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靶向小鼠CREPT基因134位点的CRISPR/Cas9载体构建及效率检测
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作者 刘素丽 邹晓辉 +2 位作者 范柠粼 孙继超 武会娟 《生物技术》 CAS 2022年第4期403-408,420,共7页
[目的]构建靶向小鼠CREPT基因134位丝氨酸的CRISPR/Cas9载体并检测其编辑效率。[方法]利用在线网站设计sgRNAs并克隆入体外转录载体pUC57-sgRNA,桑格测序验证重组载体是否构建成功;以上述重组载体为模板体外转录获得的sgRNAs与商品化Cas... [目的]构建靶向小鼠CREPT基因134位丝氨酸的CRISPR/Cas9载体并检测其编辑效率。[方法]利用在线网站设计sgRNAs并克隆入体外转录载体pUC57-sgRNA,桑格测序验证重组载体是否构建成功;以上述重组载体为模板体外转录获得的sgRNAs与商品化Cas9蛋白和靶片段于37℃孵育30 min,随后产物进行琼脂糖凝胶电泳以检测sgRNAs编辑效率。[结果]设计了2条靶向小鼠CREPT基因134位丝氨酸的sgRNAs,并分别准确插入pUC57-sgRNA载体,插入序列无突变;2条sgRNAs均能够与Cas9蛋白正确结合从而介导Cas9蛋白对靶片段的切割,编辑效率分别为0.30、0.36。[结论]成功构建了靶向小鼠CREPT基因134位丝氨酸的CRISPR/Cas9基因编辑载体,且由此转录出的sgRNAs均具有编辑活性,可直接用于小鼠受精卵显微注射制备点突变小鼠模型。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 crept基因 基因编辑 点突变
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