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山羊CREBZF蛋白两种亚型过表达载体的构建及其对子宫内膜上皮细胞凋亡的影响 被引量：2
1
作者 牛宏宇 张瑞雪 +4 位作者 齐茂振 马玉洁 曲栓 靳亚平 林鹏飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期132-140,共9页
旨在构建编码山羊CREBZF蛋白2种亚型(长亚型SMILE和短亚型Zhangfei)基因的过表达载体,并初步探究CREBZF对山羊子宫内膜上皮细胞(gEECs)凋亡的影响。本研究针对编码山羊CREBZF不同亚型的基因CDS区分别设计引物,分段进行PCR扩增;运用无缝... 旨在构建编码山羊CREBZF蛋白2种亚型(长亚型SMILE和短亚型Zhangfei)基因的过表达载体,并初步探究CREBZF对山羊子宫内膜上皮细胞(gEECs)凋亡的影响。本研究针对编码山羊CREBZF不同亚型的基因CDS区分别设计引物,分段进行PCR扩增;运用无缝克隆技术将所获得各目的基因片段与线性化pcDNA3.1(+)载体连接,构建pcDNA3.1(+)-SMILE和pcDNA3.1(+)-Zhangfei重组过表达载体,通过双酶切和测序进行鉴定;转染过表达载体至gEECs,提取总RNA和蛋白,通过qRT-PCR和Western blot验证过表达效率;应用流式细胞术检测过表达SMILE和Zhangfei对gEECs凋亡率的影响。PCR、双酶切显示各目的条带大小正确;测序显示目的片段与NCBI基因库中山羊CREBZF的预测序列一致性为100%;转染过表达载体后,gEECs中SMILE与Zhangfei在转录和翻译水平的表达量均显著增加,并发现SMILE可能在翻译后自身被修饰;空载体组细胞凋亡率为8.45%;转染pcDNA3.1(+)-SMILE组凋亡率显著上升至12.41%(P<0.01);转染pcDNA3.1(+)-Zhangfei组凋亡率上升至9.83%,但相较于空载体组统计学差异不显著;结果提示,CREBZF可能调控gEECs的凋亡进程。本研究将目的基因分段克隆与无缝克隆技术联用,构建了上述2种过表达载体,为进一步探究CREBZF在反刍动物子宫内膜上皮细胞周期性变化中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 crebzf 过表达载体 无缝克隆 山羊子宫内膜上皮细胞 凋亡
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CREB/ATF碱性亮氨酸拉链转录因子在代谢和细胞生长中的生物学功能 被引量：2
2
作者 刘雨笑 苏维彤 李于 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期761-771,共11页
营养过剩导致的糖脂代谢失调会引发机体胰岛素抵抗和代谢紊乱,并增加罹患多种癌症的风险。ATF/CREB家族新成员CREB/ATF碱性亮氨酸拉链转录因子(CREBZF)发挥连接代谢与细胞生长的作用。CREBZF通过与其它蛋白形成异源二聚体,行使其辅转录... 营养过剩导致的糖脂代谢失调会引发机体胰岛素抵抗和代谢紊乱,并增加罹患多种癌症的风险。ATF/CREB家族新成员CREB/ATF碱性亮氨酸拉链转录因子(CREBZF)发挥连接代谢与细胞生长的作用。CREBZF通过与其它蛋白形成异源二聚体,行使其辅转录因子功能,调控基因表达。在高脂饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗模型中,肝脏CREBZF缺失可减轻肝脏脂肪变性,此外,在肥胖小鼠与肝脏脂质沉积患者的肝脏中,CREBZF的表达水平显著上调。有趣的是,CREBZF还可通过与STAT3、p53和HCF-1等转录因子相互作用调控细胞增殖和凋亡。小鼠肝脏特异性敲除CREBZF促进细胞周期进程并增强增殖能力。本综述将重点论述CREBZF信号转导网络如何调控代谢与细胞生长,并探讨靶向CREBZF等分子作为治疗胰岛素抵抗、糖尿病、脂肪肝和癌症相关疾病的策略。 展开更多
关键词 ATF/CREB蛋白家族 crebzf 糖脂代谢 代谢性疾病 细胞生长 癌症
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犬CREBZF启动子对4种氨基酸缺失的应答效应
3
作者 张亚妮 陆锐 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第10期191-198,共8页
【目的】研究犬CREBZF启动子对4种氨基酸(谷氨酸、亮氨酸、赖氨酸和蛋氨酸)缺失的应答效应。【方法】通过PCR和双酶切方法,从犬全血基因组中扩增5′侧翼区1 767bp的DNA片段,对其进行克隆测序分析后,构建全长及系列包含不同长度CREBZF启... 【目的】研究犬CREBZF启动子对4种氨基酸(谷氨酸、亮氨酸、赖氨酸和蛋氨酸)缺失的应答效应。【方法】通过PCR和双酶切方法,从犬全血基因组中扩增5′侧翼区1 767bp的DNA片段,对其进行克隆测序分析后,构建全长及系列包含不同长度CREBZF启动子的表达载体,用Quikchange试剂盒构建了CREBZF启动子定点缺失载体,转染MDCK细胞24h后,用双荧光素酶报告系统检测在氨基酸缺失条件下表达载体的双荧光素酶活性。【结果】扩增到了犬CREBZF 5′侧翼区1 767bp的启动子序列,并成功构建了包含不同长度CREBZF启动子的荧光素酶报告基因表达载体pGL3-ZF-A,pGL3-ZF-B,pGL3-ZF-C,pGL3-ZF-D,pGL3-ZF-E,pGL3-ZF-F;其中pGL3-ZF-A(-1 767→+1bp)能够应答4种氨基酸缺失;定点缺失结果显示,当缺失亮氨酸时,-1 227→-1 219bp序列(5′-ATTCACTCA-3′)的缺失可使CREBZF的转录活性完全丧失,该序列与已知的其他氨基酸应答元件(Amino acid re-sponse element,AARE)的同源性达89%。【结论】5′-ATTCACTCA-3′是犬CREBZF启动子中应答氨基酸应激必不可少的调控元件。 展开更多
关键词 crebzf 氨基酸应答 转录活性 犬
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