期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到123篇文章
< 1 2 … 7 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
美洲大蠊若虫cDNA表达文库的构建和初步鉴定 被引量：21
1
作者 刘志刚 黄炯烈 +3 位作者 朱振宇 周珍文 刘玉琳 龚十妹 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第S2期9-11,共3页
目的　构建美洲大蠊若虫cDNA表达文库。方法　应用定向克隆技术将相应cDNA片段插入λExCell NotⅠ EcoRⅠ CIP载体的NotⅠ和EcoRⅠ双酶切位点间 ,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果　已成功构建一个含 1.2 9× 10 6 个重... 目的　构建美洲大蠊若虫cDNA表达文库。方法　应用定向克隆技术将相应cDNA片段插入λExCell NotⅠ EcoRⅠ CIP载体的NotⅠ和EcoRⅠ双酶切位点间 ,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果　已成功构建一个含 1.2 9× 10 6 个重组子的cDNA表达文库 ,重组率为 10 0 % ,插入片段大小平均约 1.12kb。 展开更多
关键词 美洲大蠊若虫 cdna表达文库 鉴定 重组变应原
原文传递
平颏海蛇毒腺cDNA表达文库的构建 被引量：13
2
作者 钟肖芬 卫剑文 +2 位作者 赵贵军 吴文言 徐安龙 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期66-69,共4页
以真核表达载体质粒pcDNA3为载体 ,成功构建了一个高质量的平颏海蛇毒腺cDNA表达文库 ,这是国内首个海蛇cDNA文库 .通过对亚文库克隆的大规模序列测定和分析 ,发现了 38个海蛇新基因序列 ,其中包括神经毒素基因、磷酸脂酶A2 基因和半胱... 以真核表达载体质粒pcDNA3为载体 ,成功构建了一个高质量的平颏海蛇毒腺cDNA表达文库 ,这是国内首个海蛇cDNA文库 .通过对亚文库克隆的大规模序列测定和分析 ,发现了 38个海蛇新基因序列 ,其中包括神经毒素基因、磷酸脂酶A2 基因和半胱氨酸丰富毒蛋白基因共 10个编码海蛇毒素蛋白的新基因 . 展开更多
关键词 平颏海蛇 毒腺 cdna表达文库
下载PDF
Gateway~技术构建交链孢菌JH505 cDNA文库 被引量：12
3
作者 龙松华 张宁 +2 位作者 邱德文 黎定军 黄炜 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期963-965,共3页
Gateway○R技术构建cDNA文库,利用λ噬菌体的位点特异性重组,避免使用限制性内酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。首次应用Gateway○R技术构建交链孢菌cDNA文库,经检测cDNA入门文库的滴度达到1×107cfumL,文库总... Gateway○R技术构建cDNA文库,利用λ噬菌体的位点特异性重组,避免使用限制性内酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。首次应用Gateway○R技术构建交链孢菌cDNA文库,经检测cDNA入门文库的滴度达到1×107cfumL,文库总容量为9×107cfu,平均插入片段为1510bp。通过LR重组把入门文库转换为表达文库,表达文库的滴度为1.58×106cfu/mL,文库总容量为6.32×106cfu,平均插入片段大小为1680bp。表达文库的构建为进一步克隆植物激活蛋白基因打下了基础。 展开更多
关键词 GATEWAY技术 交链孢菌 激活蛋白 cdna入门文库 cdna表达文库
下载PDF
赤魟尾刺cDNA表达文库的构建 被引量：11
4
作者 涂洪斌 卫剑文 +4 位作者 姜孝玉 陈慧萍 钟肖芬 吴文言 徐安龙 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期906-909,共4页
