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CD44v对大鼠多形胶质瘤细胞系RG2的转移促进作用 被引量:11
1
作者 李宏 Martin Hofmann +4 位作者 刘佳 江岩 郭丽 罗阳 鲁海欧 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期343-346,共4页
研究颅外生长的胶质母细胞瘤能否转移以及CD44v对它们转移能力的影响。利用基因转染技术,将自发表达CD44v(meta-1)的载体导入转移力较低的大鼠胶质瘤RG2细胞内,并对有或无CD44v表达的RG2细胞做系统的实... 研究颅外生长的胶质母细胞瘤能否转移以及CD44v对它们转移能力的影响。利用基因转染技术,将自发表达CD44v(meta-1)的载体导入转移力较低的大鼠胶质瘤RG2细胞内,并对有或无CD44v表达的RG2细胞做系统的实验性转移观察。结果发现,与无CD44v表达的母系RG2细胞(RG2-m)相比,CD44v的转染子RG2-a的生长指标和形态学特点并无明显改变;但RG2-a在荷瘤大鼠体内转移出现的时间明显提前,在单位时间内,受累器官的数量增加和破坏程度更为严重。研究结果证实:颅外生长的胶质母细胞具有自发转移能力,CD44v可明显提高RG2细胞的转移效率。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 cd基因 肿瘤转移
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转移相关基因CD44v在大肠癌中的表达及其临床意义 被引量:13
2
作者 吴健雄 余宏迢 +7 位作者 邵永孚 屠规益 张伟 常绍静 金顺钱 金玉生 刘毅 刘月兰 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期347-350,共4页
用RT-PCR及cDNA印迹杂交技术,分别检测大肠正常粘膜、癌前病变及癌的CD44vmRNA表达,探讨CD44vmRNA异常表达和拼接与大肠癌临床病理之间的相关意义。通过对67份大肠原发癌、20份转移癌、7份癌前病变... 用RT-PCR及cDNA印迹杂交技术,分别检测大肠正常粘膜、癌前病变及癌的CD44vmRNA表达,探讨CD44vmRNA异常表达和拼接与大肠癌临床病理之间的相关意义。通过对67份大肠原发癌、20份转移癌、7份癌前病变及15份正常粘膜的研究,结果显示:CD44vmRNA异常表达者原发癌65/67、转移癌20/20、癌前病变5/7、正常粘膜0/15;经cDNA杂交发现CD44vmRNA分子异常拼接和高分子量表达(简称高表达)者在原发癌为10/20(50%),转移癌为18/20(90%);10例原发癌CD44vmRNA高表达者中,8例有转移,另10例原发癌弱表达者中,2例有转移。提示CD44vmRNA在大肠癌中的异常表达具有普遍性,既可能是早期癌变伴随出现的生物学标志。 展开更多
关键词 大肠肿瘤 cd基因 肿瘤转移
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5-FC/CD系统对荷大肠癌裸鼠肿瘤的杀伤效应 被引量:11
3
作者 崔龙 林言箴 +4 位作者 朱正纲 陈雪华 顾琴龙 刘炳亚 郁宝铭 《世界华人消化杂志》 CAS 1999年第6期473-475,共3页
目的研究cd基因对大肠肿瘤的特异杀伤作用,探索自杀基因靶向治疗大肠癌的有效途径.方法逆转录病毒感染法将G1ceacdNa及pcd2分别转导入高分泌CEA的大肠癌细胞Lovo中,再分别接种到裸鼠皮下.成瘤后腹腔给予5... 目的研究cd基因对大肠肿瘤的特异杀伤作用,探索自杀基因靶向治疗大肠癌的有效途径.方法逆转录病毒感染法将G1ceacdNa及pcd2分别转导入高分泌CEA的大肠癌细胞Lovo中,再分别接种到裸鼠皮下.成瘤后腹腔给予5FC(500mg/kg)治疗,观察肿瘤重量的变化及病理学特点.结果含G1ceacdNa及pcd2逆转录病毒载体的病毒滴度分别为:13×107及21×108CFU/L.所有转基因成功并接种动物均成瘤.腹腔给予5FC治疗后发现,转由CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动cd基因的组织特异性重组逆转录病毒载体G1ceacdNa的肿瘤对5FC的敏感性明显高于转非cea调控cd基因的肿瘤,治疗结束后肿瘤重量分别为31mg±8mg及113mg±23mg(P<001).结论本实验提示cea转录调控序列可控制cd基因在CEA阳性的大肠癌组织中高效表达。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 cd基因 癌胚抗原 基因治疗
