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白粉菌诱导簇毛麦叶片酵母双杂交文库构建及CMPG1-V候选互作蛋白筛选
被引量：
7
1
作者
张恒
陈怡名
+8 位作者
张旭
牛影
赵佳
吴承云
郝永利
孙丽
王海燕
肖进
王秀娥
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第4期594-604,共11页
[目的]本文旨在使用Mate&PlateTM技术构建簇毛麦受白粉菌诱导的酵母双杂交文库,鉴定正向调节小麦白粉病抗性的簇毛麦E3泛素连接酶蛋白CMPG1-V的互作蛋白,为解析其抗病性机制奠定基础。[方法]提取白粉菌诱导前及诱导后1、2、4、6、12...
[目的]本文旨在使用Mate&PlateTM技术构建簇毛麦受白粉菌诱导的酵母双杂交文库,鉴定正向调节小麦白粉病抗性的簇毛麦E3泛素连接酶蛋白CMPG1-V的互作蛋白,为解析其抗病性机制奠定基础。[方法]提取白粉菌诱导前及诱导后1、2、4、6、12、24和48 h的簇毛麦叶片总RNA,利用SMART技术分离纯化mRNA,合成ds cDNA,将ds cDNA和pGADT7-Rec载体共同转入酵母菌株Y187,构建簇毛麦酵母双杂交文库,明确文库插入片段大小和滴度。以CMPG1-V为诱饵筛选文库,并对部分互作蛋白进行了回补验证,利用BiFC方法验证CMPG1-V与筛选到的1个互作蛋白CMIN6(MYB25-V)的体内互作。[结果]成功构建了受白粉菌诱导的簇毛麦叶片酵母双杂交文库,文库滴度为9.5×107 CFU·mL^-1,插入片段长度为250~2000 bp,重组率为100%。以CMPG1-V为诱饵筛选文库,获得79个互作蛋白,挑选其中10个互作蛋白进行回补验证。通过BiFC试验验证了CMPG1-V与MYB25-V的体内互作。MYB25-V及其在小麦中的同源基因TaMYB25受白粉菌诱导后均上调表达,推测MYB25-V可能参与调控小麦白粉病抗性。[结论]本研究成功构建了白粉菌诱导的簇毛麦酵母双杂交文库,为鉴定CMPG1-V的互作蛋白并解析其抗病性机制奠定了基础。
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关键词
小麦白粉病
簇毛麦
酵母双杂交
cmpg
1
-
v
基因
互作蛋白
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职称材料
题名
白粉菌诱导簇毛麦叶片酵母双杂交文库构建及CMPG1-V候选互作蛋白筛选
被引量：
7
1
作者
张恒
陈怡名
张旭
牛影
赵佳
吴承云
郝永利
孙丽
王海燕
肖进
王秀娥
机构
南京农业大学细胞遗传研究所/作物遗传与种质创新国家重点实验室/江苏省现代作物生产协同创新中心
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第4期594-604,共11页
基金
国家自然科学基金项目(91935304,31971943)
国际(地区)合作与交流项目(31661143005)
+3 种基金
农业部948项目(2015-Z41)
江苏省科技厅项目[PZCZ201706,JATS(2019)429]
江苏省科技成果转化专项基金(BA2017138)
宁夏回族自治区重点研发计划重大项目(2019BBF02022-04)。
文摘
[目的]本文旨在使用Mate&PlateTM技术构建簇毛麦受白粉菌诱导的酵母双杂交文库,鉴定正向调节小麦白粉病抗性的簇毛麦E3泛素连接酶蛋白CMPG1-V的互作蛋白,为解析其抗病性机制奠定基础。[方法]提取白粉菌诱导前及诱导后1、2、4、6、12、24和48 h的簇毛麦叶片总RNA,利用SMART技术分离纯化mRNA,合成ds cDNA,将ds cDNA和pGADT7-Rec载体共同转入酵母菌株Y187,构建簇毛麦酵母双杂交文库,明确文库插入片段大小和滴度。以CMPG1-V为诱饵筛选文库,并对部分互作蛋白进行了回补验证,利用BiFC方法验证CMPG1-V与筛选到的1个互作蛋白CMIN6(MYB25-V)的体内互作。[结果]成功构建了受白粉菌诱导的簇毛麦叶片酵母双杂交文库,文库滴度为9.5×107 CFU·mL^-1,插入片段长度为250~2000 bp,重组率为100%。以CMPG1-V为诱饵筛选文库,获得79个互作蛋白,挑选其中10个互作蛋白进行回补验证。通过BiFC试验验证了CMPG1-V与MYB25-V的体内互作。MYB25-V及其在小麦中的同源基因TaMYB25受白粉菌诱导后均上调表达,推测MYB25-V可能参与调控小麦白粉病抗性。[结论]本研究成功构建了白粉菌诱导的簇毛麦酵母双杂交文库,为鉴定CMPG1-V的互作蛋白并解析其抗病性机制奠定了基础。
关键词
小麦白粉病
簇毛麦
酵母双杂交
cmpg
1
-
v
基因
互作蛋白
Keywords
wheat
powdery
mildew
Haynaldia
v
illosa
yeast-two-hybrid
cmpg
1-
v
gene
interaction
protein
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
S512.1 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
白粉菌诱导簇毛麦叶片酵母双杂交文库构建及CMPG1-V候选互作蛋白筛选
张恒
陈怡名
张旭
牛影
赵佳
吴承云
郝永利
孙丽
王海燕
肖进
王秀娥
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
7
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