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C端带Myc和多聚组氨酸双标记的重组人β-防御素-2在COS-7细胞的转染表达 被引量:12
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作者 蔡绍晖 杜军 +4 位作者 陈新年 黄宁 长濑文彦 长谷川高明 王伯瑶 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2003年第2期255-259,280,共6页
本研究旨在探索建立能有效表达和分泌人类β-防御素 - 2 (h BD- 2 ) ,其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可能性及技术路线。将 h BD- 2的全长 c DNA片段插入编码双重报告基因 Myc和 6个多聚组氨酸 (His)的真... 本研究旨在探索建立能有效表达和分泌人类β-防御素 - 2 (h BD- 2 ) ,其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可能性及技术路线。将 h BD- 2的全长 c DNA片段插入编码双重报告基因 Myc和 6个多聚组氨酸 (His)的真核表达质粒 pc DNA3.1/Myc- His(+) ,构建出 C端带 Myc和 6× His的 rpc DNA3.1/Myc-His(+) /h BD- 2。用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入 COS- 7细胞 ,分别从 m RNA和蛋白质水平分析 h BD-2的表达情况并同步检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性。采用 RT- PCR法从被转染的细胞中扩增出一条约 2 4 0 bp的片段 ,其大小与预测相符。采用 Western blot法 ,用抗 His抗体检测到细胞可溶性蛋白在约 10 Kd处有强反应条带显示 ,其大小与该重组质粒结构中由 p CMV启动子驱动的基因片段有可能表达成肽链的分子量 (10 .1)相符。双层肉汤琼脂平板扩散法结果显示 :分别与正常细胞可溶性蛋白和培养上清比较 ,转染重组质粒的 COS- 7细胞的可溶性蛋白及培养上清在金黄色葡萄球菌的平板上均形成明显抑菌环。这些结果提示 :所建立的 h BD- 2哺乳类动物细胞表达系统能有效表达和分泌活性 h BD- 2。 展开更多
关键词 cos-7细胞 基因重组 基因转染 RT-PCR法 双层肉汤琼脂平板扩散法 Β-防御素-2 细胞培养
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人IL-24基因的克隆及在COS-7细胞中的表达 被引量:12
2
作者 陈雄艳 盛伟华 +3 位作者 谢宇锋 缪竞诚 白艳艳 杨吉成 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期672-676,共5页
目的 :克隆人IL 2 4基因 ,构建真核表达载体 ,在COS 7细胞中进行表达 ,并检测重组表达蛋白hIL 2 4的抗肿瘤活性。方法 :分离人外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,采用RT PCR技术克隆人IL 2 4基因 ,将其重组于pUC19,双脱氧末端终止法测... 目的 :克隆人IL 2 4基因 ,构建真核表达载体 ,在COS 7细胞中进行表达 ,并检测重组表达蛋白hIL 2 4的抗肿瘤活性。方法 :分离人外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,采用RT PCR技术克隆人IL 2 4基因 ,将其重组于pUC19,双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列 ,构建真核重组表达载体pcDNA3 hIL 2 4 ,进行双酶切和PCR鉴定 ,以质粒pcDNA3 hIL 2 4转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,用RT PCR检测mRNA表达 ,并用MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测其诱导肿瘤细胞凋亡的活性。结果 :成功获得 6 2 1bp的人IL 2 4基因 ,测序正确 ,经双酶切和PCR鉴定真核表达质粒构建正确 ,以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR法、MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测表明COS 7细胞可表达hIL 2 4 ,且所表达的人IL 2 4具有较强的诱导A5 4 9肺腺癌细胞凋亡的作用。结论 :人IL 2 4基因的瞬时表达和凋亡效应的初步研究已获成功 ,为研究人IL 2 展开更多
关键词 人IL-24 克隆 表达 cos-7细胞 凋亡
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重组人β-防御素基因在COS-7细胞的转染表达 被引量:10
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作者 蔡绍晖 杜军 +2 位作者 陈新年 黄宁 王伯瑶 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第4期433-437,共5页