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含CD基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建 被引量:10
4
作者 崔龙 曹广文 +6 位作者 王元和 屠岳 孟荣贵 高军 仇小芳 吴宗娣 谢苏庆 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期289-291,共3页
含CD基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙,曹广文,王元和,屠岳,孟荣贵,高军,仇小芳,吴宗娣,谢苏庆关键词大肠癌;胞嘧啶脱氨酶基因;逆转录病毒载体;癌胚抗原;转录调控序列胞嘧啶脱氨酶(CD)是真菌及某些大肠... 含CD基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙,曹广文,王元和,屠岳,孟荣贵,高军,仇小芳,吴宗娣,谢苏庆关键词大肠癌;胞嘧啶脱氨酶基因;逆转录病毒载体;癌胚抗原;转录调控序列胞嘧啶脱氨酶(CD)是真菌及某些大肠杆菌等DNA嘧啶补救合成途径中的关... 展开更多
关键词 大肠肿瘤 cd基因 逆转录病毒载体 病毒载体
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白介素-2基因增强胞嘧啶脱氨酶基因的抗结肠癌效应 被引量:4
5
作者 沈历宗 华一兵 +4 位作者 吴文溪 许德华 丁强 刘新垣 王国梁 《中华胃肠外科杂志》 CAS 2004年第5期411-413,共3页
目的探讨联合应用白介素(IL)-2基因与胞嘧啶脱氨酶基因(EC-CD)对结肠癌的治疗效应。方法分别以重组腺病毒载体AdCMVCD、AdCEACD转导EC-CD基因;AdCMVIL-2转导人IL-2基因。分别在体外、内(Balb/cnu/nu裸鼠)研究EC-CD基因联合人IL-2基因对L... 目的探讨联合应用白介素(IL)-2基因与胞嘧啶脱氨酶基因(EC-CD)对结肠癌的治疗效应。方法分别以重组腺病毒载体AdCMVCD、AdCEACD转导EC-CD基因;AdCMVIL-2转导人IL-2基因。分别在体外、内(Balb/cnu/nu裸鼠)研究EC-CD基因联合人IL-2基因对LOVO细胞肿瘤的治疗作用。结果LOVO细胞受AdCMVIL-2感染后,细胞生长有比较明显的抑制。AdCEACD/氟胞嘧啶(5-FC)联合AdCMVIL-2可增强对LOVO细胞的细胞毒作用(P=0.001),肿瘤生长明显抑制(P=0.000),联合治疗的效果与单用AdCMVCD/5-FC接近(P=0.815)。结论联合IL-2基因可明显增强EC-CD基因抗肿瘤效应,且可弥补靶向性载体治疗效率较差的缺点。 展开更多
关键词 LOVO细胞 胞嘧啶脱氨酶基因 cd基因 结肠癌 联合 IL-2基因 基因增强 Balb/c 重组腺病毒载体 细胞生长
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胞嘧啶脱氨酶基因联合5-Fc治疗结肠癌的实验研究 被引量:4
6
作者 黄建华 王瑶 +2 位作者 李崇辉 钟大光 吕海燕 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期6-8,共3页
