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白介素-10的抗炎功能及其分子机制 被引量:55
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作者 任大宾 孙仁宇 《国外医学(呼吸系统分册)》 2005年第3期175-178,共4页
关键词 IL-10 细胞因子 抗炎 白介素-10 分子机制 小鼠 TH1细胞 cdna序列 发现 基因
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海水鱼真鲷脂蛋白脂肪酶基因cDNA序列与组织表达 被引量:15
2
作者 梁旭方 Hiromi OKU +3 位作者 Hiroshi Y.OGATA 李月琴 白俊杰 罗建仁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期712-719,共8页
为研究脊椎动物真鲷脂蛋白脂肪酶 (LPL)结构与功能关系以及探讨动脉粥样硬化形成机理 ,通过构建cDNA文库 ,克隆对动脉粥样硬化表现抗性的海水鱼真鲷LPL基因cDNA全序列 .再通过PCR方法扩增基因组DNA ,获取内含子 9及其两侧序列以确定外显... 为研究脊椎动物真鲷脂蛋白脂肪酶 (LPL)结构与功能关系以及探讨动脉粥样硬化形成机理 ,通过构建cDNA文库 ,克隆对动脉粥样硬化表现抗性的海水鱼真鲷LPL基因cDNA全序列 .再通过PCR方法扩增基因组DNA ,获取内含子 9及其两侧序列以确定外显子 10的大小 ,最后通过RT PCR ,以 β肌动蛋白为外参照 ,比较真鲷在食用两种脂肪含量不同饲料和摄食状态不同的处理条件下 ,肝脏和腹腔肠系膜脂肪组织LPLmRNA的相对水平 .从腹腔肠系膜脂肪组织cDNA文库中克隆出LPLcDNA序列 ,其完整的开放阅读框架由 15 36bp组成 ,编码 5 11个氨基酸残基 .与哺乳类不同 ,真鲷LPL基因外显子 10的开始部分是翻译的 .LPL的催化位点、二硫键位点、N 糖基化位点、肝素结合区、脂质结合位点、介导脂蛋白与低密度脂蛋白受体结合位点、二聚体形成位点等主要功能域在真骨鱼类真鲷与其它脊椎动物间基本保守 ,但肝素结合区的碱性氨基酸残基含量较人类减少 ,并在结合脂质底物的疏水环套中出现插入片段 .与哺乳类不同 ,真鲷LPL基因在成体肝脏存在诱导性表达 ,而在其腹腔肠系膜脂肪组织则存在与哺乳类相似的组成性表达 .当真鲷喂食高脂饲料时 ,其饱食状态下肝脏LPLmRNA水平升高 ,但对其腹腔肠系膜脂肪组织LPL表达没有影响 .当真鲷喂食标准商业饲料时 ,? 展开更多
关键词 海水鱼 真鲷 脂蛋白脂肪酶基因 cdna序列 组织表达
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烟青虫气味结合蛋白基因的克隆与序列分析 被引量:16
3
作者 吴少英 王桂荣 +3 位作者 吴孔明 郭予元 原国辉 郭线茹 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1817-1824,共8页
根据已经报道的棉铃虫普通气味结合蛋白I(GOBP1)和性信息素结合蛋白(PBP)基因的cDNA序列,设计了2对引物,以烟青虫Helicoverpaassulta触角cDNA为模板,分别进行PCR扩增,获得2条特异性条带,约400bp。将以上两条片段分别连接到T-easy载体上... 根据已经报道的棉铃虫普通气味结合蛋白I(GOBP1)和性信息素结合蛋白(PBP)基因的cDNA序列,设计了2对引物,以烟青虫Helicoverpaassulta触角cDNA为模板,分别进行PCR扩增,获得2条特异性条带,约400bp。将以上两条片段分别连接到T-easy载体上,获得重组子T-GOBP1-Hass和T-PBP-Hass。序列测定和结构分析表明,Hass-GOBP1开放阅读框全长441bp,编码147个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为17.2kD和4.71。Hass-PBP开放阅读框全长405bp,编码135个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为15.1kD和5.2。Hass-GOBP1和Hass-PBP具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即氨基酸序列中具有6个保守的半胱氨酸残基,呈酸性。这2个基因已在GenBank中登记,序列号分别是AY864774和AY864775。 展开更多
