腺样体免疫状况与分泌性中耳炎的相关性研究 被引量：27

1

作者 尹桂茹 岳卓立 +1 位作者 胡建功 赵小明 《临床耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2005年第13期588-589,共2页

目的:探讨腺样体免疫状况与分泌性中耳炎(SOM)的相关性。方法:采用VltrasentitiveTMSP免疫组织化学法检测反复发作的SOM伴腺样体增生者46例(反复发作组)及发作次数≤3次者30例(对照组)腺样体组织中CD45Ro、CD20、PCNA及BCL2的表达。结果... 目的:探讨腺样体免疫状况与分泌性中耳炎(SOM)的相关性。方法:采用VltrasentitiveTMSP免疫组织化学法检测反复发作的SOM伴腺样体增生者46例(反复发作组)及发作次数≤3次者30例(对照组)腺样体组织中CD45Ro、CD20、PCNA及BCL2的表达。结果:反复发作组腺样体组织中CD45Ro、CD20、PCNA及BCL2的表达明显高于对照组,其差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:反复发作的SOM患儿腺样体中淋巴细胞活性增高,处于增殖期细胞增多,致使腺样体增生、肥大,同时局部免疫增强,加重了SOM。因此,对于SOM患儿应及早行腺样体切除术。 展开更多

关键词 腺样体 中耳炎 分泌性 抗原 cd45 抗原 cd20 增殖细胞核抗原 BCI 2基因

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CD20^+外周T细胞淋巴瘤1例并文献复习 被引量：7

2

作者 李新霞 古丽那尔.阿布拉江 +4 位作者 马志萍 张巍 周晓燕 盛伟琪 李巧新 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期986-990,995,共6页

目的观察CD20+外周T细胞淋巴瘤的临床病理学特征、分子遗传学改变并复习文献,以提高对此罕见亚型的诊断及鉴别诊断。方法采用免疫组化EnVision两步法观察1例CD20+外周T细胞淋巴瘤的免疫表型,原位杂交法分析EB病毒感染,应用PCR技术检测Ig... 目的观察CD20+外周T细胞淋巴瘤的临床病理学特征、分子遗传学改变并复习文献,以提高对此罕见亚型的诊断及鉴别诊断。方法采用免疫组化EnVision两步法观察1例CD20+外周T细胞淋巴瘤的免疫表型,原位杂交法分析EB病毒感染,应用PCR技术检测IgH、T细胞受体(TCR)基因克隆性重排分析,同时结合文献报道的35例CD20+T细胞淋巴瘤与该病例分析其临床病理学特征和预后。结果本例及文献报道共36例,其中男性24例,女性6例,另6例性别不详,平均年龄58岁,中位年龄67岁,组织学类型为最常见非特指型外周T细胞淋巴瘤(22例)。免疫表型:肿瘤细胞强表达T细胞标记(CD2、CD3、CD5、CD8)及滤泡辅助T细胞标记(CD10、BCL-6、CXCL13、PD1),弱弥漫表达CD20、CD79a,不表达CD4、PAX5。瘤细胞间散在转化的大B免疫母细胞EBER阳性。PCR法检测TCR基因单克隆重排。患者接受R-CHOP治疗。结合文献:获得随访16例,随访时间2~16个月,其中9例死亡,中位生存时间为9个月,死亡与存活病例患者年龄差异无显著性,组织学亚型差异也无显著性。结论 CD20+外周T细胞淋巴瘤是一种罕见外周T细胞淋巴瘤的变异亚型,临床及病理特征可能会与B细胞淋巴瘤混淆,形态学观察、多种抗体的联合使用及TCR基因重排等分子遗传学研究可避免误诊,部分肿瘤免疫表型和血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤相似,提示二者可能是同一肿瘤的不同阶段或两者存在互相演进的关系。 展开更多

关键词 外周T细胞淋巴瘤 cd20阳性 免疫表型 原位杂交 基因重排

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CD20或CD79α异常表达的成熟T/NK细胞淋巴瘤临床病理学特征 被引量：5

3

作者 李杜娟 康红 +5 位作者 张雷 徐紫光 王小燕 王力夫 宋晓霞 孔令非 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期413-418,共6页

