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家蝇天蚕素Cec4的原核表达与纯化 被引量：2
1
作者 彭建 刘巍巍 +3 位作者 吴兆颖 杨燕琴 尚小丽 吴建伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期182-185,共4页
目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克... 目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克隆。用限制性内切酶BamHI和HindⅢ双酶切目的基因和质粒,构建GST表达载体pGEX 4T-1-Cec4,转化到大肠埃希菌BL-21中,利用IPTG诱导表达重组Cec4蛋白,经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果 PCR扩增获得的Cec4基因全长为192 bp,连接到表达载体pGEX 4T-1获得重组质粒pGEX 4T-1-Cec4,转化大肠埃希菌BL-21后经30℃、0.6 mmol/L的IPTG诱导18 h,表达相对分子质量约为26×10~3上清表达的融合蛋白,亲和层析纯化后的蛋白浓度为0.117 mg/ml。结论成功构建重组质粒pGEX 4T-1-Cec4并表达和纯化获得Cec4蛋白,为其进一步研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 家蝇 cec4 克隆 原核表达
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抗菌肽Cec4a的重组表达和抗菌活性研究 被引量：1
2
作者 陈素芳 夏明印 +3 位作者 曾丽艳 安晓琴 田敏芳 彭建 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期12-18,共7页
目的:构建Cec4a的原核重组表达体系,通过诱导表达、酶切纯化获得重组蛋白,并检测产物的抗菌活性。方法:基于Cec4a的序列设计引物,克隆Cec4a基因的DNA片段。利用原核表达载体(p Cold-SUMO)构建重组原核表达质粒,并将其转化到大肠杆菌C41(... 目的:构建Cec4a的原核重组表达体系,通过诱导表达、酶切纯化获得重组蛋白,并检测产物的抗菌活性。方法:基于Cec4a的序列设计引物,克隆Cec4a基因的DNA片段。利用原核表达载体(p Cold-SUMO)构建重组原核表达质粒,并将其转化到大肠杆菌C41(DE3)等感受态细胞,使用IPTG进行诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析柱纯化,获得含有His-SUMO标签的重组Cec4a融合蛋白。在SUMO蛋白酶酶切后,再次使用Ni-NTA亲和层析纯化,得到目的蛋白,最后用鲍曼不动杆菌(ATCC19606)作为指示菌检测表达产物的抗菌活性。结果:成功构建p Cold-SUMO-Cec4a原核表达质粒,测序分析其序列与预期结果一致。Cec4a融合蛋白表达量为42.8mg/L,纯化后的Cec4a重组蛋白对鲍曼不动杆菌的MIC为4μg/m L。结论:通过原核表达,并经Ni-NTA亲和层析纯化,获得了具有抗菌活性的重组蛋白Cec4a,为研究Cec4a的生物活性、抗菌机制及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 cec4a SUMO 鲍曼不动杆菌 重组表达
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家蝇天蚕素抗菌肽Cec4对鲍曼不动杆菌抑菌活性的研究 被引量：7
3
作者 龙慧玲 杨举豪 +1 位作者 彭建 吴建伟 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期891-896,共6页
目的通过化学合成家蝇抗菌肽Cec4，以鲍曼不动杆菌为指示菌，研究其抑菌活性。方法采用微量稀释法测定最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）、最小杀菌浓度（min-imal bacltericidal concentration，MBC），酶标仪动... 目的通过化学合成家蝇抗菌肽Cec4，以鲍曼不动杆菌为指示菌，研究其抑菌活性。方法采用微量稀释法测定最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）、最小杀菌浓度（min-imal bacltericidal concentration，MBC），酶标仪动态监测家蝇抗菌肽Cec4对细菌生长的影响并绘制时间．杀菌曲线（time-kill chive），评估NaCl、胰蛋白酶、pH值等不同因素对Cec4抑菌活性的影响，并通过扫描电镜观察（scanning electron microscope，SEM）Cec4对细菌微观结构的破坏程度。结果家蝇抗菌肽Cee4对鲍曼不动杆菌MIC和MBC分别是4μg/ml、8μg／ml。Time-kill curve结果显示，抗菌肽Cec4在24h内都具有较高抗菌效力。不同NaCl离子强度（0～200mmol／L）条件下，对Cec4抗菌活性几乎无影响。高浓度胰蛋白酶1．0ms／ml会抑制Cec4抗菌活性。不同的pH值（6．5、7．5、8．8）条件下，溶液中Cec4抗菌活性最适pH值为8．8。SEM结果显示对细菌细胞损伤程度与作用时间呈正相关。结论本研究新发现的家蝇抗菌肽Cec4对鲍曼不动杆菌具有较好抑菌活性，能在较短的时问内清除鲍曼不动杆菌，其抗菌能力持续24h以上。在钠离子强度、胰蛋白酶、pH值等不同影响因素作用下，家蝇抗菌肽Cec4都具较好稳定性。电镜观察发现家蝇抗菌肽Cec4能破坏细菌膜的完整性，致使其内容物大量外泄，最后导致死亡。基于上述结果，将进一步研究家蝇抗菌肽Cec4对鲍曼不动杆菌的抗菌机制。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽cec4 鲍曼不动杆菌 抑菌活性 影响因素
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抗菌肽Cecropin4与抗生素联合的体外抗菌效果 被引量：3
4
作者 彭建 吴兆颖 +3 位作者 刘巍巍 赵海 朱贵明 曾柱 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第10期1151-1155,共5页
目的:探究抗菌肽Cecropin4(Cec4)分别与3种抗生素联合使用对鲍曼不动杆菌(AB)的体外抗菌效果。方法:采用微量肉汤稀释法测定抗菌肽Cec4、注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠(SCF)、注射用亚胺培南西司他丁钠(IMP)及注射用硫酸多黏菌素B(PB)单用时... 目的:探究抗菌肽Cecropin4(Cec4)分别与3种抗生素联合使用对鲍曼不动杆菌(AB)的体外抗菌效果。方法:采用微量肉汤稀释法测定抗菌肽Cec4、注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠(SCF)、注射用亚胺培南西司他丁钠(IMP)及注射用硫酸多黏菌素B(PB)单用时对AB的最小抑菌浓度(MIC),运用棋盘法检测抗菌肽Cec4分别与这3种抗生素联用时对AB的抑菌效果,用部分抑菌浓度指数(FICindex)反映抗菌肽Cec4分别与这3种抗生素联用对AB的用药效果。结果:抗菌肽Cec4、SCF、IMP及PB对标准、多重耐药和泛耐药AB时菌株的MIC分别为4、16~64、16~64及0.625mg/L;抗菌肽Cec4与PB联合作用于标准AB时、FICindex为0.50,抗菌肽Cec4分别与3种抗生素联合作用于多重耐药和泛耐药AB时,FICindex范围均在0.5~1.0。结论:抗菌肽Cec4与PB联合使用对标准AB表现为协同作用,抗菌肽Cec4分别与3种抗生素联合对多重耐药和泛耐药AB表现为相加作用。 展开更多
关键词 抗菌肽cec4 鲍曼不动杆菌 抑菌活性 联合用药 耐药菌 多黏菌素B
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