目的　以赤尾刺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA 3 0为基础的赤尾刺cDNA表达文库。方法　应用SMARTTMcDNALibraryConstruction技术和初步生物信息学分析等方法。结果　通过对亚文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,已获得... 目的　以赤尾刺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA 3 0为基础的赤尾刺cDNA表达文库。方法　应用SMARTTMcDNALibraryConstruction技术和初步生物信息学分析等方法。结果　通过对亚文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,已获得了 5 6个赤新EST序列 ,其中已确定的全长cDNA克隆有 2 4个 ,包括IPL肿瘤抑制因子、亲环素cyclophilinA、硒蛋白selenoproteinW、半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatinA、tyrosyl tRNAsynthetase和calcineurin类似物蛋白等。结论　这些基因在赤中绝大多数均为首次发现。赤尾刺cDNA表达文库的成功构建 。 展开更多
关键词 赤魟 尾刺 cdna表达文库 海洋药物 中药
下载PDF
恶性疟原虫(海南株)cDNA表达文库的构建及初步鉴定 被引量：11
5
作者 王燕妮 肖谷田 +4 位作者 毕惠祥 李明 金丽娟 李英杰 谢毅 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期21-25,共5页
目的 :构建恶性疟原虫 c DNA表达文库。方法 :采用“一步法”提取红内期恶性疟原虫12 2 4 μg RNA,经 Oligo( d T)纤维素柱纯化得到 35.84 μg poly ( A) +m RNA。取 10 μg m RNA反转录得到 1.75μg平端双链 c DNA,与含 Eco RI,Not I,S... 目的 :构建恶性疟原虫 c DNA表达文库。方法 :采用“一步法”提取红内期恶性疟原虫12 2 4 μg RNA,经 Oligo( d T)纤维素柱纯化得到 35.84 μg poly ( A) +m RNA。取 10 μg m RNA反转录得到 1.75μg平端双链 c DNA,与含 Eco RI,Not I,Sal I酶切位点的衔接头连接后 ,经分级分离柱纯化回收到 2 0 0 ng大小主要在 50 0 bp- 7kb左右的 c DNA片段。取 50 ng c DNA与λgt11噬菌体臂连接后体外包装 ,完成建库。并采用 PCR方法初步鉴定该文库。结果 :已构建一个含 10 6个重组子的 c DNA表达文库。结论 :文库容量及插入 c DNA片段的大小适合于进一步研究。 展开更多
关键词 恶性 疟原虫 cdna表达文库 鉴定
下载PDF
华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定 被引量：13
6
作者 陈守义 余新炳 +5 位作者 徐劲 虢国泰 蒋忠军 吴德 胡旭初 李军涛 《热带医学杂志》 CAS 2003年第1期22-24,8,共4页
目的 构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA。PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后... 目的 构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA。PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行SfiI酶切;用ChromaSpin 400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1％琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收0.4～4kb的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌斑,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果 未扩增文库滴度达7.0×107pfu/ml,扩增文库滴度达2.5×108pfu/ml;用载体两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:扩增文库中,含1kb以上的占30％左右,1kb～500bp占69％。结论已成功地获得一高质量的华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库。 展开更多
关键词 华支睾吸虫囊蚴 cdna表达文库 构建 鉴定
下载PDF
甜菜夜蛾肠粘蛋白cDNA基因的分子克隆与序列分析 被引量：13
7
作者 张霞 李国勋 郭巍 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期3898-3904,共7页