目的:探讨CD20或CD79α异常表达的成熟T/NK细胞淋巴瘤临床病理学特征及预后。方法:回顾性分析河南省人民医院2014年1月至2020年12月诊断的641例成熟T/NK细胞淋巴瘤,筛选14例CD20阳性和1例CD79α阳性的成熟T/NK细胞淋巴瘤,收集临床资料,... 目的:探讨CD20或CD79α异常表达的成熟T/NK细胞淋巴瘤临床病理学特征及预后。方法:回顾性分析河南省人民医院2014年1月至2020年12月诊断的641例成熟T/NK细胞淋巴瘤,筛选14例CD20阳性和1例CD79α阳性的成熟T/NK细胞淋巴瘤,收集临床资料,采用HE、免疫组织化学染色和EB病毒编码的RNA(EBER)原位杂交及免疫球蛋白(Ig)、T细胞受体(TCR)基因重排检测,并分析临床病理特征。结果:男性13例,女性2例,中位年龄56岁。8例非特指外周T细胞淋巴瘤(PTCL-NOS)、3例结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)、2例单形性嗜上皮性肠道T细胞淋巴瘤(MEITL)及2例血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)。12例属于Ⅲ/Ⅳ期,预后差。组织学形态、免疫表型及TCR基因重排与相对应的淋巴瘤类型无明显差异。Ki-67阳性指数均>70%。CD20或CD79α表达弱且具有异质性。15例Ig基因重排均呈多克隆。结论:CD20或CD79α异常表达的成熟T/NK细胞淋巴瘤少见,分期晚,预后差。CD20或CD79α表达弱,增殖指数高。其诊断应结合组织学观察、多种抗体联用及基因重排等多种检测。 展开更多

关键词 淋巴瘤 T细胞 杀伤细胞 天然 抗原 cd20 抗原 cd79 基因重排

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SOX2通过下调CD20表达水平诱导弥漫大B细胞淋巴瘤细胞对利妥昔单抗产生耐药 被引量：6

4

作者 葛晓雯 陈剑锋 +5 位作者 朱娜 姚家美 高峰 纪元 谭云山 侯英勇 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期317-328,共12页

目的:探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)在利妥昔单抗(rituximab)联合CHOP方案[环磷酰胺(cyclophosphamide)+多柔比星(doxorubicin)+长春新碱(oncovin/vincristin)+强的松(prednisone)](简称为R-CHOP方案)治... 目的:探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)在利妥昔单抗(rituximab)联合CHOP方案[环磷酰胺(cyclophosphamide)+多柔比星(doxorubicin)+长春新碱(oncovin/vincristin)+强的松(prednisone)](简称为R-CHOP方案)治疗中对利妥昔单抗产生耐药的分子机制。方法:选取2株DLBCL细胞,生发中心B细胞亚型(germinal center B-cell-like,GCB)OCI-LY8(LY8)和活化的B细胞亚型(activated B-cell-1ike,ABC)NU-DUL-1细胞。采用FCM法检测亲本LY8和NUDUL-1细胞,以及耐药细胞株LY8-R、LY8-CHO、LY8-RCHO、NUDUL-1-R、NU-DUL-1-CHO和NU-DUL-1-RCHO中CD20和3种补体膜调控蛋白CD46、CD55和CD59的表达水平;应用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测CD20蛋白和m RNA的表达水平。收集SRY(性别决定区Y)-框转录因子2 [SRY(sex determining region Y)-box 2,SOX2]过表达的亲本LY8和NU-DUL-1细胞和沉默SOX2表达的耐药LY8-RCHO和NU-DUL-1-RCHO细胞,再用FCM法观察CD20、CD46、CD55及CD59的表达水平。采用免疫组织化学法检测25例至少接受过6次R-CHOP方案治疗无效的DLBCL患者治疗前后的肿瘤组织中CD20与SOX2的表达水平。结果 :与亲本细胞相比,在发生利妥昔单抗耐药的LY8-R、LY8-RCHO以及NU-DUL-1-R、NU-DUL-1-RCHO细胞株中膜蛋白CD20的表达水平均明显降低(P值均<0.001),仅对化疗药物CHO耐药的LY8-CHO与NU-DUL-1-CHO细胞株中膜蛋白CD20的表达水平无明显变化,补体膜调控蛋白CD46、CD55和CD59的表达水平均被下调(P值均<0.05)。蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法证实,CD20蛋白和m RNA的表达水平均明显降低(P值均<0.01和P值均<0.001)。亲本LY8和NU-DUL-1细胞中,过表达SOX2能明显降低CD20的表达水平(P值均<0.000 1),而在LY8-RCHO和NU-DUL-1-RCHO细胞中沉默SOX2表达后,CD20的表达水平明显上调(P值均<0.000 1)。免疫组织化学法检测结果提示,DLBCL患者经R-CHOP治疗后肿瘤组织中CD20的表达水平相对于治疗前明显下降(P <0.01),而SOX2的表达� 展开更多

