背景与目的:DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)是一种双链断裂修复蛋白,可以修复细胞的DNA双链断裂损伤。本研究通过转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株,探讨DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽...背景与目的:DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)是一种双链断裂修复蛋白,可以修复细胞的DNA双链断裂损伤。本研究通过转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株,探讨DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株的放射敏感性的影响。方法:利用LipofectamineTM2000转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-1-wtp53;设0、0.5、1、2、4、6、8Gy7个放射剂量点,用集落形成法分析转染反义寡核苷酸前后细胞的存活情况,并分别用线性二次模型和单击多靶模型拟合出细胞的剂量存活曲线,求出放射生物学参数α、β、α/β、SF2、D0、Dq和N值,评价细胞放射敏感性的变化。结果:转染DNA-PKcs反义寡核苷酸前,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.03、0.05,SF2值分别为0.73、0.50,D0值分别为2.08Gy、1.13Gy,Dq值分别为2.04Gy、1.36Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.04、0.26,SF2值分别为0.45、0.21,D0值分别为1.07Gy、0.83Gy,Dq值分别为1.24Gy、0.73Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,鼻咽癌细胞的α值增大,SF2、D0、Dq值均减小。结论:DNA-PKcs反义寡核苷酸可逆转CNE-1的辐射抗性,该逆转作用不依赖细胞的p53功能状态。展开更多
文摘背景与目的:DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)是一种双链断裂修复蛋白,可以修复细胞的DNA双链断裂损伤。本研究通过转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株,探讨DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株的放射敏感性的影响。方法:利用LipofectamineTM2000转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-1-wtp53;设0、0.5、1、2、4、6、8Gy7个放射剂量点,用集落形成法分析转染反义寡核苷酸前后细胞的存活情况,并分别用线性二次模型和单击多靶模型拟合出细胞的剂量存活曲线,求出放射生物学参数α、β、α/β、SF2、D0、Dq和N值,评价细胞放射敏感性的变化。结果:转染DNA-PKcs反义寡核苷酸前,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.03、0.05,SF2值分别为0.73、0.50,D0值分别为2.08Gy、1.13Gy,Dq值分别为2.04Gy、1.36Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.04、0.26,SF2值分别为0.45、0.21,D0值分别为1.07Gy、0.83Gy,Dq值分别为1.24Gy、0.73Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,鼻咽癌细胞的α值增大,SF2、D0、Dq值均减小。结论:DNA-PKcs反义寡核苷酸可逆转CNE-1的辐射抗性,该逆转作用不依赖细胞的p53功能状态。
文摘目的观察西妥昔单抗(C225)体外增强人鼻咽癌CNE-1细胞对紫杉醇(PTX)化疗敏感性作用,并探讨可能的作用机制。方法将人鼻咽癌CNE-1细胞株随机分为对照组、PTX组、联合用药组,PTX组采用30μg/ml PTX处理,联合用药组采用30μg/ml PTX+250μg/ml C225处理,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO)。MTT法检测细胞的PTX耐药性,取对数期的CNE-1细胞分为9组,4组分别加入浓度为0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L的PTX;另有4组也加入PTX,同时加入C225,使C225最终浓度为250μg/ml,空白对照组中加入等体积的DMSO,培养48 h。MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布,Western blotting、RT-PCR分别检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BCL2-相关X蛋白(Bax)蛋白水平及其基因相对表达量。结果PTX组CNE-1细胞抑制率为(15.99±2.13)%,联合用药组CNE-1细胞抑制率为37.10%(37.10±2.48)%,差异有统计学意义(t=11.184,P=0.000)。与对照组相比,PTX组、联合用药组的细胞凋亡率、G0~G1期细胞比率均升高(P<0.05),而S期细胞比率降低(P<0.05)。与PTX相比,联合用药组的细胞凋亡率、G0~G1期细胞比率升高(P<0.05),S期细胞比率与M期细胞比率均明显降低(P<0.05)。MTT检测PTX耐药性结果显示,空白对照组、C225组细胞的细胞活性随着PTX浓度增加而降低,空白对照组、C225组CNE-1细胞的PTX IC 50分别为4.179μmol/L、0.25μmol/L。与对照组相比,PTX组、联合用药组CyclinD1、Bcl-2蛋白水平与基因相对表达量均明显降低(P<0.05),而Bax蛋白水平与基因相对表达量均明显升高(P<0.05)。与PTX相比,联合用药组CyclinD1、Bcl-2蛋白水平与基因相对表达量均明显降低(P<0.05),而Bax蛋白水平与基因相对表达量均明显升高(P<0.05)。结论在PTX化疗的基础上增加C225处理,可以促进PTX对人鼻咽癌CNE-1细胞的增殖抑制作用以及促凋亡作用,降低细胞的CNE-1细胞的PTX IC 50
