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表达CDV F蛋白和H蛋白的重组人5型腺病毒的构建及评价
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作者 时子淇 阚龙飞 +7 位作者 孟宪踊 王建忠 赵永坤 闫飞虎 王铁成 冯娜 高玉伟 夏咸柱 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期858-867,共10页
旨在构建表达犬瘟热弱毒疫苗株CDV11融合蛋白(F)和血凝素蛋白(H)的复制缺陷型重组腺病毒,对重组病毒目的蛋白表达进行鉴定,并研究其免疫原性。利用无缝克隆技术将绿色荧光蛋白基因(EGFP)和CDV11F/CDV11H基因连接到入门载体pENTRTM/D-TOP... 旨在构建表达犬瘟热弱毒疫苗株CDV11融合蛋白(F)和血凝素蛋白(H)的复制缺陷型重组腺病毒,对重组病毒目的蛋白表达进行鉴定,并研究其免疫原性。利用无缝克隆技术将绿色荧光蛋白基因(EGFP)和CDV11F/CDV11H基因连接到入门载体pENTRTM/D-TOPO中,获得重组入门质粒pENTR-EGFP-CDV11F和p ENTR-EGFP-CDV11H。随后使用Gateway技术分别将EGFP-CDV11F和EGFP-CDV11H插入到腺病毒骨架载体中,获得重组质粒pAd-EGFP-CDV11F和pAd-EGFP-CDV11H;将重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞以拯救重组腺病毒rAd-EGFP-CDV11F和rAd-EGFP-CDV11H。经荧光显微镜观察、间接免疫荧光鉴定以及蛋白免疫印迹鉴定,重组腺病毒rAd-EGFP-CDV11F和rAd-EGFP-CDV11H可分别在293A细胞、Vero细胞中表达F蛋白和H蛋白,rAd-EGFP-CDV11F滴度可达1.62×10^(9)IFU/mL,rAd-EGFPCDV11H滴度可达1.5×10^(9)IFU/mL。重组腺病毒rAd-EGFP-CDV11F和rAd-EGFP-CDV11H分别通过肌肉注射和滴鼻途径免疫小鼠,并评价免疫后35 d内小鼠体内CDV中和抗体以及IgG的变化情况。结果表明,重组腺病毒rAd-EGFP-CDV11F和rAd-EGFP-CDV11H通过肌肉注射和滴鼻途径免疫均能诱导小鼠产生CDV中和抗体以及IgG,CDV中和抗体水平可达1×22~1×26,IgG抗体效价最高可达1∶3 200~1∶25 600;此外通过肌肉注射途径单独免疫重组腺病毒rAd-EGFP-CDV11H后小鼠体内产生CDV中和抗体水平最高。结论:本研究成功构建了两株携带EGFP标签、能表达CDV11 F和H蛋白的重组腺病毒rAd-EGFPCDV11F和rAd-EGFP-CDV11H,它们具有良好的免疫原性,肌肉注射及滴鼻免疫均可诱导机体产生CDV中和抗体以及特异性IgG。这一结果为进一步研究CDV重组腺病毒载体疫苗及黏膜免疫疫苗提供了理论依据。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 cdv11疫苗株 人5型腺病毒 F蛋白 H蛋白
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