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通过噬菌体筛选表达人CD59的CHO细胞结合的内化短肽 被引量：2
1
作者 程颖 高美华 +1 位作者 王冰 王秋波 《齐鲁医学杂志》 2006年第3期204-206,共3页
目的筛选并鉴定与表达人CD59的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞特异结合的内化短肽,为设计具有拮抗CD59肿瘤逃逸活性的短肽药物奠定基础。方法以高表达人CD59的CHO细胞为靶,对噬菌体随机十二肽库进行5轮亲和筛选,并进行竞争结合实验,用ELISA法筛... 目的筛选并鉴定与表达人CD59的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞特异结合的内化短肽,为设计具有拮抗CD59肿瘤逃逸活性的短肽药物奠定基础。方法以高表达人CD59的CHO细胞为靶,对噬菌体随机十二肽库进行5轮亲和筛选,并进行竞争结合实验,用ELISA法筛选噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果随机挑选的10个克隆中有6个与人CD59结合力高,测序后得到2个高度同源的氨基酸序列。结论获得了与高表达人CD59的CHO细胞结合的内化短肽序列,为进一步设计与肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽药物提供了参考依据。 展开更多
关键词 卵巢细胞 肽库 内化短肽 cd59蛋白 膜蛋白质类
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基于生物信息学分析探讨CD59在肺癌中的表达及其临床意义 被引量：2
2
作者 王卫东 董婧珂 +3 位作者 龚永生 孙慧 王洁 金艳霞 《生命科学研究》 CAS CSCD 2022年第4期361-369,376,共10页
CD59为含128个氨基酸的糖基磷脂酰肌醇锚定的糖蛋白,是膜结合性补体调节蛋白的重要成员,在血液和多种组织中表达。本研究通过转录组测序数据分析发现,CD59在早期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的外周血白细胞中表... CD59为含128个氨基酸的糖基磷脂酰肌醇锚定的糖蛋白,是膜结合性补体调节蛋白的重要成员,在血液和多种组织中表达。本研究通过转录组测序数据分析发现,CD59在早期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的外周血白细胞中表达下调,在此基础上,利用Oncomine、GEPIA、UniProt、COMSIC、SWISS-MODEL、STRING和Kaplan-Meier Plotter等数据库探讨了CD59在肺癌中的表达、蛋白质结构变化及其与患者生存之间的关系,并利用免疫印迹法(Western-blot)分析了CD59在早期肺癌组织和血清中的水平。Oncomine和GEPIA数据库分析发现,CD59的m RNA在肺癌组织中表达下降;Western-blot实验证实,CD59蛋白在早期肺癌组织和血清中的水平也下降。COSMIC数据库分析发现,肺癌患者中的CD59蛋白有3个氨基酸位点(即8、87和128位)存在突变,其中第8和128位点的突变属于同义突变,而第87位的氨基酸由酪氨酸(Y)突变为苯丙氨酸(F);进一步的SWISS-MODEL同源模建结果显示,第87位酪氨酸仅与第53位异亮氨酸(I)有氢键作用,突变成苯丙氨酸后,其与53位异亮氨酸之间的氢键并未发生变化。蛋白质相互作用网络分析发现,CD59蛋白与CD55、C9、C3AR1、C8A、C8B、INS、PLAUR、CD47、ITGAM和CEACAM8有相互作用。Kaplan-Meier Plotter数据库分析发现,CD59低表达的肺癌患者生存时间更短。本研究通过生物信息学分析CD59在肺癌中的表达情况及临床意义,为进一步探索CD59参与肺癌发生机制和预后判断提供了参考依据。 展开更多
关键词 肺癌 cd59蛋白 表达水平 生存分析 生物信息学 数据库
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异种移植动物模型-转人CD59 cDNA首建小鼠的培育
3
作者 王磊 李志伟 +2 位作者 张同琳 林爱星 陈永福 《徐州医学院学报》 CAS 2003年第1期1-4,共4页
目的　培育转人CD5 9cDNA首建小鼠 ,以进一步研究异种移植 ,并为建立鼠系奠定基础。方法　构建转基因结构pEGFP -C1-OMT -CD5 9,限制性内切酶切除质粒载体 ,回收、纯化包括人CD5 9cDNA、绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein ,GFP)基... 目的　培育转人CD5 9cDNA首建小鼠 ,以进一步研究异种移植 ,并为建立鼠系奠定基础。方法　构建转基因结构pEGFP -C1-OMT -CD5 9,限制性内切酶切除质粒载体 ,回收、纯化包括人CD5 9cDNA、绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein ,GFP)基因及各自启动子的约 3 .3kb的基因片段 ,用显微注射法将此片段注入小鼠受精卵 ;提取F0 代小鼠尾组织DNA ,用PCR法初选 ,再用Southern杂交法对PCR阳性鼠进一步筛选 ,确定阳性转基因首建小鼠。结果　共注射 5 90枚受精卵 ,移植于 2 4只受体母鼠中 ,出生F0 代小鼠 73只 ;PCR初选有 8只呈阳性(6♂∶2♀ ) ,Southern杂交有 2只呈阳性 (1♂∶1♀ ) ;经粗略估算 ,整合外源基因拷贝数分别为 3和 10。结论　成功地培育出转人CD5 9cDNA首建小鼠 。 展开更多