目的 研究胞嘧啶脱氨酶基因 (CD)联合前体药物 5 氟胞嘧啶 (5 Fc)对结肠癌细胞的生长抑制作用。方法 应用逆转录病毒介导的方法 ,将逆转录病毒载体pLXSN中含有大肠杆菌CD基因的重组质粒pCD2 转染到病毒包装细胞PA317后 ,感染人结肠... 目的 研究胞嘧啶脱氨酶基因 (CD)联合前体药物 5 氟胞嘧啶 (5 Fc)对结肠癌细胞的生长抑制作用。方法 应用逆转录病毒介导的方法 ,将逆转录病毒载体pLXSN中含有大肠杆菌CD基因的重组质粒pCD2 转染到病毒包装细胞PA317后 ,感染人结肠癌细胞株SW1116。对转基因的细胞进行RT PCR检测和体内外药物敏感实验。结果 获得了稳定表达EC CD基因的结肠癌细胞株SWCD2 ,与野生型SW1116细胞相比 ,SWCD2 细胞对基本无毒性的原药 5 Fc的敏感性增加 ,5 0 %细胞生长抑制率 (IC50 )浓度由野生型SW1116细胞的 16 0 0 0 μmol/L降低到SWCD2 的 6 6 μmol/L。经 5 Fc治疗后 ,SWCD2 细胞的裸鼠移植瘤生长明显缩小。结论 CD基因联合 5 Fc对人结肠癌细胞具有实验性基因治疗作用。 展开更多
关键词 联合 胞嘧啶脱氨酶基因 cd基因 治疗 结肠癌细胞 人结肠癌 实验研究 重组质粒 稳定表达 逆转录病毒介导
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基因疫苗预防牙周炎的实验研究 被引量:4
7
作者 张凤秋 杨连甲 吴织芬 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期310-313,共4页
目的将已构建的P.gingivaliskgpcd基因的真核重组表达质粒pcDNA3.1+/kgpcd作为基因疫苗,免疫SD大鼠并观察其在预防牙周炎中的作用。方法pcDNA3.1+/kgpcd经颌下腺靶向注射免疫SD大鼠,采用间接ELISA法检测唾液中特异性抗体的水平,并经组... 目的将已构建的P.gingivaliskgpcd基因的真核重组表达质粒pcDNA3.1+/kgpcd作为基因疫苗,免疫SD大鼠并观察其在预防牙周炎中的作用。方法pcDNA3.1+/kgpcd经颌下腺靶向注射免疫SD大鼠,采用间接ELISA法检测唾液中特异性抗体的水平,并经组织化学染色观察免疫对SD大鼠牙周炎的保护情况。结果重组质粒pcDNA3.1+/kgpcd经颌下腺靶向注射免疫SD大鼠,可诱导机体产生高水平的唾液中抗KGPcdsIgA抗体,显著高于对照组,并且实验组牙槽骨的破坏程度显著低于对照组。结论颌下腺靶向注射免疫可引起有效的黏膜免疫应答,KGPcd作为有效的免疫原产生的抗体对P.gingivali引起的牙周炎可起到保护作用。 展开更多
关键词 牙周炎 实验研究 疫苗预防 PcdNA3 ELISA法检测 SD大鼠 重组表达质粒 注射免疫 sIgA抗体 黏膜免疫应答 特异性抗体 颌下腺 基因疫苗 cd基因 染色观察 组织化学 重组质粒 保护作用 对照组 靶向 高水平 牙槽骨 实验组 免疫原
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CD、VEGFR-1基因对恶性胶质瘤细胞和血管内皮细胞共培养体系中VEGF表达及细胞增殖的影响 被引量:4
8
作者 李振业 张鹏飞 +2 位作者 周建华 周婉琦 王红云 《临床和实验医学杂志》 2018年第24期2617-2620,共4页
目的研究胞嘧啶脱氨酶(CD)、血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1)基因共表达质粒对恶性胶质瘤细胞和血管内皮细胞共培养体系血管内皮生长因子(VEGF)表达及细胞增殖的抑制作用。方法转染组:CD基因、VEGFR-1基因共表达质粒p EGFP-C1-CD-VEGFR-... 目的研究胞嘧啶脱氨酶(CD)、血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1)基因共表达质粒对恶性胶质瘤细胞和血管内皮细胞共培养体系血管内皮生长因子(VEGF)表达及细胞增殖的抑制作用。方法转染组:CD基因、VEGFR-1基因共表达质粒p EGFP-C1-CD-VEGFR-1转染人血管内皮细胞共培养体系中的人恶性胶质瘤细胞,未转染组:未做细胞转染,对照组:转染空载体。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养液上清中VEGF含量,原位杂交及免疫组化检测细胞VEGFmRNA及VEGF的表达,通过流式细胞术观察其对细胞活性的影响。结果转染后转染组细胞VEGFmRNA为0. 62±0. 06,VEGF为0. 42±0. 04,较未转染组及对照组显著降低,培养液中VEGF含量为60. 34±31. 22,较未转染组及对照组显著降低,细胞活性受到抑制,流式细胞术发现转染组细胞的G1期细胞比率明显高于未转染组及对照组,细胞出现凋亡。结论 CD、VEGFR-1基因共表达质粒可抑制恶性胶质瘤细胞和血管内皮细胞共培养体系中VEGFmRNA及VEGF的表达,抑制细胞活性、诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 cd基因 VEGFR-1基因 恶性胶质瘤 血管内皮细胞