关键词 烟青虫 普通气味结合蛋白 性信息素结合蛋白 基因克隆 序列分析 气味结合蛋白 蛋白基因 烟青虫 序列分析 cdna序列 氨基酸残基 GENBANK 开放阅读框 克隆
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猪IL-2与IL-6的原核表达及其对伪狂犬病基因缺失疫苗的佐剂效应研究 被引量:14
4
作者 严琳 何启盖 +4 位作者 陈焕春 肖少波 吴美洲 吕建强 韩丽 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1213-1218,共6页
将猪白细胞介素2(pIL-2)与猪白细胞介素6(pIL-6)的cDNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a及pGEX-KG上,转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导产生重组蛋白pIL-2与pIL-6,表达量分别占菌株总蛋白的43.45%和28.37%,经提纯后含量可分别达到97.0... 将猪白细胞介素2(pIL-2)与猪白细胞介素6(pIL-6)的cDNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a及pGEX-KG上,转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导产生重组蛋白pIL-2与pIL-6,表达量分别占菌株总蛋白的43.45%和28.37%,经提纯后含量可分别达到97.06%和86.37%。将提纯后不同剂量的两种重组蛋白以单独或组合的方式,加入伪狂犬病(Ea株)TK^-/gG^-双基因缺失疫苗中,使每头份疫苗分别含2、5和10μg·ml^(-1)的pIL-2或(和)pIL-6,用此疫苗免疫伪狂犬病抗体阴性猪。同时设试验对照组。初次免疫30d后加强免疫,测定中和抗体,观察试验猪的日增重情况,进行统计分析。发现各试验组的抗体水平均高于不含重组蛋白的基因缺失疫苗组;其中,含2μg·ml^(-1)pIL-2试验组与含10μg·ml^(-1)pIL-2/pIL-6试验组抗体水平和基因缺失疫苗对照组之间呈显著差异(P=0.019)与极显著差异(P=0.009)。结果表明,大肠杆菌表达的pIL-2、pIL-6对伪狂犬病鄂A株基因缺失疫苗(TK^-/gG^-/LacZ^+)有较强的佐剂效应,且呈剂量相关性。不同试验组日增重比较结果表明,免疫效果高低与猪的生长速度呈正相关。本试验为重组pIL-2与pIL-6作为新型疫苗佐剂应用提供了重要的试验依据。 展开更多
关键词 IL-2 IL-6 原核表达 伪狂犬病基因 缺失疫苗 佐剂效应 cdna序列 大肠杆菌
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金荞麦花青素合酶基因的克隆及其表达与花青素量的相关性研究 被引量:16
5
作者 卜星星 雒晓鹏 +3 位作者 白悦辰 李成磊 陈惠 吴琦 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期985-989,共5页
目的获取金荞麦花青素合成途径关键酶花青素合成酶(anthocyanins synthase,ANS)基因的全长序列,并进行序列分析;对花期金荞麦ANS基因在各组织中表达水平与花青素量的相关性进行分析。方法利用同源克隆技术获得ANS基因cDNA序列;采用半定... 目的获取金荞麦花青素合成途径关键酶花青素合成酶(anthocyanins synthase,ANS)基因的全长序列,并进行序列分析;对花期金荞麦ANS基因在各组织中表达水平与花青素量的相关性进行分析。方法利用同源克隆技术获得ANS基因cDNA序列;采用半定量RT-PCR对ANS表达量进行分析;采用分光光度法测量花青素量。结果金荞麦ANS基因cDNA包含一个1 077 bp的ORF,编码358个氨基酸,命名为FdANS。生物信息学分析表明,该基因编码蛋白与其他植物ANS蛋白氨基酸序列同源率较高。FdANS在花期金荞麦不同组织中的表达量分析表明,其表达量花>叶>茎>根,花青素量为花>叶>茎>根。结论在金荞麦中首次获得ANS基因的cDNA序列,编码蛋白具有ANS同源蛋白的典型特征。FdANS基因在金荞麦根、茎、叶和花中的表达量与花青素量具有相关性。 展开更多
关键词 金荞麦 花青素合酶 基因克隆 cdna序列 花青素
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鳜鱼(Siniperca chuatsi)β-肌动蛋白基因cDNA全序列与5′侧翼区的克隆与分析 被引量:16
