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外源蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中高效表达的策略 被引量:16
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作者 刘国奇 王海涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第5期496-500,共5页
高效表达外源蛋白 ,在生物制药中有重要意义 .中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell)是表达外源蛋白的最佳真核表达系统之一 .影响外源蛋白在CHO细胞表达的因素甚多 ,主要包括载体、宿主细胞和外源基因几方面 .深入了解和灵活运... 高效表达外源蛋白 ,在生物制药中有重要意义 .中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell)是表达外源蛋白的最佳真核表达系统之一 .影响外源蛋白在CHO细胞表达的因素甚多 ,主要包括载体、宿主细胞和外源基因几方面 .深入了解和灵活运用它们之间的关系 。 展开更多
关键词 重组蛋白 cho细胞 真核表达系统 生物制药
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APS作为重组(CHO细胞)乙型肝炎疫苗佐剂的安全性及免疫效果 被引量:21
2
作者 姚伟 李玉 +3 位作者 任魁 张岩锐 范临兰 郑菊梅 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期211-213,共3页
目的 探讨黄芪多糖(APS)作为重组(CHO细胞)乙肝疫苗免疫佐剂的可行性。方法APS与重组(CHO细胞)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)混合制成疫苗,进行了动物毒性试验、过敏试验及效力试验。结果 该佐剂毒性轻微,无过敏反应,同一剂量组动物... 目的 探讨黄芪多糖(APS)作为重组(CHO细胞)乙肝疫苗免疫佐剂的可行性。方法APS与重组(CHO细胞)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)混合制成疫苗,进行了动物毒性试验、过敏试验及效力试验。结果 该佐剂毒性轻微,无过敏反应,同一剂量组动物血清抗-HBs阳转率高于Al(OH)3对照组。结论APS是一种很有潜力的疫苗佐剂。 展开更多
关键词 APS cho细胞 乙型肝炎疫苗佐剂 安全性 免疫效果 黄芪多糖
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人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性 被引量:24
3
作者 陈安徽 邵颖 +2 位作者 李继武 蒋昭志 陈宏伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第9期194-197,共4页
以天然蝉花虫草生药为对照,以中国仓鼠卵巢肿瘤(Chinese?hamster?ovary,CHO)细胞株为模型,采用刃天青染色法检测人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性。结果表明:人工培育蝉花虫草和天然蝉花虫草生药都具有抗肿瘤活性,且活性成分均为中等极性... 以天然蝉花虫草生药为对照,以中国仓鼠卵巢肿瘤(Chinese?hamster?ovary,CHO)细胞株为模型,采用刃天青染色法检测人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性。结果表明:人工培育蝉花虫草和天然蝉花虫草生药都具有抗肿瘤活性,且活性成分均为中等极性化合物。对人工培育蝉花虫草中的抗肿瘤活性成分进行分离制备,得到两种化合物,命名为化合物1和化合物2。化合物1经鉴定为虫草素,化合物2经纯度验证为纯品,活性验证结果发现当其质量浓度为50?μg/m L时,对CHO细胞抑制率高达(94.55±2.33)%。 展开更多
关键词 人工培育蝉花虫草 抗肿瘤活性 cho细胞 虫草素
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国产重组(CHO细胞)乙型肝炎疫苗抗体反应和母婴传播阻断效果研究 被引量:23
4
作者 梁争论 李河民 +7 位作者 荆庆 李艳萍 王佑春 时景璞 赵桂珍 尹爱红 杨超美 张华远 《中国计划免疫》 2003年第6期317-320,共4页