为探索建立持续稳定表达 h BD- 2的哺乳类动物型工程细胞的可能性 ,作者研究构建真核重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2以进行 COS- 7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的 h BD- 2全长 c DNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒 p CMV.... 为探索建立持续稳定表达 h BD- 2的哺乳类动物型工程细胞的可能性 ,作者研究构建真核重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2以进行 COS- 7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的 h BD- 2全长 c DNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒 p CMV.tag2 B构建出 h BD- 2的重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2 ,并经 DNA测序证明h BD- 2 c DNA片段的插入方向和其全长 c DNA的碱基组成顺序均准确无误。通过脂质体转染法将 p CMV.tag2 B/h BD- 2导入 COS- 7细胞。RT- PCR法和免疫印迹法分别从 m RNA水平和蛋白质水平检测到被转染的 COS- 7细胞系能有效表达 h BD- 2。 展开更多
关键词 cos-7细胞 基因转染 重组人β-防御素 抗生素
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人MUC-1全长cDNA基因真核表达载体构建及在COS-7细胞中的表达 被引量:11
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作者 袁时芳 李开宗 +2 位作者 韩苇 颜真 张英起 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第13期1231-1234,共4页
目的 构建含人 MUC- 1全长 c DNA序列的真核表达载体 ,并观察其在 COS- 7细胞中的表达 .方法 将目的基因 MUC- 1克隆入 p GEM- 3zf(- )载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定 .亚克隆入真核质粒 pc DNA3.1(+) ,构建真核表达载体 pc DNA3.... 目的 构建含人 MUC- 1全长 c DNA序列的真核表达载体 ,并观察其在 COS- 7细胞中的表达 .方法 将目的基因 MUC- 1克隆入 p GEM- 3zf(- )载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定 .亚克隆入真核质粒 pc DNA3.1(+) ,构建真核表达载体 pc DNA3.1(+) - MU C- 1.用电穿孔法将重组质粒转入 COS- 7细胞 ,以免疫荧光和流式细胞仪检测 MUC- 1的表达 .结果 酶切鉴定和序列分析证实 ,重组质粒含有人MU C- 1全长 c DNA编码序列 ,转染实验表明 MU C- 1基因能在 COS- 7细胞中表达 .结论 人 MU C- 1全长 c DNA基因真核表达载体构建及其在 COS- 7中的表达均获成功 。 展开更多
关键词 MUC-1基因 真核表达 cos-7细胞 电穿孔法 核酸疫苗 免疫疗法 肿瘤治疗
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日本血吸虫单性感染雄虫和双性感染雄虫差异表达蛋白的筛选与鉴定 被引量:8
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作者 戴橄 汪世平 +5 位作者 余俊龙 徐绍锐 彭先楚 刘雪琴 周松华 刘芬 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第3期283-291,共9页
采用双向凝胶电泳和质谱技术对日本血吸虫单性感染雄虫和双性感染雄虫蛋白质表达谱进行分析,并在mRNA水平进行验证;观察差异表达SJCHGC蛋白重组真核表达质粒pEGFP-C1/SJCHGC在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位,并分析其表达产物的抗原性.... 采用双向凝胶电泳和质谱技术对日本血吸虫单性感染雄虫和双性感染雄虫蛋白质表达谱进行分析,并在mRNA水平进行验证;观察差异表达SJCHGC蛋白重组真核表达质粒pEGFP-C1/SJCHGC在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位,并分析其表达产物的抗原性.成功鉴定了9个日本血吸虫雌雄合抱差异表达蛋白,其中在日本血吸虫雄虫合抱前表达上调的蛋白质有6个;而有3个蛋白质在日本血吸虫雄虫合抱后表达明显上调.大多数差异蛋白功能涉及血吸虫的生长发育、生殖、营养、运动、信号传递等过程.重组质粒pEGFP-C1/SJCHGC融合基因真核表达载体在真核细胞COS-7中获得了表达,可用荧光显微镜直接观察其表达情况及亚细胞定位,细胞所表达的融合蛋白具有血吸虫抗原性.研究结果为揭示日本血吸虫雌雄合抱机制、研制抗血吸虫雌雄合抱疫苗提供了理论依据. 展开更多