关键词 淋巴瘤 大B细胞 弥漫性 抗原 cd20 SOX2基因 利妥昔单抗 抗药性 肿瘤

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重组融合蛋白抗CD20Fab-LDM的构建、表达及体外活性研究 被引量：4

5

作者 程昕 杨铭 +7 位作者 范冬梅 许元富 周圆 高瀛岱 王金宏 周园 李巍 熊冬生 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1650-1654,共5页

目的构建和表达抗CD20Fab-LDP(力达霉素辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM(力达霉素),并测定该融合蛋白的生物学活性。方法采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层... 目的构建和表达抗CD20Fab-LDP(力达霉素辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM(力达霉素),并测定该融合蛋白的生物学活性。方法采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot鉴定纯化产物;采用FACS方法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用冷乙二醇法制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM;采用MTT法鉴定抗CD20Fab-LDM对CD20+Raji细胞特异性的细胞毒作用。结果DNA序列测定结果表明抗CD20Fab-LDP融合蛋白已构建成功,可溶性表达产物的产量可达4mg.L-1以上,具有与Raji细胞(CD20+)结合的活性,与抗CD20Fab的亲合常数相当,抗CD20Fab-LDM体外能特异性杀伤Raji细胞,IC50值为0.9×10-10mol.L-1。结论成功地构建了抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并获得可溶性高效表达,表达产物具有与相应靶抗原结合的活性,并成功制备了抗CD20Fab-LDM强化融合蛋白,体外能特异性杀伤CD20+的Raji细胞。 展开更多

关键词 cd20 力达霉素 基因工程抗体 免疫治疗 非霍奇金淋巴瘤 生物毒素

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HSV-TK/CD20双自杀基因系统慢病毒载体的构建及应用 被引量：2

6

作者 家婷 张涛 +9 位作者 邹强 郑武燕 赵日 欧阳寒梅 曹倩 朱榕 王茂庆 叶鑫宇 刘佳慧 李华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期711-717,共7页

目的构建同时表达单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和RQR8膜蛋白双自杀可控开关的Jurkat细胞,使之可通过更昔洛韦药物(GCV)或利妥昔单抗(RTX)实现可控性细胞消除。方法 RQR8膜蛋白小分子含利妥昔单抗识别的模拟表位和抗CD34单抗表位。合成... 目的构建同时表达单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和RQR8膜蛋白双自杀可控开关的Jurkat细胞,使之可通过更昔洛韦药物(GCV)或利妥昔单抗(RTX)实现可控性细胞消除。方法 RQR8膜蛋白小分子含利妥昔单抗识别的模拟表位和抗CD34单抗表位。合成编码RQR8及HSV-TK的基因,构建慢病毒共表达载体pLV-RQR8-T2A-TK;脂质体Lipofectamine3000转染Jurkat细胞,流式荧光抗CD34单抗检测RQR8的表达,通过磁珠筛选获得RQR8+TK+Jurkat细胞;分别加入GCV或RTX检测自杀可控开关功能:CCK8法检测加药后细胞增殖情况,Annexin-V/PI检测细胞凋亡情况。结果慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK酶切片段大约1 670 bp,测序进一步证实外源片段插入正确。慢病毒感染Jurkat细胞,感染率为45.21%,磁珠纯化得到99.4%纯度的RQR8+TK+Jurkat。GCV对RQR8+TK+Jurkat具有细胞毒性作用,GCV浓度为40μmol/L时,其存活率为(52.11±7.04)%,IC50为20.66μmol/L。80μmol/L GCV作用RQR8+TK+Jurkat细胞72 h后凋亡率达(41.28±2.78)%。在血清(含补体)存在情况下,320μg/ml RTX可通过补体介导的细胞杀伤作用杀伤RQR8+TK+Jurkat,其存活率为(29.64±4.52)%。结论双自杀可控开关慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK构建成功,加入GCV或RTX可通过2种不同路径成功杀伤细胞,达到细胞清除目的,提高了安全性,为临床治疗过继免疫不良反应提供多种选择。 展开更多

关键词 自杀基因 HSV-TK cd20 RQR8 利妥昔单抗 更昔洛韦

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新型基因工程抗CD_(20)抗体片段F(ab’)_2的构建、表达和活性测定 被引量：2

7

作者 郑梦杰 范冬梅 +3 位作者 熊冬生 彭晖 朱祯平 杨纯正 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第9期13-17,共5页