为观察多批次国产重组中国仓鼠卵巢细胞 (CHO细胞 )乙型肝炎 (乙肝 )疫苗的抗体反应和母婴传播阻断效果 ,1992~ 1999年应用 6批国产重组 (CHO细胞 )乙肝疫苗 ,按 0、1、6个月程序免疫 4 5 1名 6~ 12岁儿童。观察疫苗的安全性和接种后 ... 为观察多批次国产重组中国仓鼠卵巢细胞 (CHO细胞 )乙型肝炎 (乙肝 )疫苗的抗体反应和母婴传播阻断效果 ,1992~ 1999年应用 6批国产重组 (CHO细胞 )乙肝疫苗 ,按 0、1、6个月程序免疫 4 5 1名 6~ 12岁儿童。观察疫苗的安全性和接种后 1年内的抗体反应 ,并分别随访观察了 2~ 6年。同时应用 4批重组 (CHO细胞 )乙肝疫苗 ,免疫乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)、乙肝病毒e抗原 (HBeAg)双阳性母亲的新生儿 12 2名 ,观察免疫后 1年内的母婴传播阻断保护效果。结果显示 :所有接种者未见严重副反应发生。完成全程免疫后 1个月 (T7)时 ,接种各疫苗组儿童的抗体阳转率均 >93% ,各组间差异无显著的统计学意义 (P >0 0 5 ) ,无或低应答率均值为 2 13% ,抗体滴度为2 11 74~ 347 2 7mIU/ml。 2~ 6年随访期间 ,不同疫苗组间抗体阳转率和抗体滴度有相同的下降趋势。 12 2名高危新生儿中 2 9人在免疫后 1年HBsAg持续阳性 ,母婴传播阻断保护率为 74 6 4 % (6 6 4 1%~ 85 19% )。表明国产重组 (CHO细胞 )乙肝疫苗安全性好 ,效果稳定 ,母婴传播阻断效果显著优于血源乙肝疫苗。 展开更多
关键词 cho细胞 乙型肝炎疫苗 抗体反应 母婴传播 阻断效果
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rCHO细胞在葡萄糖限制流加培养过程中的生长与代谢特性 被引量:14
5
作者 高量 游磊 +1 位作者 朱明龙 谭文松 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期74-78,共5页
以调控rCHO细胞的葡萄糖代谢为主要研究目标,通过在2L生物反应器中进行的批培养和葡萄糖限制恒速流加培养的方法,考察了在培养过程中葡萄糖浓度对rCHO细胞生长、葡萄糖和谷氨酰胺消耗,以及副产物乳酸、氨和丙氨酸生成的影响。结果表明:... 以调控rCHO细胞的葡萄糖代谢为主要研究目标,通过在2L生物反应器中进行的批培养和葡萄糖限制恒速流加培养的方法,考察了在培养过程中葡萄糖浓度对rCHO细胞生长、葡萄糖和谷氨酰胺消耗,以及副产物乳酸、氨和丙氨酸生成的影响。结果表明:葡萄糖限制的流加培养过程中,活细胞密度XV达到2.35×106cells·mL-1,较批培养提高一倍;而乳酸生成大幅减少。在葡萄糖限制培养阶段,qLac和YLac/Gluc持续降低至零,而qo2/qGluc由0.7mmol·mmol-1上升至4.3mmol·mmol-1,说明更多葡萄糖进入高效释能代谢途径。同时谷氨酰胺的消耗增加,YAmm/Gln增大,YAla/Gln下降,证明谷氨酰胺的能量利用率也有所提高。 展开更多
关键词 批培养 流加培养 葡萄糖限制 cho细胞
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重组CHO细胞培养过程中氨对细胞代谢的影响 被引量:10
6
作者 孙祥明 张元兴 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期304-309,共6页
研究了重组CHO细胞批培养过程中 ,氨浓度对细胞的葡萄糖、谷氨酰胺及其它氨基酸代谢的影响。表明 ,细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的得率系数随着氨浓度的增加而降低 ,起始氨浓度为 5 6 6mmol L的批培养过程与起始氨浓度为 0 2 1mmol L的批... 研究了重组CHO细胞批培养过程中 ,氨浓度对细胞的葡萄糖、谷氨酰胺及其它氨基酸代谢的影响。表明 ,细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的得率系数随着氨浓度的增加而降低 ,起始氨浓度为 5 6 6mmol L的批培养过程与起始氨浓度为 0 2 1mmol L的批培养过程相比 ,细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的得率系数分别下降了 78%和 74% ,细胞对其它氨基酸的得率系数也分别下降了 5 0 %~ 70 %。氨浓度的增加明显地改变了细胞的代谢途径 ,葡萄糖代谢更倾向于厌氧的乳酸生成。在谷氨酰胺的代谢过程中 ,谷氨酸经谷氨酸脱氢酶进一步生成α 酮戊二酸的过程受到了氨的抑制 ,而氨对谷氨酸经谷氨酸转氨酶反应生成α 酮戊二酸的过程有促进作用 ,但总体上谷氨酸进一步脱氨生成α 展开更多
关键词 动物细胞培养 细胞代谢 cho细胞 葡萄糖 谷氨酰胺
