,并展望了基因组编辑系统在作物育种中的应用前景,为开展这一领域的研究工作提供参考。 展开更多
关键词 crispr-cas系统 基因组编辑 植物基因组 作物遗传育种
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针对第2大类CRISPR-Cas系统的acr基因的发现及Acr蛋白多样化的抑制机制
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作者 邓谢淑婷 王久宇 王艳丽 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2024年第3期409-427,共19页
CRISPR-Cas系统是细菌和古细菌来源的RNA介导的适应性免疫系统,利用RNA介导的核酸酶活性抵抗以噬菌体为代表的外源核酸的入侵.为逃避这种来源于宿主的免疫反应,噬菌体进化出了较小的anti-CRISPR蛋白(Acr).Acrs采用不同的抑制策略,将Cas... CRISPR-Cas系统是细菌和古细菌来源的RNA介导的适应性免疫系统,利用RNA介导的核酸酶活性抵抗以噬菌体为代表的外源核酸的入侵.为逃避这种来源于宿主的免疫反应,噬菌体进化出了较小的anti-CRISPR蛋白(Acr).Acrs采用不同的抑制策略,将Cas效应蛋白限制在不同的阶段,从而使其失活.随着Cas蛋白在生物技术领域和临床上的广泛应用,Acr已被开发为有用的调控工具.对Acr的研究不仅可以加深人们对Cas蛋白别构调控的理解,而且可以为开发新型的基于Acr的调控工具打下基础.利用实验和生物信息学的手段,越来越多的Acr被发现,其中第2大类CRISPR-Cas系统目前有大约50种.本综述聚焦于第2大类CRISPR-Cas系统的Acr,从基因发现、抑制机制和技术应用三个方面对其进行总结,并对未来的研究方向做出展望. 展开更多
关键词 crispr-cas系统 cas9 cas12a anti-crispr
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利用CRISPR/Cas系统快速高效构建血友病乙小鼠模型 被引量:9
9
作者 汪启翰 怀聪 +4 位作者 孙瑞林 庄华 陈红岩 费俭 卢大儒 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1143-1148,共6页
血友病乙是由凝血因子Ⅸ(FactorⅨ,FⅨ)缺乏或功能缺陷导致的出血性疾病,为伴X染色体隐性遗传病。小鼠模型对于血友病乙的研究具有十分重要的意义,而基因组编辑技术又为小鼠模型的构建提供了一种快捷而且高效的途径。本文利用CRISPR/Ca... 血友病乙是由凝血因子Ⅸ(FactorⅨ,FⅨ)缺乏或功能缺陷导致的出血性疾病,为伴X染色体隐性遗传病。小鼠模型对于血友病乙的研究具有十分重要的意义,而基因组编辑技术又为小鼠模型的构建提供了一种快捷而且高效的途径。本文利用CRISPR/Cas系统,在小鼠FⅨ基因第8外显子上选择靶位点,将Cas9 m RNA和带有靶位点的sg RNA显微注射到C57BL/6品系小鼠的受精卵中,获得基因修饰的小鼠。利用高分辨率熔解曲线分析(High resolution melting,HRM)技术进行精确基因分型,并通过测序验证,在60只小鼠中,总共有51只小鼠的靶位点发生了突变,突变率高达85%,其中雄鼠的突变率为79.5%,雌鼠的突变率为95.2%;未检测到非目标位置的基因编辑脱靶。凝血活性实验显示,突变小鼠的FⅨ活性值(FactorⅨcoagulant activity,FⅨ:C)是非突变小鼠的6.82%,大大低于非突变小鼠,表明突变小鼠的凝血活性缺失。本研究表明,利用CRISPR/Cas系统成功构建了人类血友病乙遗传病小鼠模型。 展开更多
关键词 血友病乙 crispr/cas系统 基因组编辑 小鼠模型
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CRISPR-Cas系统在病原核酸检测中的研究进展
10
作者 杜瑶 高宏丹 +4 位作者 刘家坤 刘孝荣 邢志浩 张涛 马东礼 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第1期202-216,共15页