6
作者 刘秀霞 梁旭方 +3 位作者 王琳 端金霞 李光照 廖婉琴 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期102-108,共7页
采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA全序列,再用基因组步行法(Genome Walker)克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5′调控区。序列分析结果表明,鳜鱼β-肌动蛋白基因全长1897bp,其中5′-UTR长94bp,3′-UTR长675bp,编码区长1128... 采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA全序列,再用基因组步行法(Genome Walker)克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5′调控区。序列分析结果表明,鳜鱼β-肌动蛋白基因全长1897bp,其中5′-UTR长94bp,3′-UTR长675bp,编码区长1128bp,编码375个氨基酸。将所得序列与其它动物类群的β-肌动蛋白基因序列进行比较分析显示,鱼类、两栖类、鸟类、哺乳类等不同类群脊椎动物β-肌动蛋白氨基酸序列同源性均在96%以上,说明该基因在生物进化过程中高度保守。通过鳜鱼与其它脊椎动物β-肌动蛋白基因的核苷酸序列构建的进化树显示,脊椎动物β-肌动蛋白聚类成3个分支,鱼类β-肌动蛋白基因形成一个独立的分化群,说明鱼类β-肌动蛋白基因起源于一个共同祖先。克隆得到的鳜鱼β-肌动蛋白基因5'侧翼序列长1399bp,对其进行序列分析,在其起始密码字ATG上游200bp范围内发现含有CAATbox、CC(A/T)6GG(CArGbox)、TATA box对转录调控起重要作用的顺式元件,同时在侧翼区也发现含有GC box、MYOD、YY1、SP1、GATA等多个潜在调控元件。鳜鱼β-肌动蛋白基因5′侧翼序列的克隆成功,为今后转基因鳜鱼的研究工作奠定了基础。 展开更多
关键词 β-肌动蛋白基因 cdna序列 5′调控区 克隆 鳜鱼
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水稻分支酶基因Sbe1和Sbe3 cDNA的克隆及全序列分析 被引量:8
7
作者 陈秀花 刘巧泉 +2 位作者 吴信淦 王宗阳 顾铭洪 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期109-112,共4页
通过改良的 RT- PCR法合成了水稻未成熟种子胚乳 c DNA库 ,并以此为模板 ,用 PCR技术从粳稻品种武运粳 7号中克隆了分别编码淀粉分支酶 SBE 和 SBE 的 2个基因 Sbe1和 Sbe3。序列分析表明 ,克隆 Sbe1和 Sbe3基因的大小分别为 2 4 90 bp... 通过改良的 RT- PCR法合成了水稻未成熟种子胚乳 c DNA库 ,并以此为模板 ,用 PCR技术从粳稻品种武运粳 7号中克隆了分别编码淀粉分支酶 SBE 和 SBE 的 2个基因 Sbe1和 Sbe3。序列分析表明 ,克隆 Sbe1和 Sbe3基因的大小分别为 2 4 90 bp和 2 4 81bp,包含了基因完整的编码序列。 Sbe3基因与已发表基因全序列完全相同 ,同源性达 10 0 % ;Sbe1基因与已发表基因序列有 4个碱基不同 ,同源性为 99.84 % ,推导氨基酸序列的差异为 展开更多
关键词 水稻 淀粉分支酶基因 基因克隆 cdna序列 序列分析
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转录因子DREB1A基因的克隆与植物表达载体的构建 被引量:9
8
作者 李晶 朱延明 李杰 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期211-214,共4页
根据GenBank中已发表的转录因子DREB1A基因的cDNA序列设计并合成了一对引物 ,通过RT PCR的方法从低温处理的拟南芥总RNA中扩增出DREB1A基因的全长cDNA片段。将其克隆到 pMD1 8T vector中。经测序证明该片段与GenBank上报道的序列具有 99... 根据GenBank中已发表的转录因子DREB1A基因的cDNA序列设计并合成了一对引物 ,通过RT PCR的方法从低温处理的拟南芥总RNA中扩增出DREB1A基因的全长cDNA片段。将其克隆到 pMD1 8T vector中。经测序证明该片段与GenBank上报道的序列具有 99.8%的同源性。 2个碱基的置换导致了一处氨基酸的差异 ,但这一氨基酸并不在基因的功能结构域上 ,推测其不会影响基因功能。以植物表达载体pBch为基础 ,构建了由组成型启动子 35S调控的DREB1A基因的植物表达载体pBDR35S 。 展开更多