【目的】围食膜(peritrophic membrane,PM)是衬托于昆虫中肠内的一种无脊椎动物特有的几丁质—蛋白复合结构,它能够促进食物消化,保护消化道免受微生物入侵。昆虫肠粘蛋白(ⅡM)是其重要组分之一。因此,作为中肠防御系统的PM已成为害虫... 【目的】围食膜(peritrophic membrane,PM)是衬托于昆虫中肠内的一种无脊椎动物特有的几丁质—蛋白复合结构,它能够促进食物消化,保护消化道免受微生物入侵。昆虫肠粘蛋白(ⅡM)是其重要组分之一。因此,作为中肠防御系统的PM已成为害虫生物防治的新靶标。分离和鉴定甜菜夜蛾肠粘蛋白基因cDNA。【方法】以甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)中肠为材料,依据stratagene公司试剂盒方法,构建甜菜夜蛾中肠cDNA表达文库。依据现代免疫学原理,利用粉纹夜蛾肠粘蛋白特异性多克隆抗体(anti-ⅡMantiserum)筛选该文库。【结果】cDNA表达文库滴度为8.51×106pfu/ml,重组率为99.97%。筛选文库得到一个编码甜菜夜蛾肠粘蛋白的cDNA克隆SeⅡM-8。核酸序列分析显示,该cDNA长为2234bp,在polyA末端上游24bp处有一个多聚腺苷酸信号序列AAATTA。最长读码框(ORF)编码714个氨基酸,与粘虫肠粘蛋白(Mamestra configurata intestinal mucin)序列相似性为42%。结构域分析表明,它具有5个几丁质结合功能域;一个富含苏氨酸类粘蛋白结构域,重复序列为TTTQAPTTT,高度O-联糖基化;一个天冬氨酸富集区,序列DDDKPGCNGNCPE重复达12次,该区域在已知的昆虫肠粘蛋白中属首次发现。与已知肠粘蛋白比较,推测其5′端还应包括信号肽序列和几丁质结合功能域的未知序列。SeⅡM-8基因在GenBank登录号为EU047712。【结论】从本研究构建的高质量甜菜夜蛾中肠cDNA表达文库中筛选得到一个新的围食膜蛋白基因SeⅡM-8。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 中肠 cdna表达文库 昆虫肠粘蛋白 SeⅡM-8
下载PDF
猪囊尾蚴cDNA表达文库构建及抗原基因筛选 被引量：12
8
作者 沈斌 高荣 +2 位作者 朱锦 魏竹波 刘世贵 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期57-59,共3页
采用Ｑｕｉｃｋ Ｐｒｅｐ ｍ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ 试剂盒提取猪囊尾蚴ｍ ＲＮＡ；Ｔｉｍ ｅ－ Ｓａｖｅｒ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ试剂盒反转录合成双链ｃＤＮＡ，并在末端加上ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩａｄａｐｔｏｒ，... 采用Ｑｕｉｃｋ Ｐｒｅｐ ｍ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ 试剂盒提取猪囊尾蚴ｍ ＲＮＡ；Ｔｉｍ ｅ－ Ｓａｖｅｒ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ试剂盒反转录合成双链ｃＤＮＡ，并在末端加上ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩａｄａｐｔｏｒ，修饰后的ｃＤＮＡ 与λｇｔｌｌＥｃｏＲＩ臂连接，体外包装为λ噬菌体颗粒；感染Ｅ．ｃｏｌｉＹ１０９０ 构建成功库容量为２×１０６、重组率为８０％ 的ｃＤＮＡ表达文库。利用兔抗猪囊尾蚴虫体抗原和囊液抗原血清分别对一部分文库进行免疫印迹筛选，分别获得８ 个阳性克隆。提取阳性克隆ＤＮＡ，利用ＰＣＲ法从重组噬菌体ＤＮＡ中扩增出ｃＤＮＡ片段，长度自４００—９００ｂｐ。本文工作为研制猪囊尾蚴核酸疫苗打下了基础。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 cdna表达文库 抗原基因 筛选
下载PDF
霜天蛾cDNA表达文库的构建和初步鉴定 被引量：11
9
作者 孙秀珍 刘昀 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期244-246,279,共4页