CRISPR-Cas系统作为原核生物获得性免疫系统,由簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)构成,因其识别和切割特定DNA或RNA序... CRISPR-Cas系统作为原核生物获得性免疫系统,由簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)构成,因其识别和切割特定DNA或RNA序列,而成为分子诊断领域研究的热点。研究人员利用Cas蛋白(Cas12、Cas13、Cas14、Cas3等)结合信号放大和转化技术(荧光法、电位法、比色法、侧向流动技术等),开发了许多高灵敏度、高特异性、低成本的诊断平台,为病原核酸检测提供了新途径。本文介绍了CRISPR-Cas系统的生物学机制及分类,总结现有的基于Cas蛋白反式切割活性开发的病原核酸检测技术,描述其特点、功能和应用场景,并对该系统的未来应用前景进行展望,期望CRISPR-Cas系统成为包括核酸检测在内的多靶标的理想检测平台。 展开更多
关键词 crispr-cas系统 cas12和cas13 病原体 核酸检测 生物传感
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基因组编辑技术——CRISPR/Cas系统 被引量:8
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作者 陈勇龙 黄华荣 +4 位作者 唐平平 羊雪芹 李斐雪 许杰 张遵义 《杭州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2015年第1期60-65,共6页
基因定点编辑技术包括基于胚胎干细胞及同源基因片段重组的基因打靶技术、锌指结构(ZFN)、类转录激活因子效应物(TALEN)以及CRISPR/Cas系统.CRISPR/Cas系统具有操作简单、突变率高、成本低,同时可针对多个基因等优点;该技术可进行定点修... 基因定点编辑技术包括基于胚胎干细胞及同源基因片段重组的基因打靶技术、锌指结构(ZFN)、类转录激活因子效应物(TALEN)以及CRISPR/Cas系统.CRISPR/Cas系统具有操作简单、突变率高、成本低,同时可针对多个基因等优点;该技术可进行定点修饰,如敲除、插入、替换等.目前CRISPR/Cas系统已成功应用到小鼠、人类细胞、线虫、果蝇、斑马鱼、拟南芥、水稻和猴等.文章将对基因修饰技术发展脉络做统一梳理,并将系统阐述CRISPR/Cas系统的原理、应用以及该技术的优缺点. 展开更多
关键词 基因修饰 crispr/cas系统 基因编辑
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CRISPR-Cas12a在病原快速检测中的应用 被引量:6
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作者 周旭 王思文 王秀荣 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1031-1037,共7页
近年来,CRISPR-Cas系统病原核酸检测技术凭借其靶向精准、灵敏度高以及多重检测等特点,在即时检测(Point of Care testing,POCT)领域受到广泛关注。多种Cas蛋白具有顺式基因编辑功能和非特异性反式切割活性,基于这种特性成功实现了病原... 近年来,CRISPR-Cas系统病原核酸检测技术凭借其靶向精准、灵敏度高以及多重检测等特点,在即时检测(Point of Care testing,POCT)领域受到广泛关注。多种Cas蛋白具有顺式基因编辑功能和非特异性反式切割活性,基于这种特性成功实现了病原核酸检测,极大改善了POCT产品灵敏度低的问题。其中,以Cas12为靶点并反式切割单链DNA探针的系统既简单又高效。因此,就CRISPR-Cas12a的历史、分类、检测原理和在核酸检测中的应用进展、开发检测试剂的困难等方面做一综述。 展开更多
关键词 crispr-cas系统 cas12a 病原核酸检测
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CRISPR/Cas系统在病原体核酸检测中的应用进展 被引量:4
13
作者 李梦茹 秦志强 +1 位作者 殷堃 郑彬 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期98-103,110,共7页