从抗CD2 0 Fab’表达载体上利用PCR方法扩增并修饰其重链恒定区CH1C 末端的DNA序列 ,然后将修饰后的CH1DNA序列重组到原Fab’表达载体中 ,构建成抗CD2 0抗体片段F(ab’) 2 表达载体。将该载体转化宿主大肠杆菌 16C9,实现了抗CD2 0 抗体... 从抗CD2 0 Fab’表达载体上利用PCR方法扩增并修饰其重链恒定区CH1C 末端的DNA序列 ,然后将修饰后的CH1DNA序列重组到原Fab’表达载体中 ,构建成抗CD2 0抗体片段F(ab’) 2 表达载体。将该载体转化宿主大肠杆菌 16C9,实现了抗CD2 0 抗体片段F(ab’) 2 在工程菌中的可溶性分泌表达。经分离纯化获得具有与抗原CD2 0 特异结合的F(ab’) 2 活性片段。竞争性免疫荧光实验的结果表明 :抗CD2 0 F(ab’) 2 片段具有比Fab’更强的竞争性抑制亲本鼠源性单克隆抗体HI4 7与Daudi细胞表面CD2 0 相结合的能力 ;用MTT法检测所得到的数据说明 :F(ab’) 2 展开更多

关键词 基因工程抗体 嵌合抗体 F(ab′)2 cd20 B-淋巴细胞 PCR B淋巴细胞瘤 DNA 临床治疗 活性测定 表达 构建

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人CD20胞外区与噬菌体pⅢ融合基因在E.coli中的可溶性表达 被引量：1

8

作者 张效云 孙志伟 +1 位作者 王双 俞炜源 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2004年第4期347-349,共3页

目的 :克隆人CD2 0胞外区基因 (cdw)和丝状噬菌体 (M13K0 7)G3蛋白N端结构域 (pⅢN1)基因 ,并在大肠杆菌中进行高效融合表达。方法 :利用逆转录PCR和PCR方法分别克隆CD2 0胞外区基因和pⅢN1基因 ,然后将二者融合克隆入pTIG Trx表达载体 ... 目的 :克隆人CD2 0胞外区基因 (cdw)和丝状噬菌体 (M13K0 7)G3蛋白N端结构域 (pⅢN1)基因 ,并在大肠杆菌中进行高效融合表达。方法 :利用逆转录PCR和PCR方法分别克隆CD2 0胞外区基因和pⅢN1基因 ,然后将二者融合克隆入pTIG Trx表达载体 ,在大肠杆菌中进行可溶性表达。结果 :可溶性表达产物占细菌可溶性蛋白的约2 5 % ,表达产物可被抗CD2 0分子的单克隆抗体识别。结论 :成功地表达并鉴定了人CD2 0胞外区蛋白 ,为利用噬菌体抗体库进行抗CD2 0抗体的筛选奠定了基础。 展开更多

关键词 cd20抗原 g3p 基因表达 噬菌体抗体库

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p16基因缺失在成人ph阴性急性B淋巴细胞白血病中的临床意义 被引量：1

9

作者 李玉玲 刘晓力 +2 位作者 许娜 唐加明 陆紫媛 《天津医药》 CAS 北大核心 2019年第11期1170-1175,共6页

目的探讨p16基因缺失对成人Ph阴性急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者的临床特征及预后的影响。方法回顾性分析210例初发成人ph阴性B-ALL患者的临床资料,根据初发时检测的p16基因状态分为p16基因缺失组61例和无缺失组149例。比较p16基因缺... 目的探讨p16基因缺失对成人Ph阴性急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者的临床特征及预后的影响。方法回顾性分析210例初发成人ph阴性B-ALL患者的临床资料,根据初发时检测的p16基因状态分为p16基因缺失组61例和无缺失组149例。比较p16基因缺失与无缺失组患者的临床、免疫表型、细胞遗传学、分子学特征及预后。结果p16基因缺失组中伴CD20表达者所占比例明显高于无缺失组(47.5%vs.30.8%,χ^2=5.238,P<0.05),2组患者间其余免疫表型和细胞遗传学分布差异无统计学意义。p16基因缺失组造血干细胞移植率和完全缓解率与无缺失组差异均无统计学意义,复发率明显高于无缺失组(χ^2=12.027,P<0.05)。79例复发患者中,4例患者初发时未检测出p16基因缺失,而复发时检测出p16基因缺失。p16基因缺失组患者的OS和DFS明显低于无缺失组(Logrankχ^2分别为16.715、21.237,均P<0.05)。p16基因缺失组中接受造血干细胞移植患者的OS和DFS均优于化疗患者(Log-rankχ^2分别为25.316、20.637,均P<0.05)。p16基因缺失组CD20阳性患者OS和DFS均明显低于CD20阴性者(Log-rankχ^2分别为7.782、5.733,均P<0.05)。结论p16基因缺失患者CD20阳性表达率高且预后差,造血干细胞移植能够明显改善p16基因缺失患者的预后。 展开更多