关键词 转录因子 DREB1A基因 克隆 植物表达载体 cdna序列 拟南芥
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海湾扇贝g型溶菌酶基因cDNA的克隆与分析 被引量:10
9
作者 邹慧斌 宋林生 +1 位作者 胥炜 杨官品 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期101-106,共6页
通过EST和锚定PCR技术,从海湾扇贝(Argopecten irradians)中克隆得到一种溶菌酶基因的全长cDNA(全长659bp,编码200个氨基酸).BLASTx分析的结果显示,它和脊椎动物g型溶菌酶相似性较高,却不同于无脊椎动物中已发现的c型和i型溶菌酶.在其... 通过EST和锚定PCR技术,从海湾扇贝(Argopecten irradians)中克隆得到一种溶菌酶基因的全长cDNA(全长659bp,编码200个氨基酸).BLASTx分析的结果显示,它和脊椎动物g型溶菌酶相似性较高,却不同于无脊椎动物中已发现的c型和i型溶菌酶.在其编码的氨基酸序列中发现了g型溶菌酶的活性中心(Glu 82, Asp 97, Asp 108),同时6个保守的半胱氨酸也与鸟类和鱼类的g型溶菌酶相一致.结合BLASTX分析的结果,可以确认所获得的cDNA序列是一种在无脊椎动物中首次发现的g型溶菌酶的编码序列.采用Clustalw 软件,对多种脊椎动物c型、g型溶菌酶和无脊椎动物c型、i型溶菌酶以及本研究发现的无脊椎动物g型溶菌酶进行了分析,结果发现,无脊椎动物c型、i型溶菌酶和脊椎动物c型溶菌酶同源性较高,而海湾扇贝g型溶菌酶和脊椎动物g型溶菌酶同源性较高.由此说明c型、g型溶菌酶从无脊椎到脊椎动物的进化是平行发生的,这对进一步研究溶菌酶及其分子进化具有重要意义. 展开更多
关键词 海湾扇贝 基因cdna g型 克隆 无脊椎动物 全长cdna cdna序列 PCR技术 溶菌酶基因 氨基酸序列 活性中心 半胱氨酸 编码序列 首次发现 分子进化 同源性 c型 EST 相似性 i型 鱼类 鸟类
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番茄乙烯合成酶基因的cDNA克隆及全序列测定 被引量:8
10
作者 曹晓风 鲁治滨 +2 位作者 朱玉贤 潘乃穟 陈章良 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1993年第20期1907-1910,共4页
乙烯是具有生物活性的最简单的有机分子,作为五大植物激素之一,它控制植物生长的许多过程.在植物体内乙烯的生物合成受到严格的调控,它在植物生长的特定阶段,如果实成熟期间、种子萌发初期、组织器官衰老及脱落期间被诱导产生.许多外界... 乙烯是具有生物活性的最简单的有机分子,作为五大植物激素之一,它控制植物生长的许多过程.在植物体内乙烯的生物合成受到严格的调控,它在植物生长的特定阶段,如果实成熟期间、种子萌发初期、组织器官衰老及脱落期间被诱导产生.许多外界因素,如伤害、缺氧、病毒侵染、植物生长素处理以及 Cd^+和 Li^+离子处理等,也能刺激诱导乙烯的生物合成.乙烯的大量生成往往伴随着明显的生理效应。 展开更多
关键词 乙烯合成酶 基因 cdna序列 番茄
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家蚕滞育生物钟蛋白质EA4基因的cDNA克隆和序列分析 被引量:8
11
作者 王玉军 徐世清 +4 位作者 司马杨虎 吴阳春 刘莹 柳学广 丛海峰 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期36-42,共7页