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通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达 被引量:10
7
作者 白银 王琰 +3 位作者 张海荣 周丽君 吕英谦 俞莉章 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期62-64,67,共4页
目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量... 目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选,用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平。结果:通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变,使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化。转染CHO细胞后,可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果,抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关。从弱化程度最高的pWS2-BDI组中,我们筛选得到表达量达55μg/(106细胞·24 h)的高表达细胞株,经锌离子进一步诱导后,表达量可达100μg/(106细胞·24 h)以上。结论:弱化表达载体中DHFR的表达,可提高MTX对工程抗体表达的增加效果。 展开更多
关键词 载体 DHFR基因 真核表达 抗体 cho细胞
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携带共扩增基因的CHO细胞表达载体的构建 被引量:10
8
作者 刘国奇 陈小密 +4 位作者 徐静 宋宏彬 于长明 童贻刚 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期17-19,共3页
目的构建携带共扩增基因的CHO细胞表达载体。方法以质粒载体 pCI neo为骨架 ,应用小鼠二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的cDNA ,构建了哺乳动物细胞表达载体pCdhfr1。把绿色荧光蛋白基因亚克隆到pCdhfrl的多克隆位点 ,构建了表达质粒 pFP。结... 目的构建携带共扩增基因的CHO细胞表达载体。方法以质粒载体 pCI neo为骨架 ,应用小鼠二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的cDNA ,构建了哺乳动物细胞表达载体pCdhfr1。把绿色荧光蛋白基因亚克隆到pCdhfrl的多克隆位点 ,构建了表达质粒 pFP。结果经脂质体法转染CHO细胞 ,以氨甲喋呤为选择标记 ,经过一轮扩增后 ,获得表达绿色荧光蛋白的CHO细胞株。结论应用CHO/DHFR表达系统 ,为构建CHO细胞的工程细胞株建立了良好的模型。 展开更多
关键词 二氮叶酸还原酶 cho细胞 构建 表达载体
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PcDNA4/His C-MBL表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达 被引量:11
9
作者 白志军 张丽芸 +2 位作者 林佐贤 卢晓 陈政良 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第8期859-863,共5页
目的构建PcDNA4/HisC-MBL表达载体,在哺乳细胞中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)。方法应用PCR从含有中国人野生型MBLcDNA的质粒pGEM-MBL中扩增目的基因片段,将其克隆至PcDNA4/HisC真核表达载体。经酶切及测序鉴定后,以电穿孔法转染CHO细... 目的构建PcDNA4/HisC-MBL表达载体,在哺乳细胞中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)。方法应用PCR从含有中国人野生型MBLcDNA的质粒pGEM-MBL中扩增目的基因片段,将其克隆至PcDNA4/HisC真核表达载体。经酶切及测序鉴定后,以电穿孔法转染CHO细胞,以RT-PCR分析其mRNA表达,通过Ni-NTA琼脂糖柱层析纯化目的蛋白并以SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,以其为免疫原免疫小鼠后取鼠血清进行ELISA检测分析目的蛋白的免疫活性。结果从pGEM-MBL中扩增得到约750bp的cDNA片段,构建成重组载体经酶切出现约5100和750bp片段,测序鉴定与预期的完全一致。RT-PCR证实转染细胞有MBLmRNA表达,纯化蛋白经SDS-PAGE电泳可见约29000、58000和87000条带,其中29000蛋白带可与6-His抗体反应。纯化蛋白免疫小鼠所获抗血清ELISA效价是1∶819200,与天然人MBL和重组MBL三聚体糖识别域反应的ELISA效价均为1∶25600。结论获得了表达中国人MBL的CHO细胞株和重组人MBL,为MBL分子的进一步研究提供了条件。 展开更多
