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题名弓形虫RH株CDPK1蛋白表达及鉴定
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作者
张曼玉
蒋蔚
陈芸
刘旗
段倩玉
耿小玲
王权
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机构
中国农业科学院上海兽医研究所
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出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2022年第3期181-188,共8页
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基金
上海市科技兴农项目(沪农科创字(2019)第3-3号)。
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文摘
为了研究刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)CDPK1的生物学功能,并深入了解其在免疫保护中所发挥的作用,本试验以弓形虫RH株cDNA为模板,表达CDPK1基因并鉴定其生物学功能。本研究将截短的CDPK1基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中后,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳分析;利用GST标签亲和层析法纯化重组蛋白,以纯化后蛋白为抗原免疫新西兰兔,制备抗CDPK1多克隆抗体;通过蛋白质印迹技术(Western blot)及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定重组蛋白的免疫活性。结果显示:从弓形虫RH株cDNA中扩增出489 bp截短的CDPK1基因片段,编码162个氨基酸,与GenBank中已知基因序列及氨基酸序列的同源性为100%;获得的重组蛋白CDPK1分子量约为44 kDa,且在37℃、180 rpm和IPTG浓度0.2 mmol/L条件下,重组蛋白可获得高效可溶性表达;Western blot分析发现,重组蛋白能被GST标签抗体识别,不能被感染弓形虫的犬阳性血清识别,说明此重组蛋白不具有反应原性;IFA结果显示,重组蛋白的抗血清能够识别刚地弓形虫的天然蛋白CDPK1,说明重组蛋白CDPK1具有良好的免疫原性,且证实其主要位于刚地弓形虫虫体的细胞质和细胞核。本研究成功获得重组蛋白CDPK1及CDPK1多克隆抗体,为CDPK1特性与功能的研究奠定基础。
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关键词
弓形虫
cdpk1
原核表达
多克隆抗体
免疫保护
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Keywords
Toxoplasma gondii
cdpk1
prokaryotic expression
polyclonal antibody
immune protection
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分类号
S858.26
[农业科学—临床兽医学]
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题名弓形虫CDPK1-EF基因的克隆与原核表达
被引量：2
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作者
刘思嘉
徐前明
李培英
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机构
安徽农业大学动物科技学院
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出处
《畜牧与兽医》
北大核心
2014年第2期5-9,共5页
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基金
中国农科院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金(sICLVEB20.12KFKTO02)
安徽省生猪产业技术体系项目
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文摘
CDPK是一类钙依赖蛋白激酶,其可参与调控寄生虫入侵,外出宿主细胞,配子的形成及在宿主体内移行等。采用RT-PCR技术,扩增弓形虫RH株目的基因钙依赖蛋白激酶EF模体(CDPK1-EF),然后将其克隆至表达载体pET-32a,以构建重组质粒ET-32a-CDPK1-EF,经IPTG诱导目的蛋白表达,并采用Ni-NTA亲和层析法纯化,最后经SDS-PAGE分析重组表达蛋白。结果,成功地克隆出弓形虫CDPK1-EF基因,序列比对表明,其与GenBank报道的相关序列同源性达100%。采用SDS-PAGE技术对诱导表达蛋白以及纯化产物检测发现37 ku目的蛋白出现,与预期结果相一致。本文在国内首次成功克隆和表达弓形虫RH株CDPK1-EF基因,这为研究该基因功能及分布特征等提供了基础。
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关键词
弓形虫
cdpk1-EF基因
克隆
表达
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Keywords
Toxoplasma gondii
cdpk1-EF gene
cloning
expression
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分类号
S852.72
[农业科学—基础兽医学]
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