家蚕滞育生物钟是依赖卵内酯酶A4(EA4)的倒计时型生物钟。EA4是具时间间隔测定酶(time interval measuring enzyme,TIME)功能的蛋白质。根据家蚕EA4测定的氨基酸序列,以第3天龄雌蛹脂肪体和卵巢总RNA为模板,利用简并引物RT-PCR方法,得到... 家蚕滞育生物钟是依赖卵内酯酶A4(EA4)的倒计时型生物钟。EA4是具时间间隔测定酶(time interval measuring enzyme,TIME)功能的蛋白质。根据家蚕EA4测定的氨基酸序列,以第3天龄雌蛹脂肪体和卵巢总RNA为模板,利用简并引物RT-PCR方法,得到308 bp的部分ea4序列,其1-144 nt和145-308 nt分别与家蚕全基因组鸟枪序列(whole genome shotgun sequence,WGS)AADK01019126.1的5595-5738 nt及WGS AADK01014467.1的8636-8473 nt有95%和98%的一致性。根据获得的ea4基因片段序列,利用生物信息学方法和家蚕基因组数据预测了ea4基因的完整cDNA序列,设计特异引物,以雌蛹脂肪体和卵巢RNA为模板,进行RT-PCR得到完整的cDNA。ea4基因的cDNA全长519 bp,其中1-48 bp为信号肽序列,49-519 bp编码的氨基酸与蛋白质纯化后测序EA4部分的一致性为98%,C末端存在3个氨基酸的差异,其中第156位为新确定氨基酸。 展开更多
关键词 家蚕 滞育 时间间隔测定酶 酯酶A4基因 cdna序列
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鳜脂蛋白脂酶和肝脂酶基因结构与组织表达 被引量:10
12
作者 姚煜 梁旭方 +2 位作者 李光照 王琳 刘秀霞 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期506-517,共12页
为了研究鳜(Siniperca chuatsi)脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)基因结构与功能关系,首先采用RT-PCR及RACE法,克隆得到鳜肝脏LPL与HL基因cDNA全序列。鳜肝脏LPL基因cDNA全长为2089bp,其中开放阅读框(ORF)为1548bp,编码515个氨基酸。鳜HL基... 为了研究鳜(Siniperca chuatsi)脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)基因结构与功能关系,首先采用RT-PCR及RACE法,克隆得到鳜肝脏LPL与HL基因cDNA全序列。鳜肝脏LPL基因cDNA全长为2089bp,其中开放阅读框(ORF)为1548bp,编码515个氨基酸。鳜HL基因cDNA全长为1964bp,其中ORF为1494bp,编码497个氨基酸。进化树分析显示,鳜LPL与HL基因与其他脊椎动物的LPL、HL基因各自聚集成簇。对鳜基因组进行PCR获得鳜LPL与HL全基因组DNA序列,与其他脊椎动物基因结构相似,鳜LPL基因由10个外显子和9个内含子组成,全长7392bp;鳜HL基因由9个外显子和8个内含子组成,全长8837bp。应用Genome Walker方法在鳜克隆得到一段长为1071bp的LPL和一段长为2173bp的HL基因5′侧翼区序列,并利用相关软件预测其中具有多个保守的顺式调控元件。组织表达研究显示与易患动脉粥样硬化的人类LPL不同,鳜LPL基因在所有被检测组织中均有表达:在脂肪组织中大量表达,其次是肝脏、脑、肠道、肌肉,在脾中表达量最低;而鳜HL基因的表达则与人类相似,只在肝脏中表达。本研究将为深入探讨机体脂质代谢调节机制以及LPL、HL在防治动脉粥样硬化中的作用奠定良好基础。 展开更多
关键词 脂蛋白脂酶 肝脂酶 cdna序列 基因结构 5'调控区 组织表达
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猪生长激素cDNA的全序列分析 被引量:9
13
作者 齐顺章 王辛中 +4 位作者 周顺伍 贾锋 王华岩 夏立 李娟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期35-39,共5页
本文报道了两个猪生长激素cDNA的全序列分析的结果。猪生长激素cDNA是我们由猪垂体mRNA经过反向转录、克隆和筛选后获得的。文中还将这两个序列与Seeburg等(1983)报道的序列以及Vize等(1987)报道的猪基因组生长激素基因的序列进行了比... 本文报道了两个猪生长激素cDNA的全序列分析的结果。猪生长激素cDNA是我们由猪垂体mRNA经过反向转录、克隆和筛选后获得的。文中还将这两个序列与Seeburg等(1983)报道的序列以及Vize等(1987)报道的猪基因组生长激素基因的序列进行了比较和讨论。 展开更多
关键词 猪生长激素 cdna序列
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二羟环氧苯并芘诱导致癌相关差异表达cDNA序列的克隆 被引量:7