关键词 甘露聚糖结合凝集素 表达载体 cho细胞
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早老素1基因在转染CHO细胞中的表达及其与γ-分泌酶的关系 被引量:10
10
作者 梁平 潘阳杏 +2 位作者 赵雪梅 杜洪震 张冀民 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期297-301,共5页
目的 研究早老素1(PS1)在淀粉样前体蛋白(APP)加工生成β淀粉样多肽(Aβ)过程中的作用及其与γ分泌酶的关系。方法 构建APP和PS1双基因稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株,应用免疫沉淀和印迹、脉冲追踪及ELISA方法,检测PS1的表达和... 目的 研究早老素1(PS1)在淀粉样前体蛋白(APP)加工生成β淀粉样多肽(Aβ)过程中的作用及其与γ分泌酶的关系。方法 构建APP和PS1双基因稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株,应用免疫沉淀和印迹、脉冲追踪及ELISA方法,检测PS1的表达和代谢半衰期,分析对Aβ分泌的影响及与γ分泌酶功能的关系。结果 PS1转染的CHO细胞(APP PS1)表达的主要是相对分子质量为45 000的全长PS1蛋白,其半衰期短于1h,而其活性片段的N 末端片段和C 末端片段则相对稳定,半衰期接近16h。突变型PS1(M146L)转染细胞分泌的Aβ总量与野生型PS1转染细胞没有明显差别,但分泌的Aβ亚型Aβ1 42是未转染PS1或野生型PS1转染细胞分泌的将近2倍。结论 PS1参与了APP加工生成Aβ的过程,突变型PS1 (M146L)导致Aβ1 42的分泌增加,提示PS1可能就是预期的γ分泌酶。 展开更多
关键词 早老素1 基因转染 cho细胞 基因表达 Γ-分泌酶 APP 阿尔茨海默病 淀粉样Β蛋白
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磁珠分离结合定量PCR法检测单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留量 被引量:13
11
作者 王兰 李萌 +2 位作者 郭玮 于传飞 高凯 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期555-558,共4页
目的 利用磁珠分离法结合定量PCR技术,建立单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用。方法通过磁珠分离法提取样品中的残留DNA,再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,根据标准曲线对样品中的... 目的 利用磁珠分离法结合定量PCR技术,建立单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用。方法通过磁珠分离法提取样品中的残留DNA,再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,根据标准曲线对样品中的DNA残留量进行分析。对建立的方法进行种属特异性、准确性及精密性验证,并对5个厂家15批单克隆抗体类产品中的残留DNA进行测定。结果该方法检测CHO细胞DNA残留的最低准确定量浓度可达1×10^-3pg/μl,DNA含量在1×10^-3~10^2 pg/μl范围内曲线线性良好,标准曲线的相关系数为0.994;该方法能特异性地检测CHO细胞DNA,对其他种属的DNA无扩增反应;该方法检测不同DNA加标量样品的DNA回收率相近,均值均在90%以上,3次测定的相对标准偏差均小于20%,92.6%加标样品的DNA回收率在70%~130%之间;该方法检测15批单克隆抗体类产品的DNA残留量均小于100pg/剂量,符合《中国药典》三部(2010版)有关CHO细胞残余DNA的要求。结论磁珠分离法可解决残留DNA检测中样品前处理的技术难点,定量PCR法能够简便、快速、准确地对不同工艺的单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留进行定量测定。 展开更多
关键词 磁珠分离法 定量聚合酶链反应 cho细胞 DNA残留 单克隆抗体 质量控制