目的构建霜天蛾cDNA表达文库,为进一步筛选霜天蛾主要变应原、制备重组变应原奠定基础。方法利用Trizol法抽提霜天蛾RNA,经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后得到mRNA,反转录合成dscDNA,连接EcoRⅠ接头,末端磷酸化,XhoⅠ消化,将双末端黏性化的... 目的构建霜天蛾cDNA表达文库,为进一步筛选霜天蛾主要变应原、制备重组变应原奠定基础。方法利用Trizol法抽提霜天蛾RNA,经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后得到mRNA,反转录合成dscDNA,连接EcoRⅠ接头,末端磷酸化,XhoⅠ消化,将双末端黏性化的双链dscDNA经过凝胶柱层析,收集大于400bp的cDNA片段,加工后与UniZAPXRVector连接,经过体外包装,感染宿主菌,构建cDNA文库,检测文库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入的cDNA片段大小进行分析。结果成功构建了一个含有5×105重组子的霜天蛾表达文库,重组率为67%,平均插入片段长度约为1.49kb。结论所建文库容量及插入片段大小合适,适用于筛选目的cDNA克隆。 展开更多
关键词 霜天蛾 cdna表达文库 鉴定
下载PDF
用长距PCR法构建恶性疟原虫cDNA表达文库 被引量：10
10
作者 傅作申 程远国 +7 位作者 张玉静 阮承迈 单成启 古稀波 陈知航 侯禹男 陈泽建 李英 《热带医学杂志》 CAS 2002年第3期225-229,共5页
目的　构建恶性疟原虫cDNA表达文库。方法　用Trizol试剂盒提取总RNA ,以经修饰的SMART寡聚核苷酸引物 CDSⅢ引物直接用总RNA选择性地反转录成单链cDNA ,再用长距PCR(LD)方法选择性地扩增出双链cDNA ,经蛋白酶K消化和酶切后 ,用玻璃奶... 目的　构建恶性疟原虫cDNA表达文库。方法　用Trizol试剂盒提取总RNA ,以经修饰的SMART寡聚核苷酸引物 CDSⅢ引物直接用总RNA选择性地反转录成单链cDNA ,再用长距PCR(LD)方法选择性地扩增出双链cDNA ,经蛋白酶K消化和酶切后 ,用玻璃奶试剂盒回收 2 0 0bp以上DNA片断 ,经与载体λTriplEX2连接和蛋白抽提物体外包装后 ,构建成cDNA文库并对文库进行了初步的鉴定。结果　构建了高滴度 ,高重组率的恶性疟原虫cDNA表达文库。结论　所构建的疟原虫cDNA文库适合进一步筛选抗疟原虫药物结合蛋白基因。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 长距PCR cdna表达文库 玻璃奶试剂
下载PDF
日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的构建和初步分析 被引量：8
11
作者 姜孝玉 涂洪斌 +4 位作者 陈慧萍 卫剑文 杨文利 吴文言 徐安龙 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期424-428,共5页
以海洋生物日本鬼鲉毒腺为材料 ,应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库 .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签 (EST... 以海洋生物日本鬼鲉毒腺为材料 ,应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库 .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签 (ESTs) ,其中已确定全长cDNA的克隆有 35个 ,包括溶细胞素基因、类短链神经毒素蛋白、C型凝集素、巨噬细胞迁移抑制因子、致病相关基因等 ,这些基因在日本鬼鲉中绝大多数为首次发现 .日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的成功构建 ,为深入研究日本鬼鲉毒腺的组分及其分子作用机理奠定了基础 . 展开更多
关键词 日本鬼Yuo 毒腺 cdna表达文库 刺毒鱼类
下载PDF
华支睾吸虫cDNA表达文库的构建及初步筛选 被引量：9
12
作者 陈守义 余新炳 +4 位作者 徐劲 蒋忠军 吴德 何东苟 林睿 《中国热带医学》 CAS 2003年第3期282-284,共3页
目的　构建华支睾吸虫cDNA表达文库 ,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。　方法　提取华支睾吸虫总RNA ;用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒操作方法 ,进行反转录合成双链cDNA ;PCR产物纯化后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSp... 目的　构建华支睾吸虫cDNA表达文库 ,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。　