快速、灵敏、特异的检测方法对于传染病防控至关重要。聚合酶链式反应、等温扩增等体外核酸扩增技术已广泛应用于病原体检测。近年来,基于规则成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas)系统的核酸检测方法显示出快速、高灵敏... 快速、灵敏、特异的检测方法对于传染病防控至关重要。聚合酶链式反应、等温扩增等体外核酸扩增技术已广泛应用于病原体检测。近年来,基于规则成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas)系统的核酸检测方法显示出快速、高灵敏度、高特异性与便携性等优点。本文对CRISPR/Cas系统类型、原理及其在病原体检测中的应用进展进行综述,并对其应用前景进行展望。 展开更多
关键词 crispr/cas系统 核酸检测 病毒 细菌 寄生虫
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临床分离志贺菌中CRISPR/Cas系统的分布及其与毒力基因的关系 被引量:8
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作者 郭向娇 王颖芳 +4 位作者 段广才 王琳琳 王鹏飞 杨海燕 郗园林 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期543-549,共7页
【目的】了解临床分离志贺菌中CRISPR/Cas系统的分布特征并分析其与毒力基因的关系。【方法】以聚合酶链式反应(PCR)方法,采用10对引物分别对57株临床分离志贺菌中CRISPR1、cas2-cas1、cas6e-cas5、cas7、cse2、cse1-cas3基因和毒力基因... 【目的】了解临床分离志贺菌中CRISPR/Cas系统的分布特征并分析其与毒力基因的关系。【方法】以聚合酶链式反应(PCR)方法,采用10对引物分别对57株临床分离志贺菌中CRISPR1、cas2-cas1、cas6e-cas5、cas7、cse2、cse1-cas3基因和毒力基因ipaH、ial、ipaBCD、virA进行检测。对CRISPR1的PCR结果进行测序,并用CRISPRfinder在线软件对CRISPR1基因座进行分析。通过卡方检验初步分析CRISPR/Cas系统与毒力基因的关系。【结果】测序结果显示,CRISPR1基因座中间隔序列数目较少且在不同菌株间一致性较高;57株志贺菌中,84.2%(48/57)的志贺菌中可检测到CRISPR/Cas系统,其中68.8%(33/48)的志贺菌中cas6e-cas5基因或(和)cse2基因中发现插入序列;毒力基因ipaH、ial、virA、ipaBCD的检出率依次为100%、100%、98.2%和87.7%;毒力基因ipaBCD的阳性率与活性CRISPR/Cas系统的分布无关(P>0.05)。【结论】CRISPR/Cas系统广泛存在于临床分离志贺菌中;部分cas基因中有插入序列;并未发现志贺菌中活性CRISPR/Cas系统与毒力基因的分布有关。 展开更多
关键词 志贺菌 crispr/cas系统 聚合酶链式反应 插入序列 毒力基因
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CRISPR/Cas基因编辑系统在原核微生物细胞工厂构建中的开发与应用 被引量:6
15
作者 孟娇 刘丁玉 +2 位作者 黄灿 韩北忠 陈晶瑜 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2730-2742,共13页
随着能源和环境问题的日益突出,化学品以及燃料的合成方式正逐渐由传统的化学法合成转变为以细菌为基础的生物炼制过程,其中最关键问题是需要开发出合适的基因工程工具用于构建相应的产品生产菌株。成簇的规律间隔短回文重复序列(Cluste... 随着能源和环境问题的日益突出,化学品以及燃料的合成方式正逐渐由传统的化学法合成转变为以细菌为基础的生物炼制过程,其中最关键问题是需要开发出合适的基因工程工具用于构建相应的产品生产菌株。成簇的规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)系统是一种存在于细菌和古细菌中的免疫系统,能够用于抵御病毒和外源质粒的入侵,近年来被开发成为一种高效、便捷、精确的基因编辑工具,显示出巨大的应用潜力。本文立足于CRISPR/Cas系统的原理与最新分类,结合实例综述了CRISPR/Cas基因编辑系统在原核微生物细胞工厂构建中的建立与优化策略,以及主要的应用方向,并探讨该系统所面临的主要问题并提出了一些可行的解决方案。 展开更多
关键词 crispr crispr/cas系统 基因编辑 生物技术 代谢 分子生物学