关键词 日本血吸虫 雌雄合抱 蛋白质组学 双向电泳(2-DE) 基因克隆 绿色荧光蛋白 cos-7细胞
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用脂质体法转染 COS-7 细胞条件的优化 被引量:10
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作者 胡志远 邢桂春 贺福初 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1997年第2期125-127,共3页
现有的多种真核细胞基因转染方法存在繁琐和效率低的问题,我们利用脂质体包裹的方法,以瞬时表达系统中最常用的COS-7细胞为靶,观察了影响转染效率的多种因素,优化了转染条件。
关键词 瞬时表达 cos-7细胞 转染效率 脂质体
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pcDNA3.1/hTSHR真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量:6
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作者 詹升华 张徽 刘纯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期390-393,共4页
目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真... 目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆酶切位点中 ,构建重组体pcDNA3.1/hTSHR ,进行酶切、PCR及测序鉴定。通过脂质体介导 ,转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,并用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测hTSHR的表达。结果 :双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR得到约 2 70 0bp含TSHR全长cD NA的片段 ,同预期片段的大小相符。所构建的pcDNA3.1/hT SHR经双酶切及PCR鉴定同预期大小相符 ;测序结果与Gen Bank中收录的hTSHR全长序列一致 ,表明真核表达质粒构建正确。以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测表明 ,细胞可表达hTSHR。结论 :成功地构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/hTSHR ,为进一步研究TSHR的功能 ,以及利用hTSHR真核表达载体建立Graves实验动物模型奠定了基础。 展开更多
关键词 人促甲状腺激素受体 PCDNA3.1 cos-7细胞 转染 动物模型
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小鼠白细胞介素12双顺反子真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量:7
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作者 唐展云 赖冠华 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期48-53,共6页
克隆小鼠白细胞介素12(IL-12)p40及p35cDNA,并构建同时含mIL-12p40和p35cDNA的双顺反子真核表达载体及其在哺乳动物细胞中的表达.白细胞介素12是由巨噬细胞,树突状细胞等抗原提呈细胞产生的一... 克隆小鼠白细胞介素12(IL-12)p40及p35cDNA,并构建同时含mIL-12p40和p35cDNA的双顺反子真核表达载体及其在哺乳动物细胞中的表达.白细胞介素12是由巨噬细胞,树突状细胞等抗原提呈细胞产生的一种异二聚体细胞因子,对机体的细胞免疫功能起着重要的调节作用.利用脂多糖(100pg/ml)和小鼠重组干扰素(IFN-γ500U/ml)体外联合刺激小鼠腹腔巨噬细胞,从中提取总RNA,经RT-PCR扩增出含信号肽的小鼠白细胞介素12(mIL-12)p40及p35全长cD-NA.PCR产物经酶切后,分别克隆至pBluescriptⅡSK载体中,序列测定结果与文献报道序列一致.然后利用脊髓灰质炎(Polio)病毒内核糖体进入位点(IRES)连接mIL-12p40及p35cDNA,亚克隆至pcDNA3载体中,构建成含mIL-12p40及p35cDNA双顺反子真核表达载体,即pcDNA3/mIL-12,p40及p35cDNA同时受pcDNA3中hCMV启动子驱动,将p40及p35转录至同一mR-NA上.通过LipofectAMINE将pcDNA3/mIL-12转染COS-7细胞,72h收集培养上清,测定m? 展开更多
关键词 细胞介素12 PCDNA3 真核表达载体 cos-7细胞
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禽流感H5亚型HA基因在COS-7细胞中的瞬时表达与检测 被引量:5
9