关键词 基因缺失 基因 p16 前体B细胞淋巴母细胞白血病淋巴瘤 抗原 cd20

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抗CD20嵌合抗体片段Fab′突变体对B淋巴细胞凋亡及胞内Ca^(2+)的影响 被引量：1

10

作者 杨铭 范冬梅 +3 位作者 熊冬生 刘银星 许元富 杨纯正 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期116-119,共4页

目的研究抗CD20嵌合抗体片段Fab′突变体诱导B淋巴细胞凋亡的发生、凋亡相关基因表达以及细胞内钙离子的浓度变化。方法以人B淋巴细胞(Raji细胞)为凋亡细胞模型,通过MTT法、Western blot和流式细胞仪等方法观察bcl-2/bax基因表达、细胞... 目的研究抗CD20嵌合抗体片段Fab′突变体诱导B淋巴细胞凋亡的发生、凋亡相关基因表达以及细胞内钙离子的浓度变化。方法以人B淋巴细胞(Raji细胞)为凋亡细胞模型,通过MTT法、Western blot和流式细胞仪等方法观察bcl-2/bax基因表达、细胞色素c及胞内Ca2+的变化。结果抗CD20嵌合抗体片段Fab′突变体对Raji细胞生长增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性。细胞中bcl-2表达有微弱的下降,而bax表达明显升高,并出现细胞色素c的释放和胞内Ca2+浓度的升高。结论抗CD20嵌合抗体片段Fab′突变体诱导Raji细胞凋亡,与bcl-2/bax表达、细胞色素c的释放和胞内Ca2+浓度的升高有关。 展开更多

关键词 淋巴瘤 B细胞 免疫球蛋白类 FAB 突变 cd20抗体 基N表达 钙信号 RAJI细胞

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利用重组痘苗病毒表达人 CD2 0基因

11

作者 洪海燕 郭燕翔 +2 位作者 舒翠玲 戚中田 沈倍奋 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期325-327,共3页

目的获得重组人 CD2 0分子并研究编码人 CD2 0的基因在痘苗病毒中的表达。方法从 p GEM- T- EASY/ CD2 0载体上酶切下编码人 CD2 0分子的 c DNA,亚克隆到 p JSA1175载体上 ,重组质粒与野生痘苗病毒共转染 TK- 143细胞。结果APAAP检测到... 目的获得重组人 CD2 0分子并研究编码人 CD2 0的基因在痘苗病毒中的表达。方法从 p GEM- T- EASY/ CD2 0载体上酶切下编码人 CD2 0分子的 c DNA,亚克隆到 p JSA1175载体上 ,重组质粒与野生痘苗病毒共转染 TK- 143细胞。结果APAAP检测到重组病毒感染的细胞表面有 CD2 0分子表达 ,富集后病毒滴度约为 1× 10 9pfu/ ml。结论人 CD2 0基因在痘苗病毒中表达 。 展开更多

关键词 人cd20基因 重组痘苗病毒 基因表达

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人CD20跨膜区与g3pN端融合基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

12

作者 张效云 孙志伟 +1 位作者 俞炜源 程建贞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期481-483,共3页

目的 :构建g3pN1 hCD2 0跨膜及胞外区基因表达载体 ,并在大肠杆菌中进行高效融合表达。方法 :利用反转录PCR和PCR方法 ,分别从Daudi细胞和M13K0 7噬菌体中扩增hCD2 0基因和编码g3pN1蛋白N1端的基因 ,并重组到pTIG Trx表达载体中 ,在大... 目的 :构建g3pN1 hCD2 0跨膜及胞外区基因表达载体 ,并在大肠杆菌中进行高效融合表达。方法 :利用反转录PCR和PCR方法 ,分别从Daudi细胞和M13K0 7噬菌体中扩增hCD2 0基因和编码g3pN1蛋白N1端的基因 ,并重组到pTIG Trx表达载体中 ,在大肠杆菌中融合表达。结果 :表达产物可被抗CD2 0分子的单克隆抗体 (mAb)识别。结论 :成功地表达并鉴定了目的蛋白。 展开更多

关键词 cd20基因 DAUDI细胞 g3p 噬菌体抗体库

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CD20特异性启动子调控腺病毒分泌stTRAIL对淋巴瘤细胞的抑制作用

