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CD4和CD8基因敲除鼠行穿透性角膜移植术后免疫排斥特征的研究 被引量：20
1
作者 史伟云 谢立信 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期350-354,共5页
目的　探讨CD4和CD8基因敲除小鼠行穿透性角膜移植术后免疫排斥反应发生的机制。方法　CD4、CD8基因敲除小鼠及C57BL/6小鼠各20只,分成3组,右眼接受穿透性角膜移植术,供体为BALB/c小鼠,术后裂隙灯显微镜评价角膜移植片情况,并详细记录... 目的　探讨CD4和CD8基因敲除小鼠行穿透性角膜移植术后免疫排斥反应发生的机制。方法　CD4、CD8基因敲除小鼠及C57BL/6小鼠各20只,分成3组,右眼接受穿透性角膜移植术,供体为BALB/c小鼠,术后裂隙灯显微镜评价角膜移植片情况,并详细记录免疫排斥的发生时间,在术后1、2、4周各取2只鼠术眼行免疫组织化学检查,观察眼前段CD+4 、CD+8 T细胞的变化。在术后2周, 3组小鼠各选其中10只接受皮肤移植,供体为BALB/c小鼠,监测皮肤移植后皮肤植片免疫排斥反应的时间和在皮肤发生排斥反应时角膜移植片的情况。结果　3组小鼠角膜移植术后免疫排斥发生时间明显不同,CD4基因敲除鼠角膜移植片保持透明,至少观察了90d未见免疫排斥反应发生;CD8基因敲除小鼠在(28±3)d时发生免疫排斥反应;C57BL/6小鼠发生免疫排斥反应的时间为(14±2)d(F=2034, P<0. 01)。移植皮肤后发生免疫排斥反应时间为:CD4基因敲除鼠(14±2)d,CD8基因敲除鼠(12±1)d,C57BL/6小鼠(10±1)d(F=42. 54, P<0. 01)。结论　小鼠行穿透性角膜移植术后免疫排斥反应可能是以T淋巴细胞,主要为CD+4 T细胞介导的免疫排斥反应,CD+8 T细胞参与了排斥反应过程。 展开更多
关键词 cd4 cd8基因 鼠 穿透性 角膜移植术 免疫排斥 移植物排斥 免疫组织
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T细胞CD4^(+)/CD8^(+)比值及CD4、CD8编码基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的关联研究 被引量：3
2
作者 胡金川 陈松楠 +3 位作者 张立敏 郭广宏 李岩 田亚平 《标记免疫分析与临床》 CAS 2022年第7期1135-1141,共7页
目的分析T细胞CD4^(+)/CD8^(+)比值及CD4、CD8编码基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的关联。方法检测119例SLE患者及117例健康人T细胞亚群水平及CD4、CD8A... 目的分析T细胞CD4^(+)/CD8^(+)比值及CD4、CD8编码基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的关联。方法检测119例SLE患者及117例健康人T细胞亚群水平及CD4、CD8A、CD8B基因14个标签SNP位点基因型,比较组间T细胞亚群及各基因型、等位基因的分布差异,计算比值比(OR)及其95%可信区间(CI)。结果SLE组CD4^(+)T细胞低于对照组(P>0.05),CD8^(+)T细胞高于对照组(P<0.01),CD4^(+)/CD8^(+)比值低于对照组(P<0.01)。携带CD4 rs1055141C>T/CT基因型(OR:2.280,95%CI:1.261~4.123,P<0.01)及T等位基因(OR:2.210,95%CI:1.293~3.778,P<0.01)、CD8B rs13400210C>T/TT基因型(OR:8.661,95%CI:1.066~70.378,P<0.05)及T等位基因(OR:8.389,95%CI:1.041~67.613,P<0.05)、CD8B rs4832054A>G/AG基因型(OR:2.046,95%CI:1.055~3.967,P<0.05)的个体更易患SLE。结论低T细胞CD4^(+)/CD8^(+)比值是SLE诊断的稳定指标。CD4 rs1055141C>T、CD8B rs13400210C>T和CD8B rs4832054A>G与SLE发病有关联,rs1055141 CT、rs13400210 TT、rs4832054 AG基因型和rs1055141、rs13400210 T等位基因是SLE发病的危险因子。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 T细胞cd4^(+)/cd8^(+)比值 cd4基因 cd8A基因 cd8B基因 单核苷酸多态性
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鸭CD8α基因启动子区的克隆及荧光素酶报告基因重组体的构建 被引量：1
3
作者 徐琪 陈阳 +7 位作者 黄正洋 赵文明 张扬 李欣钰 赵荣雪 李秀 段修军 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期546-552,共7页
旨在了解分化群α基因可能的调控序列及其转录调控机制。本研究利用基因组步移技术扩增鸭CD8α基因的启动子区序列,使用在线软件进行序列分析;分别将鸭肝炎易感组和抗性组的CD8α基因启动子区定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中... 旨在了解分化群α基因可能的调控序列及其转录调控机制。本研究利用基因组步移技术扩增鸭CD8α基因的启动子区序列,使用在线软件进行序列分析;分别将鸭肝炎易感组和抗性组的CD8α基因启动子区定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,利用酶切与测序技术进行鉴定;并瞬时转染细胞,采用荧光素酶报告基因系统检测启动子载体的活性。结果,扩增出一条长度为2 480bp的片段(包含第一外显子56bp,启动子区2 424bp)。经序列分析,鸭CD8α基因启动子区具有典型的TATA-box、GC-box和CAAT-box,其转录起始位点位于翻译起始密码子ATG上游-406bp处,且发现了CdxA、Nkx-2、GATA-1、SRY等41个潜在转录因子结合位点。经酶切与测序鉴定,成功构建了鸭CD8α基因荧光素酶报告基因重组体。荧光素酶报告基因检测系统显示,构建的鸭肝炎易感组和抗性组的报告基因启动子载体具有相当的活性。研究结果为进一步探讨CD8α基因的转录调控奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭 cd8α基因 启动子 荧光素酶报告基因