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CRISPR基因编辑技术加速蔬菜作物遗传改良
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作者 任文静 司劲超 +6 位作者 陈立 杨丽梅 庄木 吕红豪 王勇 季家磊 张扬勇 《中国农学通报》 2024年第24期107-115,共9页
现代生物技术,特别是基于CRISPR/Cas系统的基因编辑技术,对作物遗传改良产生了深远影响。本文综合分析了CRISPR/Cas基因编辑系统的组成、机制,综述了基因编辑技术在蔬菜作物基因功能验证和作物遗传改良方面取得的突破性进展,及其在蔬菜... 现代生物技术,特别是基于CRISPR/Cas系统的基因编辑技术,对作物遗传改良产生了深远影响。本文综合分析了CRISPR/Cas基因编辑系统的组成、机制,综述了基因编辑技术在蔬菜作物基因功能验证和作物遗传改良方面取得的突破性进展,及其在蔬菜作物如番茄、西瓜、甘蓝、胡萝卜和黄瓜等中的应用。CRISPR/Cas基因编辑系统是目前应用最广泛的基因编辑系统,为了加深对CRISPR/Cas基因编辑系统的了解、促进其在蔬菜作物改良中的重要作用,本研究探讨了影响遗传转化效率的因素,提出了提高转化效率的策略,讨论了当前技术的局限性,如作物转化再生难度和基因型的依赖性。本文强调,筛选易于遗传转化的品种、开发高效的植物转化和再生系统,以及创造更高效、精确和多功能的基因编辑工具是未来研究的关键方向。 展开更多
关键词 现代育种技术 crispr/cas系统 crispr基因编辑 基因编辑效率 基因功能验证 作物遗传改良 蔬菜作物改良 遗传转化效率 生物技术
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靶向RNA的CRISPR-Cas系统研究进展 被引量:1
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作者 洪甜 罗庆华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1363-1373,共11页
CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas(CRISPR associated proteins)系统是细菌和古细菌抵抗噬菌体、质粒等外源遗传物质的一种适应性免疫系统,该系统利用一种特殊的RNA(CRISPR RNA,crRNA)指导的内... CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas(CRISPR associated proteins)系统是细菌和古细菌抵抗噬菌体、质粒等外源遗传物质的一种适应性免疫系统,该系统利用一种特殊的RNA(CRISPR RNA,crRNA)指导的内切酶来切割与crRNA相互补的外源遗传物质,从而阻碍外源核酸的侵染。根据效应复合物组成形式的不同,CRISPR-Cas系统分为1类(Ⅰ型、Ⅳ型和Ⅲ型)和2类(Ⅱ型、Ⅴ型和Ⅵ型)两大类。目前已发现多个CRISPR-Cas系统具有非常强的特异靶向RNA编辑能力,如Ⅵ型CRISPR-Cas13系统和Ⅲ型CRISPR-Cas7-11系统。随着研究的深入,相关系统在RNA编辑领域应用日渐广泛,使其成为基因编辑的有力工具。本文介绍了靶向RNA的CRISPR-Cas系统的组成、结构、分子机制以及其潜在应用,这为更好地研究该类系统的作用机制奠定基础,也为后期开发为稳定的基因编辑工具提供新的思路。 展开更多
关键词 crispr-cas系统 基因编辑 cas13 cas7-11
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CRISPR/Cas基因编辑系统研究进展 被引量:4
18
作者 韦涛 何滋林 +3 位作者 纪庆超 祁艺新 常雯雯 隋宏书 《生命的化学》 CAS CSCD 2019年第1期39-45,共7页