作者 包红梅 姜永萍 +3 位作者 李泽君 李呈军 乔传玲 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期321-323,共3页
检测构建于真核表达载体PCI上的禽流感H5亚型(H5N1)HA基因的基因转染效率及瞬时表达,为基因疫苗的体外表达提供依据。在体外扩增并酶切鉴定PCIHA质粒;常规方法培养COS-7细胞;质粒与脂质体按照不同的比例混合,以脂质体介导法转染PCIHA,... 检测构建于真核表达载体PCI上的禽流感H5亚型(H5N1)HA基因的基因转染效率及瞬时表达,为基因疫苗的体外表达提供依据。在体外扩增并酶切鉴定PCIHA质粒;常规方法培养COS-7细胞;质粒与脂质体按照不同的比例混合,以脂质体介导法转染PCIHA,应用荧光显微镜观察转染效率及瞬时表达情况。结果表明转染效率与质粒和脂质体的比例有关,基因转染在24h后开始表达,48~72h表达量最高。本试验通过以脂质体不同剂量的优化方法转染COS-7细胞,获得了较高效率的表达,证实了AIV HA基因DNA疫苗可在体外表达。 展开更多
关键词 禽流感 H5亚型 HA基因 cos-7细胞 瞬时表达 检测方法
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Cos-7细胞胞内pH的^(31)P核磁共振测定 被引量:4
10
作者 乔娟 黄荣清 +4 位作者 肖炳坤 骆传环 吴德雨 赵焱 杨建云 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1298-1300,共3页
生物细胞内pH的测定对于细胞内代谢、游离离子及离子通道的研究有重要的意义,而且一些酶的活性也与细胞内pH密切相关。猴的肾细胞cos-7细胞常用于外源基因的转染表达,研究这一细胞株细胞内的pH,可为基因转染提供可靠的依据。本文采用31... 生物细胞内pH的测定对于细胞内代谢、游离离子及离子通道的研究有重要的意义,而且一些酶的活性也与细胞内pH密切相关。猴的肾细胞cos-7细胞常用于外源基因的转染表达,研究这一细胞株细胞内的pH,可为基因转染提供可靠的依据。本文采用31P核磁共振对cos-7细胞胞内的pH进行了分析测定。 展开更多
关键词 ^31P NMR cos-7细胞 pH ^31P核磁共振 分析测定 cos-7细胞 离子通道 基因转染 细胞
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牛IgG2 Fc受体在COS-7细胞表面的稳定表达 被引量:4
11
作者 李青梅 郭军庆 +5 位作者 张改平 杨艳艳 王选年 张华 乔松林 王丽 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期121-124,共4页
将牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)编码区cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3bo2R;以重组质粒转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测boFcγ2R在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和连续克隆化,在转染... 将牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)编码区cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3bo2R;以重组质粒转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测boFcγ2R在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和连续克隆化,在转染细胞表面稳定表达了boFcγ2R受体分子,转染细胞的玫瑰花环形成率达90%。最后获得稳定表达boFcγ2R受体分子的COS-7转染细胞系,为受体的功能研究提供了良好的技术平台。 展开更多
关键词 牛IgG2 FC受体 cos-7细胞 细胞表面表达 玫瑰花环试验
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人源载体介导的minidystrophin-EGFP融合基因在Cos-7细胞中的表达(英文) 被引量:4
12
作者 梁羽 梁德生 +7 位作者 薛志刚 龙志高 邬玲仟 潘乾 胡艺俏 戴和平 夏昆 夏家辉 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期493-496,共4页
目的构建微小肌营养不良蛋白(minidystrophin)和增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluoresce protein, EGFP)融合基因的人源载体,观察该载体在Cos-7细胞中的表达。方法以正常人肌营养不良基因cDNA(GenBank NM 004006)为模板,通过PCR克隆... 目的构建微小肌营养不良蛋白(minidystrophin)和增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluoresce protein, EGFP)融合基因的人源载体,观察该载体在Cos-7细胞中的表达。方法以正常人肌营养不良基因cDNA(GenBank NM 004006)为模板,通过PCR克隆的方法构建minidystrophin基因,融合EGFP基因后连接到人源载体pHrneo,大量提取重组质粒,转染Cos-7细胞,通过逆转录聚合酶链反应、荧光显微镜观察等方法检测该载体在细胞内的表达。结果成功构建pHrnDysG载体,转染Cos-7后,逆转录聚合酶链反应可扩增出735 bp特异条带,荧光显微镜观察可见表达蛋白分布于细胞膜上。结论pHrn载体介导的minidystrophin基因可以在真核细胞表达,并被有效地转运至细胞膜,可望用于杜氏肌营养不良基因治疗的研究。 展开更多