13

作者 张砚君 袁向飞 +6 位作者 张晓龙 张晴 卢杨 杨圆圆 吴杰 熊冬生 范冬梅 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期290-298,共9页

目的:研究腺病毒携带CD20启动子调控的TRAIL基因特异性杀伤B-NHL细胞的作用。方法:人工合成含有CD20启动子片段-分泌信号-异亮氨酸拉链-s TRAIL(aa114~aa281)-真核poly(A)序列的融合基因,装入腺病毒载体Ad Easy系统,包装出携带P20-st TR... 目的:研究腺病毒携带CD20启动子调控的TRAIL基因特异性杀伤B-NHL细胞的作用。方法:人工合成含有CD20启动子片段-分泌信号-异亮氨酸拉链-s TRAIL(aa114~aa281)-真核poly(A)序列的融合基因,装入腺病毒载体Ad Easy系统,包装出携带P20-st TRAIL序列的腺病毒感染细胞,采用荧光素酶报告基因法研究CD20启动子在CD20+细胞系中的特异性转录,Western blotting验证TRAIL蛋白在细胞内的特异性表达,体外MTT法检测TRAIL特异性抑制CD20+细胞生长的作用。结果:成功构建携带P20-st TRAIL序列的腺病毒载体并分别感染CD20阳性和阴性淋巴瘤细胞系后发现,CD20启动子仅在CD20+的BJAB淋巴瘤细胞中具有转录活性、启动s TRAIL表达并在体外形成具有生物学功能的同源三聚体结构;在细胞中和培养上清中均检测到st TRAIL在mRNA和蛋白水平的表达,但在CD20-细胞系中则无明显表达。体外功能实验显示,BJAB细胞在被Ad P20-st TRAIL感染后自身生长受到明显抑制,而Ad P20-st TRAIL感染的CD20阴性细胞以及空白载体感染的细胞未见生长抑制现象。结论:CD20启动子可以特异性调控腺病毒携带的治疗基因st TRAIL的表达,实现TRAIL对CD20+B-NHL细胞的靶向杀伤。 展开更多

关键词 cd20启动子 基因治疗 腺病毒 st TRAIL 淋巴瘤 BJAB细胞

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抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性测定方法的建立

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作者 俞小娟 刘丽 +12 位作者 白海娇 韩晓捷 刘春雨 付志浩 李萌 杜加亮 徐刚领 段茂芹 杨雅岚 崔春博 陈浩彬 于传飞 王兰 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第7期922-928,共7页

目的建立基于报告基因的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法。方法以WIL2-S细胞系作为靶细胞,以Jurkat-NF-κB-Luc转基因细胞系作为效应细胞,对抗体的量效范围、孵育时间、诱导时间、效靶比及细胞接种密度进行优化,构建可用于测... 目的建立基于报告基因的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法。方法以WIL2-S细胞系作为靶细胞,以Jurkat-NF-κB-Luc转基因细胞系作为效应细胞,对抗体的量效范围、孵育时间、诱导时间、效靶比及细胞接种密度进行优化,构建可用于测定抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性的报告基因法。依据ICHQ2的指导原则对方法进行全面验证,包括专属性、准确性、精密度、线性、稳定性。结果成功建立了具有量效关系的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法,该方法的抗体起始浓度为500 ng/mL,稀释倍数为1∶4,共计8个浓度点(500,125,31.25,7.81,1.95,0.49,0.12,0.031 ng/mL),效靶比为4∶1,诱导时间为4 h。本方法具有良好的专属性;5个不同稀释组回收率样品经测定,相对效价分别为59.63%±4.57%,75.54%±4.05%,99.98%±9.63%,123.90%±5.54%和142.51%±12.82%;对应的回收率分别为93.17%±7.15%,94.42%±5.06%,99.98%±9.63%,99.12%±4.43%以及91.21%±8.21%,CV分别为7.67%,5.35%,9.63%,4.47%和9.00%,上述结果的变异系数CV值均<10%;实测效价与理论效价线性回归分析相关系数R^(2)=0.9823,线性良好;本研究建立的方法可以敏感检测出抗体结构变化对生物活性的影响,对双特异性抗体的稳定性检测有一定的指导意义。结论利用转基因细胞法成功建立了抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性。 展开更多

关键词 抗cd3/cd20双特异性抗体 双特异性抗体 生物学活性 报告基因 优化 验证

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抗CD20嵌合抗体突变型Fab′片断诱导凋亡过程中活性氧Caspase-3的变化 被引量：4