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鸭CD8α基因启动子的分析及其转录活性 被引量：1
4
作者 徐琪 陈阳 +6 位作者 黄正洋 张扬 陈昌义 赵荣雪 李秀 段修军 陈国宏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2468-2473,共6页
【目的】对鸭CD8α基因启动子活性区域进行分析,为鸭CD8α基因功能和表达调控机理研究提供依据。【方法】利用前期基因组步移技术获得的鸭CD8α基因的启动子区序列,制备一系列启动子缺失突变体(-625/-1 bp,-1 110/-1 bp,-1 413/-1 bp,-2... 【目的】对鸭CD8α基因启动子活性区域进行分析,为鸭CD8α基因功能和表达调控机理研究提供依据。【方法】利用前期基因组步移技术获得的鸭CD8α基因的启动子区序列,制备一系列启动子缺失突变体(-625/-1 bp,-1 110/-1 bp,-1 413/-1 bp,-2 151/-1 bp),定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,构建荧光素酶报告基因重组载体,采用Lipofectamine 2000将重组质粒瞬时转染DT40细胞,分析CD8α基因启动子系列缺失突变体在细胞内的转录活性。【结果】鸭CD8α基因5′侧翼区长片段具有较强的启动子活性,-1110—-625启动子活性最强,且-625—-1和-625—-1 110 bp区域均存在正调控元件。【结论】成功构建了荧光素酶报告基因真核表达载体,确定了鸭CD8α基因调控区,为进一步研究其转录调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭 cd8α基因 启动子 转录活性
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雏鸭肝炎病毒感染后鸭CD8α基因及其通路相关基因表达变化
5
作者 徐琪 陈阳 +7 位作者 黄正洋 童一宇 荣光辉 赵文明 张扬 李秀 段修军 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期102-107,共6页
本研究旨在了解雏鸭肝炎病毒感染后鸭CD8α基因及其通路相关基因表达变化。通过对3日龄无母源抗体的金定鸭雏鸭感染雏鸭肝炎病毒(DHV),构建雏鸭肝炎感染实验动物模型,对雏鸭肝炎病毒发病组、未发病组和对照组的胸腺、肝脏、脾脏、肺、... 本研究旨在了解雏鸭肝炎病毒感染后鸭CD8α基因及其通路相关基因表达变化。通过对3日龄无母源抗体的金定鸭雏鸭感染雏鸭肝炎病毒(DHV),构建雏鸭肝炎感染实验动物模型,对雏鸭肝炎病毒发病组、未发病组和对照组的胸腺、肝脏、脾脏、肺、肾脏、大脑、小脑等组织CD8α基因及其信号通路上MHCⅠ、MHCⅡ、TNF-α等基因进行RT-qPCR检测。结果表明:在攻毒组(发病组和未发病组)扩增出DHV 3D基因的保守区域特异性条带,表明成功构建了雏鸭肝炎感染模型CD8α基因,RT-qPCR结果显示,CD8α、MHCⅠ和MHCⅡ基因在发病组各组织表现为不同程度的下调,在未发病组表现为不同程度的上调;而TNFα在发病组和非发病组的肝、脾、肺和肾等组织中表现为不同程度的上调。研究揭示了雏鸭肝炎病毒感染后CD8α基因及其通路相关基因表达变化,其结果有助于更好地了解duCD8α基因在细胞免疫中表达调控作用。 展开更多
关键词 鸭 cd8α基因 雏鸭肝炎病毒 基因表达
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猪CD8B基因编码区克隆和序列分析
6
作者 许金根 顾有方 +2 位作者 王重龙 李升和 李庆岗 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期5059-5066,共8页
本研究旨在克隆猪CD8B基因的编码区及检测其碱基变异,并利用生物信息学对CD8B基因及其编码的蛋白质序列进行分析。提取大白猪脾脏总RNA后,用RT-PCR扩增CD8B基因。结果表明,扩增得到长785 bp猪CD8B基因序列,包含完整的630 bp编码区(共编... 本研究旨在克隆猪CD8B基因的编码区及检测其碱基变异,并利用生物信息学对CD8B基因及其编码的蛋白质序列进行分析。提取大白猪脾脏总RNA后,用RT-PCR扩增CD8B基因。结果表明,扩增得到长785 bp猪CD8B基因序列,包含完整的630 bp编码区(共编码209个氨基酸),并检测到1个同义突变(c.204 A/G)。经预测,猪CD8β蛋白的分子式为C1053H1702N296O279S10,分子量为23293.51,理论等电点为10.24,不稳定系数为50.40,平均亲水性系数为-0.041;二级结构以无规卷曲、延伸链为主,含1个Ig V样结构域;存在1个长21个氨基酸残基的信号肽和1个跨膜区;含1个N-糖基化位点和4个O-糖基化位点。同源性分析表明,猪CD8β蛋白与8个哺乳动物(普通牛,水牛,山羊,绵羊,猫,狗,小鼠,大鼠)的相似性在49%以上。分子进化分析表明,猪CD8β蛋白与普通牛、水牛、山羊、绵羊的亲缘关系最近,其次是猫、狗,最远的是小鼠、大鼠。本试验为研究猪CD8B基因的结构和免疫功能提供基础资料。 展开更多
关键词 猪 cd8B基因 编码区 序列分析
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