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纳米二氧化钛对卵巢肿瘤细胞的选择性凋亡的诱导作用 被引量:9
12
作者 朱融融 汪世龙 +3 位作者 陈小平 孙晓宇 张蕤 姚思德 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第21期2161-2164,共4页
以人肾上皮细胞293T和中国仓鼠卵巢肿瘤细胞CHO为研究对象,通过MTT法酶标仪检测、倒置显微镜观察和DNAladder实验等方法,研究了锐钛型TiO2对它们的选择性凋亡诱导作用.实验结果表明,纳米TiO2对肿瘤细胞具有非常明显的毒性作用,可侵入细... 以人肾上皮细胞293T和中国仓鼠卵巢肿瘤细胞CHO为研究对象,通过MTT法酶标仪检测、倒置显微镜观察和DNAladder实验等方法,研究了锐钛型TiO2对它们的选择性凋亡诱导作用.实验结果表明,纳米TiO2对肿瘤细胞具有非常明显的毒性作用,可侵入细胞内部,诱导CHO细胞产生细胞凋亡.对于293T细胞,虽然会抑制其增殖,但不能够进入细胞膜内,没有细胞凋亡现象的发生.这一结论为利用纳米TiO2治疗癌症提出了一条新思路. 展开更多
关键词 纳米TIO2 cho细胞 293T细胞 细胞凋亡 细胞毒性
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改造中国仓鼠卵巢细胞 被引量:8
13
作者 来大志 齐连权 +2 位作者 于长明 王海涛 陈薇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期415-419,共5页
与原核细胞、酵母细胞以及昆虫细胞相比 ,中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)作为宿主细胞表达的外源蛋白最接近其天然构象 ,因而CHO细胞表达系统是生物工程制药最为理想的表达系统。但这种系统也存在诸多缺点。如在大规模培养中CHO细胞会面临着对... 与原核细胞、酵母细胞以及昆虫细胞相比 ,中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)作为宿主细胞表达的外源蛋白最接近其天然构象 ,因而CHO细胞表达系统是生物工程制药最为理想的表达系统。但这种系统也存在诸多缺点。如在大规模培养中CHO细胞会面临着对无血清培养基的适应性差、细胞无限度增殖以及细胞凋亡等很多难题。所以除了在培养基、培养条件和表达载体方面下功夫优化该系统外 ,对CHO细胞本身进行改造已成为优化CHO表达系统的另一热点。 展开更多
关键词 改造 中国仓鼠卵巢细胞 cho细胞 大规模培养 细胞凋亡 细胞黏附 细胞周期
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染料木黄酮对体外细胞增殖的抑制作用研究 被引量:6
14
作者 王晨 张立实 何涛 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期1056-1058,共3页
目的 研究染料木黄酮的抗癌作用及其对正常细胞的毒性大小。方法 观察染料木黄酮对肺癌YTMLC -90、胃低分化腺癌SGC - 790 1、中国仓鼠卵巢CHO细胞株体外增殖和正常人外周血淋巴细胞活性和功能状态的影响。结果 染料木黄酮对正常人... 目的 研究染料木黄酮的抗癌作用及其对正常细胞的毒性大小。方法 观察染料木黄酮对肺癌YTMLC -90、胃低分化腺癌SGC - 790 1、中国仓鼠卵巢CHO细胞株体外增殖和正常人外周血淋巴细胞活性和功能状态的影响。结果 染料木黄酮对正常人外周血淋巴细胞基本无抑制作用 ,而对YTMLC - 90、SGC - 790 1均有抑制作用 ,且随着剂量的增加和时间的延长 ,抑制作用也相应增强 ,其最低有效抑制浓度为 18 5 μmol/L。 结论 染料木黄酮可抑制肿瘤细胞增殖 ,可作为一种较好的防癌抗癌物质在肿瘤的治疗和预防过程中发挥重要的作用。但本研究还发现染料木黄酮对CHO细胞也有一定的抑制作用 。 展开更多
关键词 染料木黄酮 体外细胞增殖 抑制作用 研究 YTMLC-90细胞 SGC-7901细胞 cho细胞
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Epstein─Barr病毒膜抗原在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达 被引量:11
15
作者 郑一敏 皮国华 谷淑燕 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期107-113,共7页
