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斑贝链霉菌接合转移系统的构建及透明颤菌血红蛋白基因的表达对其次级代谢的影响 被引量：4
1
作者 凌华云 闵勇 +3 位作者 熊伟 吕和平 喻子牛 郑应华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期59-64,共6页
以pSET152和pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌ET12567(pUZ8002)和S17-1接合转移斑贝链霉菌(Streptomycesbambergiensis),构建和优化了接合转移体系。采用OOE-PCR技术构建含ermEp*与vhb结构基因融合片段的整合型表达载体pBIB2005,转化... 以pSET152和pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌ET12567(pUZ8002)和S17-1接合转移斑贝链霉菌(Streptomycesbambergiensis),构建和优化了接合转移体系。采用OOE-PCR技术构建含ermEp*与vhb结构基因融合片段的整合型表达载体pBIB2005,转化ET12567(pUZ8002)后,属间接合转移至斑贝链霉菌。通过PCR、CO结合差光谱验证vhb基因在斑贝链霉菌中整合表达。摇瓶发酵显示VHb蛋白能改善菌体对氧的需求,一定程度上促进细胞生长,提高抗生素产量。 展开更多
关键词 斑贝链霉菌 接合转移 VHB基因 OOE-PCR co结合差光谱
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白腐真菌细胞色素P450的诱导及检测方法研究 被引量：4
2
作者 宁大亮 王慧 李冬 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第8期2485-2490,共6页
以CO结合差光谱为基本检测法,研究了白腐真菌黄孢原毛平革菌中细胞色素P450的诱导和适宜的分离检测方法.结果表明,正己烷对该真菌P450有显著的诱导作用,P450诱导量受正己烷浓度和诱导时间的影响,每小时投加正己烷2μL/mL、诱导6 h可使... 以CO结合差光谱为基本检测法,研究了白腐真菌黄孢原毛平革菌中细胞色素P450的诱导和适宜的分离检测方法.结果表明,正己烷对该真菌P450有显著的诱导作用,P450诱导量受正己烷浓度和诱导时间的影响,每小时投加正己烷2μL/mL、诱导6 h可使该真菌微粒体P450比浓度高达140-160 pmol/mg.在此基础上,本研究优化了分离P450时破碎细胞的方法以及光谱法检测P450的条件.破碎细胞时,采用高速分散结合玻璃研磨,比采用玻璃研磨、超声破碎和珠磨等方法分离的微粒体P450含量高1-5倍,是更为适宜的破碎方法.检测CO结合差光谱时,通气和还原条件对P450检测值有显著影响,较适宜的条件为：样品池和对照池分别通入等量的CO和N2,通气流量为3 mL/min（300μL样本）,通气时间40 s;通气后投加还原剂低亚硫酸钠,投加浓度为0.4 mol/L. 展开更多
关键词 白腐真菌 细胞色素P450 诱导 co结合差光谱 细胞破碎
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委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统的构建及透明颤菌血红蛋白的表达 被引量：3
3
作者 高峰 王斌 +2 位作者 陈太春 汪志军 安德荣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期406-410,共5页
【目的】构建委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统及透明颤菌血红蛋白的表达。【方法】以链霉菌广泛使用的整合型质粒pSET152和复制型pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)进行属间接合转移委内... 【目的】构建委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统及透明颤菌血红蛋白的表达。【方法】以链霉菌广泛使用的整合型质粒pSET152和复制型pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)进行属间接合转移委内瑞拉链霉菌秦岭变种。【结果】确定了该变种的最佳接合转移条件;通过SOE-PCR(Splicing by overlap extension PCR)技术构建含PermE和vhb结构基因融合片段的整合型表达载体pJD100,转化ET12567(pUZ8002)后属间接合转移委内瑞拉链霉菌秦岭变种。通过PCR和CO结合差光谱验证了vhb基因在委内瑞拉链霉菌秦岭变种中的整合表达。【结论】本文首次探索了委内瑞拉链霉菌秦岭变种接合转移系统,确定了委内瑞拉链霉菌秦岭变种的最佳接合转移条件,并采用基因工程手段使vhb基因在委内瑞拉链霉菌秦岭变种中获得表达。 展开更多
关键词 委内瑞拉链霉菌秦岭变种 接合转移 VHB基因 co结合差光谱
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原位光谱法检测白腐真菌P450的诱导及其降解功能 被引量：2
4
作者 宁大亮 王慧 +1 位作者 庄芫 李冬 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1469-1474,共6页
利用诱导-原位光谱分析法,对黄孢原毛平革菌中的微粒体P450在蛋白质水平上进行原位直接检测和表征,研究结果表明,正己烷、苯甲酸、萘和五氯酚对黄孢原毛平革菌P450酶系均有不同程度的诱导作用,在合适的诱导剂量和诱导条件下,对黄孢原毛... 利用诱导-原位光谱分析法,对黄孢原毛平革菌中的微粒体P450在蛋白质水平上进行原位直接检测和表征,研究结果表明,正己烷、苯甲酸、萘和五氯酚对黄孢原毛平革菌P450酶系均有不同程度的诱导作用,在合适的诱导剂量和诱导条件下,对黄孢原毛平革菌P450的诱导量分别达到未诱导时的7.5,5.6,3.1和3.5倍.其中五氯酚对真菌P450酶系的诱导现象尚未见报道.在不同的培养条件下测定了苯甲酸与P450的底物结合光谱,并检测出微粒体酶液中依赖NADPH的苯甲酸降解活性,证实了降解苯甲酸的P450基因在黄孢原毛平革菌中能够顺利合成并表现出明显的催化活性,抑制剂实验结果表明,除了P450的催化降解途径以外,白腐真菌中还存在其它的苯甲酸降解途径. 展开更多
关键词 co结合差光谱 白腐真菌 P450 诱导 降解功能
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透明颤菌血红蛋白基因在弗氏链霉菌中的表达及其对菌体生长和泰乐星合成的影响 被引量：9
5
作者 陈文青 喻子牛 郑应华 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期516-520,共5页
质粒 p IJ4 0 2 6和 p RK4 0 4 - vhb分别含有红霉素抗性基因启动子 (Perm E)和透明颤菌血红蛋白基因 (vhb) ,先用 PCR分别扩增二者 ,再用 SOE- PCR(Splicing by overlap extension PCR)将不含自身启动子的vhb基因置于 Perm E之下 ;将 S... 质粒 p IJ4 0 2 6和 p RK4 0 4 - vhb分别含有红霉素抗性基因启动子 (Perm E)和透明颤菌血红蛋白基因 (vhb) ,先用 PCR分别扩增二者 ,再用 SOE- PCR(Splicing by overlap extension PCR)将不含自身启动子的vhb基因置于 Perm E之下 ;将 SOE- PCR产物克隆到链霉菌整合性载体 p SET15 2上 ,构建成 vhb基因表达载体 p WQ2 0 0 4。通过大肠埃希氏菌 -链霉菌属间接合转移的方式将 p WQ2 0 0 4导入弗氏链霉菌 (Streptomycesfradiae)中 ,利用 p WQ2 0 0 4上 Φ C31整合性位点使 vhb基因整合到弗氏链霉菌染色体上。PCR验证表明 ,vhb基因已整合到染色体上 ,CO结合差光谱分析则表明 vhb基因在弗氏链霉菌中成功表达。摇瓶与上罐发酵显示 展开更多
关键词 uhb基因 SOE-PCR 属间接合转移 co结合差光谱分析 泰乐星
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