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人TSH受体胞外段高效表达质粒的构建、表达及蛋白纯化 被引量:4
9
作者 吴晓燕 雒文田 +4 位作者 徐利 田竹芳 王琛 施秉银 朱本章 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期470-471,共2页
利用基因重组方法 ,构建hTSHRecd基因片段原核表达系统 (E .coliM15 )。hTSHRecd蛋白表达量大 ,纯化得到毫克级高纯度的hTSHRecd蛋白 ,可与TSHR自身抗体及TSH特异性结合 。
关键词 胞外段 TSH受体 质粒 cd基因 蛋白纯化 自身抗体 组方 高效表达 特异性结合 原核表达系统
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热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480的杀伤作用 被引量:4
10
作者 李金茂 马庆久 +4 位作者 赖大年 黎成金 鲁建国 王小军 高德明 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2003年第6期427-430,共4页
目的 探讨 5 -氟胞嘧啶 ( 5 FC )热化疗对转染组织特异性胞嘧啶脱氨基酶 (CD )基因的大肠癌细胞SW 480的作用。方法 采用脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列 (TRS )驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G 1CEACDNa转导入大肠癌细胞S... 目的 探讨 5 -氟胞嘧啶 ( 5 FC )热化疗对转染组织特异性胞嘧啶脱氨基酶 (CD )基因的大肠癌细胞SW 480的作用。方法 采用脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列 (TRS )驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G 1CEACDNa转导入大肠癌细胞SW 480 ,以G 418筛选阳性克隆扩增后 ,采用水浴加温法 ,43℃作用 3 0min共 3次 ,同时给予 5 FC进行敏感试验 ;RT PCR法检测目的基因在靶细胞的表达。结果 SW 480 CEACD细胞在 43℃作用 3 0min共 3次条件下 ,CD基因能稳定表达 ;热疗本身对SW 480细胞有一定的杀伤作用 ( P <0 .0 5 ) ,转CD基因后 ,SW 480细胞对 5 FC的敏感性明显提高 (P <0 .0 1) ,热疗与前药 5 FC合用 ,对SW 480 CEACD的杀伤作用显著大于对未转基因细胞的杀伤作用 ( P <0 .0 1) ,亦大于单独应用 5 FC时对SW 480 CEACD细胞的杀伤作用(P <0 .0 5 ) ,热化疗增加了SW 480 CEACD细胞对 5 FC的敏感性 ,并可观察到明显的旁观者效应。结论 热疗与 5 FC联合应用 ,提高了CEA组织特异性CD /5 FC系统对结肠癌细胞SW 480的靶向性杀伤作用。 展开更多
关键词 结肠肿瘤/药物疗法 氟胞嘧啶/治疗应用 热化疗 结肠肿瘤/遗传学 cd基因 结肠瘤细胞SW480
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逆转录病毒载体介导的CD基因对小鼠胃癌的原位杀伤作用 被引量:3
11
作者 崔龙 林言箴 +3 位作者 喻德洪 朱正纲 陈雪华 郁宝铭 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期523-524,共2页