关键词 人源载体 融合基因 cos-7细胞 基因表达 微小肌营养不良蛋白 增强绿色荧光蛋白 杜氏肌营养不良
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抗人HBsAg单链抗体基因的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量:5
13
作者 温伟红 赵晶 +4 位作者 于翠娟 许彦鸣 金明 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期163-167,共5页
目的 :构建抗人HBsAg单链抗体基因 ,并分析其在COS 7细胞中的表达。方法 :以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板 ,分别扩增其轻、重链可变区 (VL、VH)基因 ,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly4Ser) 3的... 目的 :构建抗人HBsAg单链抗体基因 ,并分析其在COS 7细胞中的表达。方法 :以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板 ,分别扩增其轻、重链可变区 (VL、VH)基因 ,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly4Ser) 3的编码序列连接 ,并引入前导肽编码序列 ,构建具有L VH Linker VL 结构的单链抗体基因。将所构建的单链抗体基因克隆入绿色荧光蛋白 (GFP)融合表达载体pEGFP N3,并转染COS 7细胞进行表达。结果 :经测序表明 ,前导肽、连接肽、VL 及VH 的序列正确。酶切鉴定证实 ,成功地构建了GFP基因融合表达载体。瞬时转染COS 7细胞后 ,通过荧光显微镜观察证实有ScFv融合蛋白的表达。转染细胞的培养上清浓缩后 ,进行SDS PAGE及Westernblot分析 ,可检出ScFv融合蛋白的分泌性表达。培养上清的间接ELISA检测证实 ,所表达的单链抗体具有与HBsAg结合的特异性。结论 :成功地构建了抗人HBsAg单链抗体基因 ,并可在COS 展开更多
关键词 乙型肝炎 HBSAG 单链抗体基因 cos-7细胞 基因表达
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CTLA-4/Ig融合蛋白在COS-7中的表达、纯化及鉴定 被引量:6
14
作者 易绍萱 吴军 +6 位作者 王锡华 李彦 刘志刚 姜庆 罗高兴 周立新 肖光夏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期523-526,共4页
目的 探讨pCTLA 4/Ig融合蛋白表达载体在哺乳动物细胞中的表达及表达产物的鉴定、纯化 ,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法 将pCTLA 4/Ig表达质粒转染COS 7细胞 ,双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清中融合蛋白表达 ;ProteinA亲和层... 目的 探讨pCTLA 4/Ig融合蛋白表达载体在哺乳动物细胞中的表达及表达产物的鉴定、纯化 ,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法 将pCTLA 4/Ig表达质粒转染COS 7细胞 ,双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清中融合蛋白表达 ;ProteinA亲和层析纯化 ,SDS PAGE、Western印迹、3H TdR掺入等进行分子量、纯度、抗原特异性及生物学活性鉴定。结果 在pCTLA 4/Ig质粒转染后的 48h和 96h上清中 ,均能检测到CTLA 4/Ig融合蛋白表达 ;经亲和层析纯化后 ,在SDS PAGE胶上出现一条分子量约 5 0× 10 3 的与预期分子量大小相符的蛋白条带 ,该蛋白能与抗人CTLA 4单抗特异结合 ;该纯化融合蛋白能抑制人MLR ,抑制率为6 0 %~ 70 %。结论 在哺乳动物细胞中成功地表达并纯化了有生物学活性的重组人CTLA 4/Ig融合蛋白。 展开更多
关键词 CTLA-4融合蛋白 cos-7细胞 脂质体转染法
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硅壳纳米颗粒对COS-7细胞的生物效应 被引量:2
15
作者 刘芳 何晓晓 +2 位作者 王柯敏 葛佳 谭蔚泓 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1857-1862,共6页