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作者 蒋义国 陈家堃 +2 位作者 陈学敏 冯苏妹 易菲 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期239-242,共4页
目的 克隆苯并 (a)芘代谢物二羟环氧苯并芘 (dihydroxyepoxybenzopyrene ,BPDE)诱导的人上皮细胞致癌相关差异表达cDNA序列。方法 以BPDE诱导恶性转化的人支气管上皮细胞株16HBE为模型 ,采用cDNA代表性差异分析方法 ,比较转化细胞及... 目的 克隆苯并 (a)芘代谢物二羟环氧苯并芘 (dihydroxyepoxybenzopyrene ,BPDE)诱导的人上皮细胞致癌相关差异表达cDNA序列。方法 以BPDE诱导恶性转化的人支气管上皮细胞株16HBE为模型 ,采用cDNA代表性差异分析方法 ,比较转化细胞及正常对照细胞间基因表达的差异 ,分离恶变细胞中差异表达的cDNA片段。分离的片断分别与pGEM T载体连接并转化入JM10 9细菌中 ,对质粒DNA进行测序。以BLASTN程序进行GenBank的同源性检索。结果 克隆的 13条cDNA序列中 ,有 5条为新基因序列 ,已在dbest数据库中注册 ,其登录号分别为BG35 46 91、BG35 46 92、BG35 46 93、BG35 46 94和BG35 46 95 ;8条cDNA有同源序列 ,分别与核糖体蛋白S2 3、MLN137、ACTN4、转移生长因子及G蛋白基因等有同源性。结论 克隆的 13条cDNA序列可能与BPDE诱发细胞恶性转化密切相关。 展开更多
关键词 致癌 相关差异 cdna序列 二羟环氧苯并芘 差异表达序列 基因克隆
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草鱼过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)基因cDNA序列的克隆及其组成型表达 被引量:9
15
作者 陈亮 梁旭方 +3 位作者 瞿春梅 杜嵇华 刘秀霞 何珊 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期80-87,共8页
过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)是核激素受体超家族成员之一,分α,β,γ3个亚型,PPAR具有多种生物学效能,对其基因进行研究将有助于揭示草食性鱼类对营养物利用规律及其机制.通过简并引物克隆草鱼(C tenopharyngodon idellus)PPA... 过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)是核激素受体超家族成员之一,分α,β,γ3个亚型,PPAR具有多种生物学效能,对其基因进行研究将有助于揭示草食性鱼类对营养物利用规律及其机制.通过简并引物克隆草鱼(C tenopharyngodon idellus)PPAR基因cDNA核心序列,应用3′RACE技术扩增该序列的3′末端序列,并对其进行序列分析,最后用荧光定量PCR方法比较草鱼肝脏、脑、脾脏、肌肉、脂肪和心脏的PPARα、PPARβ和PPARγ基因mRNA相对表达水平.序列分析结果表明,草鱼PPARα、PPARβ和PPARγ基因cDNA核心序列片段大小为631 bp,604 bp和651 bp,分别编码210、201和217个氨基酸,PPARγ经3′RACE后共获得大小为1331 bp的片段,编码337个氨基酸.草鱼与鲤鱼(Cyprinus carpio)、斑马鱼(Danio rerio)、鲈鱼(Lateolabrax japonicus)等鱼类PPAR氨基酸序列同源性很高,为71.4%~96.1%;与人(Homo sapiens)、大鼠(Rattus norvegicus)、小鼠(Mus musculus)、牛(Bos taurus)等哺乳动物PPAR氨基酸序列的同源性也较高,为65.0%~77.6%;与非洲爪蟾(Xenopus laevis)等两栖动物PPAR氨基酸序列的同源性约为67.0%.荧光定量PCR结果表明,草鱼PPARα于肝脏,PPARβ于肝脏、肌肉和心脏,PPARγ于肝脏的表达相对较高.相同物种不同PPAR亚型的同源性较低,而不同物种同型PPAR同源性很高,反映了不同亚型在结构上的差异,这与其在功能上的差异是相一致的. 展开更多
关键词 草鱼 过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR) cdna序列 克隆 组成型表达
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庚型肝炎病毒(HGV)NS5区部分基因的克隆和cDNA序列测定 被引量:9