目的 探讨自杀基因的旁观者效应及引发的抗肿瘤免疫对胃癌的治疗作用。方法 将含有CD基因的重组逆转录病毒载体pCD2 在PA317 细胞中进行包装后,收获病毒上清;将此上清直接注射接种于615 小鼠皮下并已成瘤的MFC小... 目的 探讨自杀基因的旁观者效应及引发的抗肿瘤免疫对胃癌的治疗作用。方法 将含有CD基因的重组逆转录病毒载体pCD2 在PA317 细胞中进行包装后,收获病毒上清;将此上清直接注射接种于615 小鼠皮下并已成瘤的MFC小鼠前胃癌的肿瘤部位,再腹腔给予前药5FC 进行治疗。治疗结束后,检测NK、LAK细胞活性以判断机体免疫活性。结果 在前药治疗阶段中,转CD基因肿瘤较未转基因肿瘤的生长明显受抑,且有部分肿瘤消失( P<0 .01 ,n=10) 。在成瘤对照组中,NK、LAK 活性受到抑制,低于正常对照组,而CD/5FC组的NK、LAK活性明显增高。肿瘤消失小鼠在远离原肿瘤部位再接种MFC细胞,90 天后均未见肿瘤生长且长期存活。结论 在胃癌肿瘤部位直接转导CD 基因不仅可以对肿瘤产生强效的杀伤作用,由此引发的抗肿瘤免疫反应对阻止肿瘤复发有重要意义。 展开更多
关键词 胃肿瘤 自杀基因 逆转录病毒 cd基因 小鼠
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放射敏感性启动子调控CD基因/5-FC自杀系统慢病毒载体的构建及^(125)I诱导表达的研究 被引量:3
12
作者 李玲 张春丽 +4 位作者 闫平 殷雷 康磊 赵倩 王荣福 《同位素》 CAS 2012年第3期165-170,共6页
合成了含8个CArG元件的放射敏感性启动子E8,将其连接于胞嘧啶脱氨酶(Cytosine Deaminase,CD)基因及GFP报告基因上游,构建了重组慢病毒载体pGC-FU-E8-codA-GFP。与慢病毒包装系统共转染293T细胞包装重组慢病毒颗粒E8-codA-GFP LV,研究重... 合成了含8个CArG元件的放射敏感性启动子E8,将其连接于胞嘧啶脱氨酶(Cytosine Deaminase,CD)基因及GFP报告基因上游,构建了重组慢病毒载体pGC-FU-E8-codA-GFP。与慢病毒包装系统共转染293T细胞包装重组慢病毒颗粒E8-codA-GFP LV,研究重组慢病毒感染EJ细胞在不同剂量125I的电离辐射下绿色荧光表达情况及其将5-FC转化为5-FU的能力。结果显示:构建的含有E8启动子及CD基因的重组慢病毒载体,包装的重组慢病毒滴度为2×108 TU/mL;经125I照射的重组慢病毒感染EJ细胞均可观察到绿色荧光,其细胞上清液均可检测到5-FC转化成的5-FU紫外峰,其中55.5kBq及74.0kBq 125I照射的细胞组绿色荧光明显,148kBq 125I照射的细胞组,其5-FU紫外峰最为明显。以上结果表明:本工作所构建的放射敏感性启动子调控CD基因/5-FC自杀系统重组慢病毒载体具有电离辐射调控作用,可在125I的电离辐射作用下诱导下游基因表达,为放射性核素125I联合CD基因/5-FC自杀系统对肿瘤细胞的治疗作用研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 125I 放射敏感性启动子 cd基因 GFP基因 慢病毒载体
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CD基因联合mIL-2/mGM-CSF基因治疗胃癌的研究 被引量:1
13
作者 郭善禹 顾琴龙 +3 位作者 刘炳亚 朱正纲 尹浩然 林言箴 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第3期191-194,共4页
目的 :观察CD基因联合mIL 2 /mGM CSF基因对小鼠胃癌的治疗作用。方法 :CD基因构建于逆转录病毒载体pLxSN ,mIL 2和mGM CSF基因构建于pIRES。先用CD/ 5 FC治疗胃癌细胞株 ,然后联合mIL 2 /mGM CSF两种细胞因子基因治疗小鼠模型胃癌 ,... 目的 :观察CD基因联合mIL 2 /mGM CSF基因对小鼠胃癌的治疗作用。方法 :CD基因构建于逆转录病毒载体pLxSN ,mIL 2和mGM CSF基因构建于pIRES。先用CD/ 5 FC治疗胃癌细胞株 ,然后联合mIL 2 /mGM CSF两种细胞因子基因治疗小鼠模型胃癌 ,以期产生显著的抗肿瘤作用。