从硅壳纳米颗粒对细胞存活率、细胞周期及细胞生长曲线的影响等方面系统地考察了包裹RuBpy染料的硅壳荧光纳米颗粒(FSiNPs)对美洲绿猴肾细胞(COS-7)的生物效应.结果表明,FSiNPs对COS-7细胞的影响是浓度依赖性的,低浓度(<0.2μg/μL)... 从硅壳纳米颗粒对细胞存活率、细胞周期及细胞生长曲线的影响等方面系统地考察了包裹RuBpy染料的硅壳荧光纳米颗粒(FSiNPs)对美洲绿猴肾细胞(COS-7)的生物效应.结果表明,FSiNPs对COS-7细胞的影响是浓度依赖性的,低浓度(<0.2μg/μL)的FSiNPs对细胞的存活率、细胞周期及整个生长过程均无负面影响,但随着与COS-7细胞作用的FSiNPs浓度的增大,FSiNPs对COS-7细胞的毒性也逐渐增大,尤其是对细胞周期及细胞生长曲线的影响更为敏感.同时,利用FSiNPs的荧光信号同步指示作用,考察了COS-7细胞对FSiNPs的吞噬作用,发现FSiNPs通过细胞膜的吞噬作用随机地进入到细胞内,一部分FSiNPs被细胞当成异物外排到细胞培养基中,另一部分则进入到下一代细胞中.随着细胞传代次数的增多和新生胞质的产生,FSiNPs在细胞内的含量逐渐减少,最后消失.在这一过程中,细胞的形态和生长状况依然良好.上述研究结果有望为FSiNPs在细胞生物学的研究和应用提供一定的安全标准,并为开展基于新型纳米颗粒的纳米颗粒器件的研究与应用打下了基础. 展开更多
关键词 硅壳纳米颗粒(SiNPs) cos-7细胞 生物效应
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蚓激酶基因在真核细胞COS-7中的表达 被引量:2
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作者 曹承华 董国清 +4 位作者 苑晓玲 善亚军 赵振虎 陈家佩 从玉文 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2004年第3期218-220,共3页
目的 :为了实现蚓激酶基因片段F 3,F 5在真核细胞COS 7中的表达 ,获得具有生物学活性的重组蚓激酶蛋白。方法 :将F 3,F 5与分泌表达载体pcDNA3.1(+)连接 ,构建重组表达质粒pcDNA 3和pcDNA 5 ,利用COS 7细胞进行基因F 3和F 5的瞬时表达 ... 目的 :为了实现蚓激酶基因片段F 3,F 5在真核细胞COS 7中的表达 ,获得具有生物学活性的重组蚓激酶蛋白。方法 :将F 3,F 5与分泌表达载体pcDNA3.1(+)连接 ,构建重组表达质粒pcDNA 3和pcDNA 5 ,利用COS 7细胞进行基因F 3和F 5的瞬时表达 ;纤维蛋白平板法对培养液上清进行活性检测。结果 :蚓激酶基因片段F 3,F 5在真核细胞COS 7中实现了表达 ;SDS PAGE显示蛋白质条带 ,纤维蛋白平板法检测培养液上清有明显的纤溶活性。结论 :蚓激酶基因片段F 3,F 5可在真核细胞COS 7中分泌表达 ,表达产物具有一定的纤溶活性。 展开更多
关键词 蚓激酶 基因表达 真核细胞 cos-7细胞
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Aβ_(1-15)多价DNA疫苗的构建及其对体液免疫的效果 被引量:5
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作者 张革 汪华侨 +5 位作者 邹俊涛 李国营 袁群芳 林贤 姚志彬 张革 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期371-376,共6页
【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.... 【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒;质粒转染COS-7细胞,Westernblot检测4×Aβ15的表达;质粒肌肉注射接种BALB/c鼠,共6次,18周加强免疫,ELISA法检测抗体效价以及抗体分型;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗血清与转基因鼠Tg2576脑切片中老年斑的特异结合。【结果】测序证实所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15载体序列正确,在COS-7细胞中表达分子质量约8ku的分泌型4×Aβ15蛋白。pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗于第2次加强免疫后产生Aβ抗体,随加强免疫次数增多,抗体滴度增加,在19周,抗体平均滴度为1︰6400,抗体以IgG1型为主,且可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑免疫结合并被Aβ42肽抗原的中和。【结论】所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗可在小鼠体内产生高效价的Aβ抗体,为下一步免疫老年性痴呆转基因动物的研究提供条件。 展开更多
关键词 多价DNA疫苗 体液免疫 cos-7细胞 pcDNA3.1 ELISA法检测 Western BALB/C鼠 LINKER 真核表达质粒 BLOT检测 免疫组织化学 抗体平均滴度 基因片段 加强免疫 转基因鼠 Aβ42 PCR技术 信号肽序列 转基因动物 老年性痴呆 基因合成
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人长链非编码RNA基因H19克隆、表达载体构建及对MCF-7细胞增殖的影响 被引量:4