方法　提取华支睾吸虫总RNA ;用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒操作方法 ,进行反转录合成双链cDNA ;PCR产物纯化后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSpin 40 0柱将酶切产物进行分级分离 ,回收 0 .4～ 4kb的组分 ,并与λTriplEx2载体连接、体外蛋白包装 ,产生未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库的扩增 ,并测定扩增文库的滴度及鉴定。　结果　未扩增文库滴度达 7.5× 10 7pfu/ml ,扩增文库滴度达 2 .7× 10 8pfu/ml ;用载体两端的引物进行PCR鉴定 ,显示 :所选噬菌体中均含有重组的cDNA ,大小在 5 0 0bp以上。　结论　已成功地获得一高质量的华支睾吸虫cD 展开更多
关键词 华支睾吸虫 cdna表达文库 构建 筛选
下载PDF
猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆 被引量：6
13
作者 景志忠 郭爱疆 +2 位作者 海岗 宗瑞谦 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期391-396,共6页
研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段1... 研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10ku基因、18ku基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本,说明文库质量高,代表性强。应用快速筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术,成功地筛选和克隆到TsO1基因,其完整阅读框架(ORF)为393bp。将其登录到GenBank(AY327451),经BLAST分析,证实是猪带绦虫六钩蚴发育阶段的1个新免疫原基因。 展开更多
关键词 猪带绦虫 六钩蚴 免疫原 cdna文库 克隆 构建 cdna表达文库 基因组DNA 发育阶段 质粒表达载体 特异性引物 BLAST 基因家族 快速筛选 库容量 代表性 重组率 转录本
下载PDF
利用Gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库 被引量：8
14
作者 李晨 沈海涛 +2 位作者 张煜星 王爱英 祝建波 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2010年第5期534-536,共3页
以天山雪莲为材料,利用gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库。从经低温处理后的天山雪莲叶片中提取并分离mRNA,合成双链cDNA;cDNA经BP重组反应重组到入门载体pDONR222上,构建得到天山雪莲en-try cDNA文库;天山雪莲entry cDNA再经LR重... 以天山雪莲为材料,利用gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库。从经低温处理后的天山雪莲叶片中提取并分离mRNA,合成双链cDNA;cDNA经BP重组反应重组到入门载体pDONR222上,构建得到天山雪莲en-try cDNA文库;天山雪莲entry cDNA再经LR重组反应将雪莲cDNA重组到植物表达载体pLEELA上,从而构建了天山雪莲cDNA表达文库。结果表明:cDNA入门文库滴度达到1.2×107cfu/mL,文库总容量为4.8×107cfu。表达文库的滴度为6.9×106cfu/mL,文库总容量为2.76×107cfu,插入片段平均大小1000 bp。阳性克隆率100%。天山雪莲cDNA表达文库的建立为进一步高通量筛选天山雪莲抗寒基因奠定了基础。 展开更多
关键词 天山雪莲 cdna入门文库 cdna表达文库 GATEWAY技术
下载PDF
SEREX技术筛选及鉴定食管癌肿瘤抗原 被引量：8
15
作者 遇珑 胡海 +3 位作者 冉宇靓 彭良平 李江伟 杨治华 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期100-105,共6页