RT PCR检测基因表达。结果 :体外结果显示 2 0 %的转基因细胞即可杀灭70 %~ 80 %的肿瘤细胞。动物实验结果表明 ,应用CD/ 5 Fc ,即可产生很强的抗肿瘤作用。结合mIL 2 /mGM CSF两种细胞因子基因 ,抗肿瘤作用会得到进一步强化 ,肿瘤消退速度明显加快 ,大部分肿瘤完全消退。RT PCR结果显示 ,CD基因和mIL 2 ,mGM CSF基因均能在组织中表达。结论 :CD/ 5 Fc能够杀灭肿瘤细胞 ,具有显著抗肿瘤作用。联合IL 2 /GM CSF后 ,抗肿瘤作用会得到进一步强化 ,产生明显的抗肿瘤效应。应用病毒和脂质体方法转染自杀基因和细胞因子基因 。 展开更多
关键词 胃癌 基因治疗 cd基因 mIL-2/mGM-CSF基因
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CD、Flt-1基因共表达重组质粒的构建及对BT325细胞增殖的抑制作用 被引量:2
14
作者 张鹏飞 周建华 +2 位作者 周婉琦 张亚卓 王红云 《立体定向和功能性神经外科杂志》 2014年第1期13-17,共5页
目的构建CD、Flt-1基因共表达重组质粒,并检测其对BT325细胞增殖抑制的影响。方法从大肠杆菌及人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-RCR)扩增CD基因和FLT-1基因片段,应用基因重组技术将CD基因和Flt-1基因片段克隆... 目的构建CD、Flt-1基因共表达重组质粒,并检测其对BT325细胞增殖抑制的影响。方法从大肠杆菌及人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-RCR)扩增CD基因和FLT-1基因片段,应用基因重组技术将CD基因和Flt-1基因片段克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,经酶切鉴定及DNA序列分析证实所构建的载体。转染BT325细胞株,通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用。结果 RT-RCR方法获得CD基因和Flt-1基因片段,酶切分析和DNA测序鉴定表明重组质粒pEGFPC1-CD-Flt-1构建成功。转染72h后实验组细胞生长速度是control组的(33.2%±5.4%),流式细胞术发现实验组细胞的G1期细胞比例明显高于control组,细胞出现凋亡,实验组细胞的凋亡率为(19.7%±5.45%)。结论成功构建真核表达重组质粒pEGFP-C1-CD-Flt-1,其体外可抑制BT325增殖并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 cd基因 Flt-1基因 基因重组 BT325细胞
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腺病毒载体介导的自杀基因对MFC小鼠前胃癌细胞的体外杀伤作用 被引量:3
15
作者 崔龙 陈雪华 +4 位作者 林言箴 孟荣贵 喻德洪 朱正纲 郁宝铭 《外科理论与实践》 2000年第3期167-169,共3页
提高转基因效率,建立高效自杀基因杀伤胃癌肿瘤细胞的方法。方法:首先构建含CD基因的重组腺病毒载体并对载体进行包装、收获病毒上清并纯化。将重组病毒液转染MFC胃癌细胞进行体外抑瘤实验。结果:含CD基因的重组腺病毒载体经酶切鉴... 提高转基因效率,建立高效自杀基因杀伤胃癌肿瘤细胞的方法。方法:首先构建含CD基因的重组腺病毒载体并对载体进行包装、收获病毒上清并纯化。将重组病毒液转染MFC胃癌细胞进行体外抑瘤实验。结果:含CD基因的重组腺病毒载体经酶切鉴定选出:包装纯化后,检测病毒浓度为1.2×1012颗粒/ml。体外实验中,转CD基因的MFC细胞在5-FC作用下生长明显受抑(P<0.01,n=9)。结论:腺病毒载体转导的CD基因提高了转染效率,为大量杀伤胃癌细胞奠定了基础。 展开更多
关键词 腺病毒载体 自杀基因 小鼠 cd基因
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CD、Flt-1基因对原代培养的恶性胶质瘤细胞VEGF表达及生长的影响 被引量:2
16