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作者 彭艳 谢海棠 +5 位作者 孙红 曾樱 朱琼妮 李泰霖 王果 朱院山 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期555-560,共6页
目的克隆人长链非编码RNA H19基因,构建表达载体,研究H19表达对MCF-7增殖的影响作用。方法制备乳腺癌MCF-7细胞总RNA,RT-PCR扩增长链非编码RNA H19全长序列,分子克隆至pc DNA3.1(-)真核表达载体;分别转染HEK-293T和COS 7细胞并行Real-ti... 目的克隆人长链非编码RNA H19基因,构建表达载体,研究H19表达对MCF-7增殖的影响作用。方法制备乳腺癌MCF-7细胞总RNA,RT-PCR扩增长链非编码RNA H19全长序列,分子克隆至pc DNA3.1(-)真核表达载体;分别转染HEK-293T和COS 7细胞并行Real-time q PCR验证载体构建是否成功;转染H19表达载体入MCF-7细胞株,转染0、24和48 h后行MTS检测H19表达,同时设计siRNA小分子片段干扰H19的表达,观察对MCF-7细胞增殖活性的影响。结果成功克隆和构建了h H19-pc DNA3.1(-)表达载体;转染入MCF-7细胞48h后,H19过表达,MTS检测H19表达载体组吸光度明显高于空载体组和空白对照组;而转染H19 siRNA小分子片段后能干扰其表达,同时抑制细胞增殖。结论 H19过表达能够促进乳腺癌MCF-7细胞增殖。 展开更多
关键词 长链非编码RNA H19基因 基因克隆 瞬时转染 HEK-293T细胞 cos-7细胞 MCF-7细胞
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弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅱ.pcDNA3-HBsAg-GRA1在COS-7细胞中的表达及鉴定 被引量:5
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作者 王丹静 舒衡平 +3 位作者 秦志强 蔡力汀 吴翔 蒋立平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第1期49-51,共3页
目的 鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。 方法 提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定... 目的 鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。 方法 提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定。结果 成功将pcDNA3 HBsAg GRA1转染入COS 7细胞。转染的细胞能高效表达分子为 4 7kD分泌性融合蛋白 (HBsAg GRA1)。HBsAg GRA1能同时被HBsAb阳性人血清及弓形虫免疫兔血清所识别。 结论 pcDNA3 HB sAg GRA1在体外培养的COS 7细胞中高效表达与预期分子量大小相同 ,且具有免疫学活性的融合蛋白。 展开更多
关键词 pcDNA3-HBsAg—GRA1 表达 cos-7细胞 弓形虫
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6A8α-甘露糖苷酶酶解p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside 被引量:5
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作者 王壮志 李琳 +3 位作者 史耕先 刘音 赵方萄 朱立平 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期423-427,共5页
目的明确6A8cDNA编码蛋白质的α-甘露糖苷酶性质。方法利用基因重组技术将克隆到的3个DNA片段拼接成完整6A8cDNA将其插入到真核表达载体pCDI转染COS-7细胞,用酶活性检测与Westernblot对瞬时表达的蛋白质的性质进行鉴定。结果拼接后... 目的明确6A8cDNA编码蛋白质的α-甘露糖苷酶性质。方法利用基因重组技术将克隆到的3个DNA片段拼接成完整6A8cDNA将其插入到真核表达载体pCDI转染COS-7细胞,用酶活性检测与Westernblot对瞬时表达的蛋白质的性质进行鉴定。结果拼接后的cDNA片段经测序完全符合6A8cDNA碱基顺序。转染重组表达载体pCDI-6A8的COS-7细胞的匀浆对p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside的酶解作用为转染空载体pCDI的细胞及野生型细胞的3~4倍,且这种酶解作用不能被swainsonine所抑制。Westernblot检测显示在相对分子质量(Mr)120000处有一明显蛋白带,此带的显影于转染pCDI-6A8cDNA的细胞明显深于转染空载pCDI及野生型细胞。结论6A8cDNA编码的蛋白质确为一种α-甘露糖苷酶,属于Ⅱ类α-甘露糖苷酶。 展开更多
关键词 6A8 α-甘露糖苷酶 cos-7细胞 瞬时表达
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