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作者 杨铭 范冬梅 +4 位作者 刘银星 熊冬生 许元富 邵晓枫 杨纯正 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期673-676,共4页

目的研究抗CD20嵌合抗体突变型Fab′片断诱导Raji细胞凋亡过程中活性氧(ROS),Caspase3的变化。方法利用MTT法测定突变型Fab′片断抑制细胞生长,形态学方法观察凋亡细胞的变化,用流式细胞仪检测DCFHDA荧光探针标记细胞内ROS的变化,以及... 目的研究抗CD20嵌合抗体突变型Fab′片断诱导Raji细胞凋亡过程中活性氧(ROS),Caspase3的变化。方法利用MTT法测定突变型Fab′片断抑制细胞生长,形态学方法观察凋亡细胞的变化,用流式细胞仪检测DCFHDA荧光探针标记细胞内ROS的变化,以及用酶标仪和Westernblot检测细胞内Caspase3的变化。结果MTT法测定突变型Fab′片断对Raji细胞的生长具有抑制作用,其抑制作用呈明显的剂量依赖性,荧光显微镜下观察细胞出现凋亡,流式细胞仪,酶标仪以及Westernblot检测细胞内ROS,Caspase3的表达增高,并与作用时间,剂量呈依赖关系。结论ROS,Caspase3表达的增高,在抗CD20嵌合抗体突变型Fab′片断诱导Raji细胞凋亡的过程中起到重要作用。 展开更多

关键词 抗cd20抗体 随机突变 凋亡 ROS Caspase

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抗CD20嵌合抗体片段Fab′突变体的表达和活性研究 被引量：5

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作者 刘银星 熊冬生 +4 位作者 范冬梅 邵晓枫 许元富 朱祯平 杨纯正 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期272-276,共5页

利用PCR方法从抗CD2 0单链抗体 (ScFv)表达载体上扩增抗CD2 0抗体轻链可变区基因 (VL)、重链可变区基因 (VH) ,同时在抗体的可变区引入突变 ,然后将VH、VL 基因重组到Fab′表达载体pYZF1中 ,构建抗CD2 0嵌合抗体Fab′片段表达载体 ,并... 利用PCR方法从抗CD2 0单链抗体 (ScFv)表达载体上扩增抗CD2 0抗体轻链可变区基因 (VL)、重链可变区基因 (VH) ,同时在抗体的可变区引入突变 ,然后将VH、VL 基因重组到Fab′表达载体pYZF1中 ,构建抗CD2 0嵌合抗体Fab′片段表达载体 ,并在大肠杆菌 16c9中进行高效可溶性分泌表达。经大量的筛选 ,获得一个产量和活性均有所提高的突变克隆。其突变位点在轻链可变区的CDR1区 ,即G77→A(Ser→Asn)。突变的抗体的表达量为每克干菌 3 8mg ,而未突变抗体的表达量为每克干菌 1.3mg。突变体的亲和力常数Ka为 2 .2× 10 9L mol,约为突变前的 2倍。竞争性免疫荧光抑制实验表明 ,突变的Fab′片段能竞争性抑制鼠源性抗CD2 0抗体HI4 7和CD2 0表达细胞Raji细胞的结合 ,使HI4 7的结合阳性率由 98%下降至 37.5 5 % 。 展开更多

关键词 单克隆抗体 嵌合抗体 随机突变 表达 活性

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嵌合抗CD20抗体片段F(ab’)_2的表达及活性 被引量：4

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作者 郑梦杰 熊冬生 +3 位作者 彭晖 范冬梅 朱祯平 杨纯正 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期596-599,共4页

目的 :为了简化生产步骤 ,提高抗体蛋白的生物活性 ,探索在工程菌体内直接进行抗CD2 0F(ab’) 2 的高效率分泌性表达。方法 :采用单因素考察法优化培养条件 ,使蛋白G柱和S2 0 0 HR分子筛柱分离纯化目的蛋白 ,用MTT法检测抗CD2 0F(ab’)... 目的 :为了简化生产步骤 ,提高抗体蛋白的生物活性 ,探索在工程菌体内直接进行抗CD2 0F(ab’) 2 的高效率分泌性表达。方法 :采用单因素考察法优化培养条件 ,使蛋白G柱和S2 0 0 HR分子筛柱分离纯化目的蛋白 ,用MTT法检测抗CD2 0F(ab’) 2 抑制Daudi细胞体外生长的活性。结果 :发现用论文所选定的最适培养条件 ,抗CD2 0F(ab’) 2 的产量有了明显提高 ,从1 9～ 2 .2mg L达到了 3 7～ 4 3mg L ,F(ab’) 2 在表达产物中所占的比例也从 9 7%～ 13 2 %提高到了 38 1%～ 4 6 8% ;使用S2 0 0 HR分子筛柱对蛋白G柱亲和纯化后的产物进一步分离纯化 ,可以使F(ab’) 2 的纯度达到 85 %以上 ;MTT法检测结果证明F(ab’) 2 抑制Daudi细胞生长的IC50 值为 14 6 μg ml,而Fab’为 39 5 μg ml。 结论 :实现了抗CD2 0F(ab’) 2 在工程菌体内的高效率分泌性表达 ,而且所表达的抗CD2 0F(ab’) 2 比抗CD2 展开更多