作者 张鹏飞 周建华 +2 位作者 周婉琦 张亚卓 王红云 《立体定向和功能性神经外科杂志》 2014年第3期144-147,共4页
目的研究CD、Flt-1基因对恶性胶质瘤细胞VEGF表达及生长的抑制作用。方法 CD、FLT-1基因共表达质粒pEGFP-C1-CD-Flt-1转染恶性胶质瘤细胞,ELISA法检测培养液上清中VEGF含量,实时定量PCR及免疫组化检测细胞VEGFmRNA及蛋白的表达,通过MTT... 目的研究CD、Flt-1基因对恶性胶质瘤细胞VEGF表达及生长的抑制作用。方法 CD、FLT-1基因共表达质粒pEGFP-C1-CD-Flt-1转染恶性胶质瘤细胞,ELISA法检测培养液上清中VEGF含量,实时定量PCR及免疫组化检测细胞VEGFmRNA及蛋白的表达,通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞活性的影响。结果转染72h后实验组细胞VEGFmRNA及蛋白水平显著降低,培养液中VEGF含量降低,细胞活性受到抑制,流式细胞术发现实验组细胞的G1期细胞比例明显高于对照组,细胞出现凋亡。结论重组质粒pEGFPC1-CD-Flt-1,其体外可抑制恶性胶质瘤细胞VEGFmRNA及蛋白的表达,抑制细胞活性、诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 cd基因 Flt-1基因 恶性胶质瘤
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含有CD基因的腺病毒载体的构建 被引量:2
17
作者 高军 朱伟 +3 位作者 崔龙 龙建秋 谷爱梅 李茂 《海军医学杂志》 1999年第2期132-135,共4页
目的 :构建携带CD基因和LacZ报告基因的腺病毒载体。方法 :先将真核表达载体质粒 pCI中的转录框架构建入腺病毒载体中 ,后再将CD和LacZ基因分别装配到框架的多克隆位点内。结果 :经过酶切鉴定成功地构建了分别携带CD基因和LacZ报告基因... 目的 :构建携带CD基因和LacZ报告基因的腺病毒载体。方法 :先将真核表达载体质粒 pCI中的转录框架构建入腺病毒载体中 ,后再将CD和LacZ基因分别装配到框架的多克隆位点内。结果 :经过酶切鉴定成功地构建了分别携带CD基因和LacZ报告基因的腺病毒载体 ,对肿瘤的前药转换基因治疗有重要意义。 展开更多
关键词 基因治疗 腺病毒载体 cd基因 载体构建
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肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD、pTRKH2-PsT/UPRT的构建 被引量:1
18
作者 叶鹏 李著华 +1 位作者 杨彦彪 王树人 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期86-90,共5页
目的利用婴儿双歧杆菌对实体瘤低氧区的靶向效应,构建肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD和pTRKH2-PsT/UPRT。方法用PCR的方法从质粒pGEX/CD和pGEX/UP-RT中扩增出CD基因和UPRT基因,双酶切CD基因、UPRT基因和质粒pTRKH2-PsT,... 目的利用婴儿双歧杆菌对实体瘤低氧区的靶向效应,构建肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD和pTRKH2-PsT/UPRT。方法用PCR的方法从质粒pGEX/CD和pGEX/UP-RT中扩增出CD基因和UPRT基因,双酶切CD基因、UPRT基因和质粒pTRKH2-PsT,分别连接后重组于大肠杆菌中。之后用电转化的方法将重组质粒转入婴儿双歧杆菌中。用RT-PCR检测该系统mR-NA水平的表达,SDS-PAGE检测该系统在蛋白质水平的表达。在黑色素瘤B16-F10细胞上检测该系统的体外肿瘤细胞杀伤效果。结果成功地将CD基因和UPRT基因转入了质粒pTRKH2-PsT,CD基因和UPRT基因的测序结果表明序列与Genebank公布的序列一致。RT-PCR检测到CD和UPRTmRNA水平的明显表达。在含有CD基因的婴儿双歧杆菌细胞全蛋白中发现了CD蛋白质的表达,在含有UPRT基因的婴儿双歧杆菌上清液中发现了UPRT蛋白质的表达。黑色素瘤细胞的低存活率证明了pTRKH2-PsT/CD、pTRKH2-PsT/UPRT自杀基因治疗系统对黑色素瘤的显著杀伤作用。结论肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD、pTRKH2-PsT/UPRT构建成功并显示出杀伤肿瘤细胞的作用。 展开更多