将切去3’端穿膜序列的EB病毒膜抗原(MA)基因,插入pSV2-dhfr质粒的SV40早期启动子下游,构建了真核表达载体pSV2-dhfrGPTR,使两个SV40早期启动子分别调控MA和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因... 将切去3’端穿膜序列的EB病毒膜抗原(MA)基因,插入pSV2-dhfr质粒的SV40早期启动子下游,构建了真核表达载体pSV2-dhfrGPTR,使两个SV40早期启动子分别调控MA和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因。将该重组质粒转化CHO-dhfr细胞,在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达EBV-MA的克隆细胞系。westernblot分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为340kd和220kd。经过细Sepharose2B琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠,2周后小鼠血清中出现明显的gp340/220特异性抗体,表明切去嵌膜区结构的EBV-MA基因在CHO细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性,可望成为EB病毒人用基因工程亚单位疫苗。 展开更多
关键词 膜抗原 表达 EB病毒 基因工程疫苗 cho细胞
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喜树内生真菌的分离及其抗肿瘤活性菌株的筛选 被引量:9
16
作者 陆荣 刘小娟 +2 位作者 樊美珍 侯奎 刘玉军 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期76-79,共4页
以中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)株作为模型,用Resazurin法检测生长抑制率,对197株喜树内生真菌次生代谢产物进行体外抗肿瘤活性试验。结果发现,不同采集部位及不同地理环境分离出的菌株抗肿瘤活性有明显差异,其中以树皮中分离出的内生真... 以中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)株作为模型,用Resazurin法检测生长抑制率,对197株喜树内生真菌次生代谢产物进行体外抗肿瘤活性试验。结果发现,不同采集部位及不同地理环境分离出的菌株抗肿瘤活性有明显差异,其中以树皮中分离出的内生真菌具有抗肿瘤活性的比例最高。从采集的地理位置分析,由安徽黄山标本所分离的内生真菌抗肿瘤活性菌株比例高于其他2个采集地点。1株从黄山喜树果实上分离的菌株对CHO细胞的抑制率超过50%,初步鉴定为Rhizopycnis属真菌。 展开更多
关键词 喜树 内生真菌 抗肿瘤活性 cho细胞
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CpG对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响 被引量:8
17
作者 王四清 田淑芳 +6 位作者 许洪林 郭斐 王文 陈红 王秀平 王世峰 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期108-112,共5页
为了研究CpG -寡脱氧核苷酸 (CpG -OPN)作为佐剂对乙型肝炎基因重组 (CHO细胞 )疫苗 (简称乙肝疫苗 )免疫效果的影响 ,以乙肝疫苗加Al(OH) 3 、疫苗加CpG和疫苗加Al(OH) 3 与CpG3三种配伍方式 ,通过腹腔、皮下或肌内 3种不同途径免疫Bal... 为了研究CpG -寡脱氧核苷酸 (CpG -OPN)作为佐剂对乙型肝炎基因重组 (CHO细胞 )疫苗 (简称乙肝疫苗 )免疫效果的影响 ,以乙肝疫苗加Al(OH) 3 、疫苗加CpG和疫苗加Al(OH) 3 与CpG3三种配伍方式 ,通过腹腔、皮下或肌内 3种不同途径免疫Balb/c小鼠 ,观察不同免疫途径和不同配伍的免疫效果。同时又将疫苗与CpG混合后在4℃存放 6个月再免疫小鼠 ,观察CpG的稳定性。结果表明 :① 3种免疫途径中以肌内注射效果最好 ,这在使用CpG的实验组尤为明显 ,在该组肌内免疫的ED50 比腹腔的低了 10倍 ,而诱发的抗体滴度提高了 3倍 ;②疫苗与CpG、Al(OH) 3 联合使用的免疫效果最好 ,在肌内免疫时联合使用的免疫效果比疫苗 +Al(OH) 3 提高 4倍 ,比疫苗+CpG提高 7倍 ;③疫苗 +Al(OH) 3 免疫时 ,表现为IgG1抗体亚型占优势 ,而再加入CpG后则IgG1和IgG2a均升高 ,以IgG2a最显著 ;④疫苗与CpG混合后 4℃保存半年 。 展开更多
关键词 CPG 乙型肝炎 基因重组 cho细胞 疫苗 免疫效果 CpG佐剂
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人IL-24基因在CHO细胞中的表达及其抗肿瘤效应 被引量:11
18