背景与目的:正常细胞向癌细胞转化过程中,突变的基因或各种异常表达的蛋白可以成为肿瘤抗原诱导机体的免疫反应,因此肿瘤患者的血清中存在着与肿瘤相关的自身抗体。重组cDNA表达文库血清学分析法(serologicalanalysisofrecombinantcDNAe... 背景与目的:正常细胞向癌细胞转化过程中,突变的基因或各种异常表达的蛋白可以成为肿瘤抗原诱导机体的免疫反应,因此肿瘤患者的血清中存在着与肿瘤相关的自身抗体。重组cDNA表达文库血清学分析法(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibraries,SEREX)是利用肿瘤患者血清中的自身抗体筛选、鉴定肿瘤抗原的技术。本研究拟采用SEREX的方法寻找食管癌自身抗体的相关肿瘤抗原,鉴定与食管癌发生、发展相关的基因和免疫治疗分子靶点,并为食管癌的诊断提供候选血清标志物。方法:用食管癌组织建立库容量达1.6×106pfu的cDNA表达文库,SEREX筛选获得21个不同cDNA序列的阳性克隆,进一步使用SADA法分析其中4个抗原在10例食管癌及10例正常人血清中的反应。结果:在Homosapiensdesmin(DES)等21个阳性克隆中,4个克隆与已知EST序列明显无同源性,另外17个克隆与已知基因高度同源。RibosomalproteinS4等4个抗原与食管癌患者和正常人血清反应阳性率分别为40%和0%、60%和10%、70%和20%、30%和20%。结论:RibosomalproteinS4等4个抗原普遍参与了食管癌患者的体液免疫反应,与食管癌患者血清的反应阳性率明显高于正常人的血清。本研究发现的21个食管癌抗原可作为食管癌治疗的潜在分子靶点和食管癌诊断新的候选血清学标志物。 展开更多
关键词 食管肿瘤 肿瘤抗原 SEREX cdna表达文库
下载PDF
华北大黑鳃金龟中肠丝氨酸蛋白酶cDNA克隆、序列分析及表达 被引量：9
16
作者 刘海明 郑桂玲 +1 位作者 李长友 周洪旭 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期147-155,共9页
丝氨酸蛋白酶是昆虫体内一类重要的消化酶,为了了解该类酶的分子特性及功能,本研究利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni围食膜蛋白多克隆抗体筛选华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠cDNA表达文库,首次得到编码华北大黑鳃金龟丝氨酸蛋白酶cDN... 丝氨酸蛋白酶是昆虫体内一类重要的消化酶,为了了解该类酶的分子特性及功能,本研究利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni围食膜蛋白多克隆抗体筛选华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠cDNA表达文库,首次得到编码华北大黑鳃金龟丝氨酸蛋白酶cDNA序列,命名为HoSP1(GenBank登录号为FJ573146)。序列分析表明,该基因长902bp,开放阅读框(ORF)长783bp,编码260个氨基酸,推测分子量和pI值分别为26.7kDa和4.19,不含有N-糖基化位点,但在Thr157处有一个O-糖基化位点,含有6个保守的半胱氨酸残基,组成3对二硫键,对于维持蛋白质的三级结构起着重要的作用。通过与几种丝氨酸蛋白酶的比对发现,该酶具有组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)催化中心,与褐新西兰肋翅鳃金龟Costelytra zealandica的14种丝氨酸蛋白酶有明显的相似性,其中与CzSP3的序列一致性最高,为52.47%。把该基因与pET21b载体重组后,进行体外表达,以BTEE为底物,测得该酶的活力为0.0378μmol/mg·min。HoSP1基因的克隆及体外表达为进一步研究该酶在华北大黑鳃金龟体内的表达及功能提供了依据。 展开更多
关键词 华北大黑鳃金龟 cdna表达文库 丝氨酸蛋白酶 序列分析 体外表达
下载PDF
长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库的免疫筛选与初步分析 被引量：7
17
作者 刘光远 谢俊仁 +5 位作者 田占成 李知新 龚真莉 王路 柴慧萍 才学鹏 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第1期18-24,共7页
蜱的免疫预防是目前国内外研究的热点,以抗血清为探针筛选cDNA表达文库是获取功能抗原基因的有效的方法之一,为了获得抗长角血蜱免疫原基因,用兔抗长角血蜱血清和兔抗长角血蜱唾液腺蛋白血清对长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库进行了免... 蜱的免疫预防是目前国内外研究的热点,以抗血清为探针筛选cDNA表达文库是获取功能抗原基因的有效的方法之一,为了获得抗长角血蜱免疫原基因,用兔抗长角血蜱血清和兔抗长角血蜱唾液腺蛋白血清对长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库进行了免疫筛选,经过两轮筛选共获得34个阳性克隆,所得阳性噬菌体转染宿主菌BM25.8使之亚克隆为重组质粒,用此质粒转化宿主菌JM109并进行序列测定和生物信息学分析.结果表明:在长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库中获得26个长角血蜱免疫相关cDNA序列,其编码蛋白与长角血蜱HL35、黏附素hlim3假定蛋白、热休克蛋白、NADH脱氢酶、钙网蛋白以及杂色花蜱和肩突硬蜱的二硫异构酶等具有同源性.所获阳性克隆为长角血蜱保护性抗原基因的筛选奠定了基础. 展开更多