关键词 婴儿双歧杆菌 自杀基因 cd基因 UPRT基因 肿瘤靶向性
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rPB-DR(6)调控的溶瘤腺病毒对前列腺癌细胞的杀伤作用 被引量:2
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作者 付成伟 王洛夫 +3 位作者 江军 孙中义 兰卫华 张克勤 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第24期2659-2664,共6页
目的构建含rPB-DR(6)启动子和CD自杀基因的重组溶瘤腺病毒,观测其对雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞的杀伤作用,探索雄激素非依赖性前列腺癌治疗的新方法。方法应用分子生物学技术,构建并包装出重组溶瘤腺病毒Ad5-rPC,纯化并扩增,... 目的构建含rPB-DR(6)启动子和CD自杀基因的重组溶瘤腺病毒,观测其对雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞的杀伤作用,探索雄激素非依赖性前列腺癌治疗的新方法。方法应用分子生物学技术,构建并包装出重组溶瘤腺病毒Ad5-rPC,纯化并扩增,测定滴度。采用PCR方法对重组溶瘤腺病毒颗粒进行鉴定并测序,Western blot检测E1A、CD蛋白表达,TCID50法检测重组腺病毒感染癌细胞后的复制能力,应用CCK-8法检测重组病毒特异性杀伤能力。结果经PCR及测序鉴定证实成功构建了包含rPB-DR(6)启动子和CD基因的重组溶瘤腺病毒Ad5-rPC,测滴度为1.1×1011pfu/mL。Western blot检测到E1A和CD蛋白阳性表达。Ad5-rPC病毒感染前列腺癌细胞系细胞产生的子代病毒滴度均大于3.0×106pfu/mL,CCK-8法证实重组腺病毒对雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞均具有特异性杀伤能力,杀伤能力均大于65%。结论前列腺特异性启动子调控的溶瘤腺病毒能在前列腺癌细胞内靶向复制,并对雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞均有特异性杀伤作用。 展开更多
关键词 溶瘤腺病毒 rPB—DR(6)启动子 cd基因 前列腺癌 基因治疗
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原位转导胞嘧啶脱氨酶自杀基因对大肠肿瘤的杀伤作用 被引量:2
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作者 崔龙 林言箴 +4 位作者 朱正纲 陈雪华 刘炳亚 顾琴龙 郁宝铭 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期341-342,共2页
目的通过胞嘧啶脱氨酶(CD)基因对接种于裸鼠肿瘤的直接杀伤作用研究,探索原位转自杀基因抑制大肠肿瘤的治疗方法。方法将含 CD 基因的逆转录病毒载体进行包装、收获病毒上清后,将含 CD 基因的重组病毒上清直接注射到患瘤部位。结果在给... 目的通过胞嘧啶脱氨酶(CD)基因对接种于裸鼠肿瘤的直接杀伤作用研究,探索原位转自杀基因抑制大肠肿瘤的治疗方法。方法将含 CD 基因的逆转录病毒载体进行包装、收获病毒上清后,将含 CD 基因的重组病毒上清直接注射到患瘤部位。结果在给予前药5-FC 后,观察到明显的肿瘤杀伤作用。结论 CD 基因直接转导到肿瘤部位的治疗结果,提示其可以做为大肠癌综合治疗的有效手段之一。 展开更多
关键词 转导 大肠肿瘤 胞嘧啶脱氨酶 cd基因 基因治疗
原文传递
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