作者 缪竞诚 陈雄艳 +2 位作者 盛伟华 谢宇锋 杨吉成 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期567-570,共4页
目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性。方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR... 目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性。方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR鉴定后用MTT法、Ho-echst染色和流式细胞术检测CHO细胞表达的rhIL-24诱导A549人肺腺癌细胞凋亡的抗肿瘤效应,用ELISA检测其刺激免疫细胞分泌IL-6和IFN-γ的功能。结果经双酶切和PCR鉴定,重组真核表达载体构建正确,人IL-24在CHO细胞中获得稳定表达,且所表达的人IL-24具有较强的诱导A549人肺腺癌细胞凋亡及上调免疫细胞表达IL-6和IFN-γ的免疫刺激活性。结论人IL-24基因的稳定表达和抗肿瘤效应的实验研究,为进一步研究人IL-24抗肿瘤的分子机制及潜在的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素-24 稳定转染 cho细胞 凋亡
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重组BPI_(23)-Fcγ1融合蛋白在CHO细胞中的表达 被引量:6
19
作者 徐俊杰 徐静 +1 位作者 童贻刚 王海涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期587-589,共3页
The fusion gene of BPI 23 and human Fcγ1 was obtained by PCR method,and the expression plasmid was constructed to express recombinant BPI 23 \|Fcγ1 fusion protein in CHO cells.After transfection with the plasmid and... The fusion gene of BPI 23 and human Fcγ1 was obtained by PCR method,and the expression plasmid was constructed to express recombinant BPI 23 \|Fcγ1 fusion protein in CHO cells.After transfection with the plasmid and selection by methotrexate,the cell lines expressing the fusion protein were obtained.The recombinant protein was purified using cation\|exchange chromatography and its bioactivity was proved with bactericidal assays. 展开更多
关键词 杀菌/通透性增加蛋白 BPI23-Fcγ1融合蛋白 表达 cho细胞 重组
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替换稀有密码子提高HBsAg在CHO细胞中的表达量 被引量:5
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作者 单连慧 时成波 +3 位作者 孔双泉 田晓乐 杨亦代 盛军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期214-216,共3页
目的 通过替换S基因稀有密码子 ,提高HBsAg在CHO细胞中的表达量。方法 利用重叠PCR技术 ,将S基因上 3个稀有密码子替换成哺乳动物细胞偏爱的密码子 ,得到Sm 基因。把S和Sm 基因分别克隆到pCI载体上 ,并转染CHO(dhfr )细胞 ,利用ELISA... 目的 通过替换S基因稀有密码子 ,提高HBsAg在CHO细胞中的表达量。方法 利用重叠PCR技术 ,将S基因上 3个稀有密码子替换成哺乳动物细胞偏爱的密码子 ,得到Sm 基因。把S和Sm 基因分别克隆到pCI载体上 ,并转染CHO(dhfr )细胞 ,利用ELISA方法检测HBsAg的表达量。结果 获得预期的Sm 基因。在CHO细胞中 ,Sm 基因表达量明显高于S基因。 展开更多
关键词 重叠PCR 稀有密码子 HBSAG cho细胞 表达 基因
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