16
作者 周育森 陈薇 +3 位作者 王海涛 赵秋敏 徐静 王竞 《中国病毒学》 CSCD 1997年第1期50-53,共4页
用RT-PCR技术从一例献血员血清标本中扩增出HGV非结构区的部分基因片段,克隆后测定。cDNA序列。该序列与国外三株HGV的核苷酸同源性在90%以上;与GBV—A和GBV—B的同源性分别为44.7%和33.17%;与已发表的23个HCV全序列的相应序... 用RT-PCR技术从一例献血员血清标本中扩增出HGV非结构区的部分基因片段,克隆后测定。cDNA序列。该序列与国外三株HGV的核苷酸同源性在90%以上;与GBV—A和GBV—B的同源性分别为44.7%和33.17%;与已发表的23个HCV全序列的相应序列比较,同源性均小于40%。结果表明,克隆的病毒株为HGV中国株。同时,用RT—PCR检测了河北固安和南京地区的115份HCV感染者标本.HGVRNA阳性率为3.47%。表明我国某些特殊人群中HGV感染率较高,是一个不容忽视的问题。 展开更多
关键词 庚型肝炎病毒 cdna序列 基因克隆
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野生革耳菌漆酶cDNA在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:7
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作者 张敏 肖亚中 +1 位作者 余聪 龚为民 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期757-762,共6页
将分离到的野生革耳菌(Panusrudis)漆酶的cDNA序列克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建成受强启动子AOX1控制的重组表达载体.重组质粒DNA经BglII线性化后,电击转化毕赤酵母GS115细胞,通过G418筛选和PCR鉴定的重组酵母在甲醇诱导后能分... 将分离到的野生革耳菌(Panusrudis)漆酶的cDNA序列克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建成受强启动子AOX1控制的重组表达载体.重组质粒DNA经BglII线性化后,电击转化毕赤酵母GS115细胞,通过G418筛选和PCR鉴定的重组酵母在甲醇诱导后能分泌表达活性漆酶.低温培养是该漆酶基因活性表达的必要条件.培养基中添加400μmol/L的CuSO4最有利于漆酶的活性表达. 展开更多
关键词 野生革耳菌 漆酶 cdna序列 毕赤酵母 表达
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鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶1基因克隆与表达分析 被引量:9
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作者 魏麟 伍贤进 +6 位作者 李胜华 刘胜贵 唐玉莲 贺安娜 王丹 宁鹏飞 李昭君 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1607-1612,共6页
目的克隆鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶1(DXS1)基因并分析其表达差异。方法根据已经获得的鱼腥草DXS1转录本序列设计1对引物,采用RT-PCR方法获得DXS1基因cDNA序列并对DXS1蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析,并预... 目的克隆鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶1(DXS1)基因并分析其表达差异。方法根据已经获得的鱼腥草DXS1转录本序列设计1对引物,采用RT-PCR方法获得DXS1基因cDNA序列并对DXS1蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析,并预测了该蛋白功能;利用实时荧光定量PCR方法检测了DXS1基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况。结果克隆获得的DXS1基因长为2 172 bp,编码723个氨基酸。生物信息学预测DXS1蛋白不含跨膜区,不含信号肽,具有定位肽。DXS1基因在鱼腥草的花中表达丰度最高,其次是叶片,再次是地下茎,地上茎中表达量最低。结论首次从鱼腥草中克隆了DXS1基因,为进一步阐明该基因在鱼腥草萜类化合物代谢途径中的重要作用奠定基础。 展开更多