规律性成簇间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)的发现和工程技术对生命科学的发展带来巨大的推动作用。RNA引导的Cas(CRISPR-associated)酶已被用作操纵细胞、动物和植物基因组... 规律性成簇间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)的发现和工程技术对生命科学的发展带来巨大的推动作用。RNA引导的Cas(CRISPR-associated)酶已被用作操纵细胞、动物和植物基因组的工具。这加速了基础研究的步伐,并使其在临床和农业上的应用成为可能。CRISPR/Cas9对在实验系统中进行的功能基因组学的研究有重大影响。CRISPR/Cas9系统自发现以来,因其操作便捷、成本低、特异性高、可同时打靶任意数量基因等优点而被广泛应用。经过近几年研究发现,Cas9变异体(Cas12a、Cas13)有利于突破和克服CRISPR/Cas9应用中的一些限制,Cas12a极大地扩展了基因编辑靶位点的选择范围,同时其介导的多基因编辑具有明显的优势;Cas13等蛋白能特异性结合和编辑RNA,开启了转录组研究的新篇章。本文主要就CRISPR/Cas的研究背景以及Cas9、Cas12a和Cas13系统研究进展和应用进行综述,并对其应用前景和发展方向进行了展望。 展开更多
关键词 基因编辑 crispr/cas系统 cas9 cas12a cas13
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CRISPR/Cas系统介导的基因组定点编辑技术及其在农作物研究中的应用 被引量:6
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作者 涂万富 段真珍 +2 位作者 张志麒 何正权 姚伟 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1539-1545,共7页
通过序列特异性核酸酶(SSNs)对植物基因组进行定点编辑是一个基因功能验证和作物性状遗传改良的有效工具。近年来基于CRISPR/Cas系统的基因组编辑技术成为SSNs又一强有力的工具,该技术发展迅速并得到广泛应用,已经改变了作物生物技术研... 通过序列特异性核酸酶(SSNs)对植物基因组进行定点编辑是一个基因功能验证和作物性状遗传改良的有效工具。近年来基于CRISPR/Cas系统的基因组编辑技术成为SSNs又一强有力的工具,该技术发展迅速并得到广泛应用,已经改变了作物生物技术研究现状。该系统通过合成单一引导的RNA(sgRNA)来指导Cas9核酸酶去剪切靶标DNA序列,完成基因组的定点编辑。与以前的SSNs相比,CRISPR技术更加简单实用,而且花费相对更低。为了更好地利用该技术在作物中开展相关的研究,本综述中我们详细介绍了CRISPR/Cas系统的基本结构特征和分子作用机制,总结和探讨了该技术在农作物基因组研究中的应用,并对基因组编辑技术在农业基因工程上的应用进行了展望。 展开更多
关键词 crispr/cas系统 cas9蛋白 sgRNA 农作物
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CRISPR-Cas基因编辑系统升级:聚焦Cas蛋白和PAM 被引量:6
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作者 唐连超 谷峰 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期236-249,共14页
以CRISPR-Cas (clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR associated proteins)系统为代表的基因编辑技术的出现极大地促进了人类改造自然界物种的能力。在医疗、工业、农业等多个研究领域,基因编辑技术... 以CRISPR-Cas (clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR associated proteins)系统为代表的基因编辑技术的出现极大地促进了人类改造自然界物种的能力。在医疗、工业、农业等多个研究领域,基因编辑技术正在被广泛应用。Cas蛋白是CRISPR-Cas系统的功能蛋白,不同类型的Cas蛋白在其自身活性、识别位点、切割末端、RNA需求等方面具有不同的特性。PAM (protospacer adjacent motif)是靶位点附近的若干个碱基,对Cas蛋白识别靶序列至关重要,也是CRISPR-Cas系统发挥功效的关键特性之一。目前已有多种不同的PAM鉴定方法被报道。本文对Cas蛋白的寻找、Cas蛋白突变体筛选及PAM的确定方法(含PAM谱拓展)进行了综述,以期为新型基因编辑工具的发展和优化提供借鉴。 展开更多
关键词 基因编辑 crispr-cas系统 cas蛋白 PAM 定向进化
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