关键词 异种移植 cd59蛋白 转基因小鼠
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异种肝移植模型-转人CD59蛋白基因小鼠的建立
4
作者 李志伟 洪智贤 +3 位作者 孙文兵 张同琳 王港 满国彤 《山西医科大学学报》 CAS 2003年第4期298-301,共4页
目的　通过显微注射法产生用于异种移植研究的表达人CD5 9蛋白的转基因小鼠模型。方法　实验中利用OMT作为目的基因hCD5 9cDNA的启动子 ,CMV作为报告基因GFP的启动子 ,构建重组质粒 pGOC。通过显微注射法 ,把CMV GFP OMT CD5 9基因片断... 目的　通过显微注射法产生用于异种移植研究的表达人CD5 9蛋白的转基因小鼠模型。方法　实验中利用OMT作为目的基因hCD5 9cDNA的启动子 ,CMV作为报告基因GFP的启动子 ,构建重组质粒 pGOC。通过显微注射法 ,把CMV GFP OMT CD5 9基因片断注射入昆明白小鼠受精卵。结果　产生出 86只F0 代转基因小鼠。鼠尾基因组DNA经PCR法检测 ,12只阳性 ,进一步用Southernblot法检测 1只阳性。结论　通过显微注射法 ,外源基因hCD5 9cDNA在小鼠基因组中得到整合 ,产生出了阳性转人CD5 9蛋白基因小鼠 。 展开更多
关键词 异种肝移植 显微注射法 cd59蛋白 转基因小鼠模型
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利用噬菌体肽库筛选HeLa细胞表面与人CD59结合的活性短肽 被引量：2
5
作者 崔林林 高美华 王冰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期349-351,共3页
目的寻找HeLa细胞表面与人CD59特异性结合的短肽序列。方法分别用非转基因HeLa细胞和转染CD59基因的HeLa细胞的裂解蛋白进行5轮亲和筛选,并通过竞争结合实验,然后用ELISA方法筛选噬菌体阳性克隆。提取单克隆DNA测序,并对其进行DNA序列... 目的寻找HeLa细胞表面与人CD59特异性结合的短肽序列。方法分别用非转基因HeLa细胞和转染CD59基因的HeLa细胞的裂解蛋白进行5轮亲和筛选,并通过竞争结合实验,然后用ELISA方法筛选噬菌体阳性克隆。提取单克隆DNA测序,并对其进行DNA序列分析推导出短肽序列。结果随机挑选的16个单克隆中有10个克隆对HeLa细胞有特异性结合力,经测序得到一条高度同源的多肽序列。结论通过噬菌体随机肽库对肿瘤细胞进行全细胞蛋白筛选,得到了噬菌体多肽能高特异性与肿瘤细胞结合的短肽序列,为下一步设计肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽药物提供了参考依据。 展开更多
关键词 HELA细胞 噬菌体肽库 人cd59蛋白 肿瘤逃逸
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吸虫CD59样蛋白质的生物信息学分析
6
作者 石云良 杨益超 +2 位作者 蒋智华 区方奇 韦海艳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期419-422,共4页
目的对在寄生虫中新发现的CD59样蛋白序列进行生物信息学分析,为研究其功能奠定基础。方法应用生物信息学方法,从不同的数据库中查找6种吸虫(肝片吸虫、大片吸虫、日本血吸虫、曼氏血吸虫、华支睾吸虫、麝猫后睾吸虫)的CD59样蛋白序列,... 目的对在寄生虫中新发现的CD59样蛋白序列进行生物信息学分析,为研究其功能奠定基础。方法应用生物信息学方法,从不同的数据库中查找6种吸虫(肝片吸虫、大片吸虫、日本血吸虫、曼氏血吸虫、华支睾吸虫、麝猫后睾吸虫)的CD59样蛋白序列,应用生物信息学软件对获得的序列进行信号肽和GPI锚定蛋白的预测和分析,应用Clustlw与人CD59序列进行比对分析,并应用Mrbayes构建进化树。结果 6种吸虫分别存在5-11种不同的CD59样蛋白,大小98~137aa,富含半胱氨酸,均有LY6/CD59蛋白质家族的保守膜体"CCXXXXCN"。与人CD59比对,在10个半胱氨酸中有8个相互匹配。根据6种吸虫中获得的46条CD59样蛋白的氨基酸序列构建系统进化树,可将吸虫分为6个不同的大群,其中有3个群均包含裂体科、片形科和后睾科吸虫序列,另外3个为裂体科、片形科和后睾科吸虫各自独立成群。结论吸虫中存在一类CD59样蛋白家族,这类蛋白质与人CD59有类似的结构,进化分析提示该类蛋白质功能具有多样性。 展开更多
关键词 吸虫 cd59样蛋白 序列比对 进化分析
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