关键词 嵌合抗cd20抗体 片段F(ab')2 基因工程抗体 B-淋巴细胞 B淋巴细胞瘤 治疗

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抗CD20单链抗体-CD8-TCRζ融合基因转染的T细胞治疗人B细胞淋巴瘤的实验研究

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作者 云琳 张瑞萍 金增强 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期745-749,共5页

目的:观察抗CD20单链抗体(single chain variable fragment,scFv)-CD8-TCRζ融合基因转染的T淋巴细胞在体内外的抗人B细胞淋巴瘤作用,探讨利用CD20介导自体T淋巴细胞杀伤人B细胞淋巴瘤的可行性。方法:构建包含抗CD20scFv、CD8分子和CD3... 目的:观察抗CD20单链抗体(single chain variable fragment,scFv)-CD8-TCRζ融合基因转染的T淋巴细胞在体内外的抗人B细胞淋巴瘤作用,探讨利用CD20介导自体T淋巴细胞杀伤人B细胞淋巴瘤的可行性。方法:构建包含抗CD20scFv、CD8分子和CD3信号转导链ζ的融合基因,将其克隆入载体pcDNA3中,酶切鉴定正确后电转染入人外周血T淋巴细胞,诱导其表达抗CD20 scFv-CD8-TCRζ融合蛋白。流式细胞仪检测基因修饰后人T淋巴细胞结合CD20蛋白的功能;细胞杀伤试剂盒检测基因修饰后T淋巴细胞体外杀伤人B细胞淋巴瘤Raji细胞的能力;并在BALB/c裸鼠体内观察其对人B细胞淋巴瘤移植瘤的抑制效应。结果:成功构建、转染了抗CD20 scFv-CD8-TCRζ融合基因,并在人T淋巴细胞表面成功表达;流式细胞仪和细胞杀伤试剂盒检测结果表明经基因修饰后的人T淋巴细胞能特异性结合CD20抗原,并能特异性地杀伤人B细胞淋巴瘤Raji细胞,在裸鼠体内显著地抑制人B细胞淋巴瘤移植瘤的生长。结论:抗CD20 scFv-CD8-TCRζ融合基因转染的T淋巴细胞在体内外均能杀伤人B细胞淋巴瘤细胞,为进一步应用人T淋巴细胞杀伤作用治疗人B细胞淋巴瘤奠定了基础。 展开更多

关键词 抗cd20单链抗体-cd8-TCRζ 融合基因 T淋巴细胞 淋巴瘤 B细胞

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mCD20-腺病毒穿梭质粒pDC315的构建

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作者 李慧 刘兵 +1 位作者 王友臣 谭晓华 《实用医学杂志》 CAS 2007年第21期3310-3313,共4页

目的:构建腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20重组质粒,为探讨编码mCD20基因的腺病毒载体做好准备,为CD20基因治疗淋巴瘤的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR方法将CD20基因克隆出来,通过分子生物学技术构建过渡质粒pcDNA3.1-mCD20质粒,用PCR、酶... 目的:构建腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20重组质粒,为探讨编码mCD20基因的腺病毒载体做好准备,为CD20基因治疗淋巴瘤的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR方法将CD20基因克隆出来,通过分子生物学技术构建过渡质粒pcDNA3.1-mCD20质粒,用PCR、酶切进行鉴定后,将该基因cDNA片段插入腺病毒穿梭质粒pDC315中,转化至高效感受态DH5a细菌细胞中进行扩增,提取质粒,获得重组质粒腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20。结果:经分析鉴定,重组质粒中含有mCD20基因,达到实验预期目的。结论:成功构建表达mCD20基因的重组质粒腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20,有助于后续研究构建腺病毒载体AdmCD20。 展开更多

关键词 腺病毒科 质粒 抗原 cd20 基因治疗

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