关键词 鱼腥草 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶 RT-PCR cdna序列 克隆
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野桑蚕卵黄原蛋白的鉴定及cDNA序列分析 被引量:6
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作者 董胜张 刘朝良 +1 位作者 汪泰初 朱保建 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期439-443,共5页
利用SDS_PAGE和Westernblot方法分析鉴定了野桑蚕BombyxmandarinaMoore卵黄原蛋白 ,发现该蛋白由大小两个亚基组成 ,分子量分别为 175kD和 4 2kD。利用昆虫卵黄原蛋白进化上的保守性 ,根据家蚕的卵黄原蛋白cDNA序列设计特异性引物在野... 利用SDS_PAGE和Westernblot方法分析鉴定了野桑蚕BombyxmandarinaMoore卵黄原蛋白 ,发现该蛋白由大小两个亚基组成 ,分子量分别为 175kD和 4 2kD。利用昆虫卵黄原蛋白进化上的保守性 ,根据家蚕的卵黄原蛋白cDNA序列设计特异性引物在野桑蚕的总RNA进行RT_PCR扩增 ,对于 3′和 5′端进行RACE扩增 ,解析获得了野桑蚕卵黄原蛋白cDNA全序列 (GenBank登录号AY30 996 7)。该序列含有 5 75 4个碱基 ,由一个开放阅读框组成 ,编码 1780个氨基酸 ,卵黄原蛋白的氨基酸序列与家蚕的同源性达到 97 6 %。在特定的酶切位点 (RSRR)处 ,即第 36 4~ 36 7个氨基酸位置 ,卵黄原蛋白前体被酶切为大小两个亚基 ,根据氨基酸推算的相对分子质量分别为 16 1 5 71kD和 4 0 794kD ,如果考虑到翻译后的修饰 ,这与SDS_PAGE的结果是吻合的。同源性分析表明 ,昆虫卵黄原蛋白一级结构分化基本上局限在同一目内 。 展开更多
关键词 野桑蚕 卵黄原蛋白 cdna序列 聚类分析 同源性比较
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鱼腥草乙酰辅酶A酰基转移酶基因克隆、表达及生物信息学分析 被引量:9
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作者 姚元枝 黎晓英 +3 位作者 魏麟 伍贤进 刘胜贵 唐玉莲 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期107-111,共5页
目的通过克隆鱼腥草乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-Co A C-acetyltransferase,AACT)基因c DNA全长,并展开生物信息学分析和表达分析,为解析鱼腥草萜类次生代谢产物的生物合成机制奠定基础。方法采用RT-PCR方法获得AACT基因c DNA序列并进... 目的通过克隆鱼腥草乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-Co A C-acetyltransferase,AACT)基因c DNA全长,并展开生物信息学分析和表达分析,为解析鱼腥草萜类次生代谢产物的生物合成机制奠定基础。方法采用RT-PCR方法获得AACT基因c DNA序列并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR方法检测了AACT基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况。结果克隆获得的AACT基因c DNA全长为1 218 bp,编码405个氨基酸。生物信息学预测AACT蛋白不含跨膜区,不含信号肽。AACT基因在鱼腥草地上茎中的表达量最高,达到1.49,其次是地下茎0.96,花和叶中的表达量相对较低,分别为0.20和0.10。结论首次从鱼腥草中克隆了AACT基因,为进一步阐明该基因在鱼腥草萜类化合物代谢途径中的重要作用奠定基础。 展开更多
关键词 鱼腥草 乙酰辅酶A酰基转移酶 RT-PCR cdna序列 差异表达
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