关键词 长角血蜱 唾液腺 cdna表达文库 免疫筛选
下载PDF
碱蓬 c DNA表达文库的构建(英文) 被引量：8
18
作者 马秀灵 王丽萍 张慧 《西北植物学报》 CAS CSCD 2002年第6期1289-1294,共6页
以盐生植物盐地碱蓬 (Suaeda salsa)地上部分为材料 ,提取植物总 RNA,纯化出 m R-NA,合成 c DNA第一链 ,得到双链 c DNA后 ,连接入植物表达载体 ,构建 c DNA表达文库。该文库重组子约 1 0 6。将该文库转化农杆菌 GV31 0 1 ,可直接用以... 以盐生植物盐地碱蓬 (Suaeda salsa)地上部分为材料 ,提取植物总 RNA,纯化出 m R-NA,合成 c DNA第一链 ,得到双链 c DNA后 ,连接入植物表达载体 ,构建 c DNA表达文库。该文库重组子约 1 0 6。将该文库转化农杆菌 GV31 0 1 ,可直接用以转化拟南芥。 展开更多
关键词 cdna表达文库 表达载体 盐地碱蓬 耐盐性 抗逆性
下载PDF
SEREX方法鉴定胃癌肿瘤相关抗原基因 被引量：5
19
作者 王运伟 朱正纲 +4 位作者 顾琴龙 李建芳 陈雪华 刘炳亚 林言箴 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期235-238,共4页
目的采用重组CDNA表达文库血清学分析法(SEREX法)寻找胃癌相关肿瘤抗原的编码基因。方法抽提胃癌细胞株SGC7901和1例胃癌组织标本PolyA+RNA,分别构建2个胃癌cDNA表达文库,用含有抗体的胃癌患者血清对2个文库进行筛选,并对筛选所得到的... 目的采用重组CDNA表达文库血清学分析法(SEREX法)寻找胃癌相关肿瘤抗原的编码基因。方法抽提胃癌细胞株SGC7901和1例胃癌组织标本PolyA+RNA,分别构建2个胃癌cDNA表达文库,用含有抗体的胃癌患者血清对2个文库进行筛选,并对筛选所得到的阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果经测定2个原始文库滴度分别为1.6×106pfu和2.5×106pfu,重组率为95%和98%。2个文库经3轮筛选共获得14个胃癌肿瘤相关抗原编码基因,其中一个为未知基因。13个已知基因编码产物包括代谢酶、RNA转录和翻译调控蛋白、蛋白代谢相关分子、自身免疫疾病相关抗原及未知功能蛋白分子。结论　胃癌相关肿瘤抗原编码基因的筛选和鉴定,为胃癌的临床诊断和特异性免疫治疗提供了靶点,有助于对胃癌发生机制的深入理解。 展开更多
关键词 胃癌 相关抗原 SEREX 癌肿瘤 编码基因 cdna表达文库 肿瘤抗原 原基 重组率 阳性克隆
下载PDF
中华眼镜蛇毒腺cDNA表达文库的建立和分析 被引量：5
20
作者 万榕 宋军 +1 位作者 林旭 林建银 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2004年第13期1208-1211,共4页
目的 :为研究开发眼镜蛇毒药用基因工程产品 ,筛选克隆及表达相关药用功能基因 ,构建中华眼镜蛇毒腺cDNA表达文库 .方法 :一步法提取总RNA ,Oligo(dT)纤维素层析柱纯化mRNA ,逆转录PCR合成双链cDNA ,分级分离除去小片段后 ,收集大于 5 0... 目的 :为研究开发眼镜蛇毒药用基因工程产品 ,筛选克隆及表达相关药用功能基因 ,构建中华眼镜蛇毒腺cDNA表达文库 .方法 :一步法提取总RNA ,Oligo(dT)纤维素层析柱纯化mRNA ,逆转录PCR合成双链cDNA ,分级分离除去小片段后 ,收集大于 5 0 0bp的cDNA片段 ,取 1 0ngcDNA与质粒载体pSPORT1连接、转化 .结果 :获得克隆总数为 2× 1 0 5的眼镜蛇毒腺cDNA表达文库 ,重组率 97% .利用PCR技术从该文库扩增了心脏毒素 3(CTX 3)和磷脂酶A2 (PLA2 )基因的cD NA .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 2 4个中华眼镜蛇毒腺EST序列 .结论 :所建立的毒腺cDNA表达文库质量较高 ,可用于进一步筛选。 展开更多
关键词 中华眼镜蛇 毒腺 cdna表达文库 PCR
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 7 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部