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小鼠VCAM-1表达载体的构建及稳定高表达间充质干细胞系C3H10T 1/2的建立 被引量：2
1
作者 陈慧 朱恒 +6 位作者 褚亚男 徐芬芬 刘元林 唐博 李喜梅 胡亮钉 张毅 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1396-1401,共6页
本研究旨在构建小鼠血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)的逆转录病毒载体,通过转染建立稳定高表达VCAM-1的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),并初步探讨VCAM-1基因过表达对MSC免疫学特性的影响。... 本研究旨在构建小鼠血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)的逆转录病毒载体,通过转染建立稳定高表达VCAM-1的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),并初步探讨VCAM-1基因过表达对MSC免疫学特性的影响。以小鼠脾脏组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入PMSCVmigr-1逆转录病毒载体,构建重组逆转录病毒表达质粒PMSCVmigr-1-mVCAM-1,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术转染293细胞,收获含有病毒颗粒的上清;用病毒上清感染间充质干细胞系(C3H10T 1/2)并检测其表达。采用3H-TdR掺入法测定高表达VCAM-1的MSC在淋巴母细胞转化实验中对淋巴细胞增殖的抑制作用。结果表明:酶切和测序鉴定证实,正确构建了小鼠VCAM-1的重组逆转录病毒表达质粒。逆转录病毒上清感染MSC后流式细胞术检测到目的基因VCAM-1在MSC表面高表达。高表达VCAM-1的MSC对刀豆素A诱导的淋巴细胞增殖具有显著抑制作用,且呈剂量效应关系。结论:成功构建了小鼠VCAM-1基因的重组逆转录病毒质粒并使其在MSC中稳定高表达。高表达VCAM-1的MSC对体外淋巴细胞增殖具有很强的抑制效果。本课题为进一步研究VCAM-1基因调控MSC干预免疫相关性疾病奠定了实验基础。 展开更多
关键词 血管细胞粘附分-1 间充质干细胞 c3h10T 1/2细胞 基因表达
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B7H4在间充质干细胞C3H10T1／2移植治疗小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎中的作用研究 被引量：1
2
作者 汲晓沛 古彦铮 +3 位作者 张莹 李楠 张学光 薛群 《国际免疫学杂志》 CAS 2015年第2期105-109,共5页
目的探讨B7．H4分子在C3H10T1／2细胞（C3H10）移植治疗小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）中的作用。方法①用慢病毒将B7-H4靶向shRNA转染至C3H10细胞（C3H10-shRNA）并观察其对小鼠脾脏细胞活化增殖的调节作用；②利用MOG35-55和完... 目的探讨B7．H4分子在C3H10T1／2细胞（C3H10）移植治疗小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）中的作用。方法①用慢病毒将B7-H4靶向shRNA转染至C3H10细胞（C3H10-shRNA）并观察其对小鼠脾脏细胞活化增殖的调节作用；②利用MOG35-55和完全弗氏佐剂制备小鼠EAE模型，将50只小鼠分为正常对照组、EAE模型组、C3H10细胞组、C3H10-NC细胞组、C3H10-shRNA细胞组，通过HE染色、Fast-blue染色观察病理学改变，用免疫组化法检测B7-H4表达，结合神经功能评分观察不同干预方式对EAE损伤组织结构和功能的影响。结果①下调表达B7-H4的C3H10细胞可使其对小鼠脾细胞的免疫抑制作用减弱；②C3H10移植于EAE小鼠可减少、延缓发病，而移植C3H10-shRNA细胞的EAE小鼠发病时间、神经缺损评分和炎性细胞浸润、脱髓鞘改变及B7-H4的阳性细胞数均介于EAE组与其他对照组之间。结论C3H10细胞移植治疗EAE的安全、有效，B7-H4分子可能通过影响C3H10的免疫调节作用等生物学行为而影响移植疗效。 展开更多
关键词 实验性变态反应性脑脊髓炎 间充质干细胞 B7-h4 c3h10 T1/2
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重组人骨形态发生蛋白9和2体外诱导成骨的活性分析 被引量：1
3
作者 甘强 胡侦明 +5 位作者 郝杰 江维 沈皆亮 王大武 钟小明 方剂 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期70-72,共3页
利用PCR扩增hBMP-9全长序列构建真核表达载体pcDNA4/His Max-BMP-9,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有100μg/ml博来霉素的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-9的表达量。经过细胞分离培养,得到稳定表达r... 利用PCR扩增hBMP-9全长序列构建真核表达载体pcDNA4/His Max-BMP-9,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有100μg/ml博来霉素的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-9的表达量。经过细胞分离培养,得到稳定表达rhBMP-9的6株单克隆细胞株,ELISA法检测rhBMP-9表达水平,最高可达1.13μg/24h/106cells。收集最高表达蛋白的单克隆株培养基上清,经His标签的蛋白纯化柱纯化,冻干法浓缩得到100μg/ml的rhBMP-9。用浓度100μg/ml的rhBMP-9和rhBMP-2分别刺激培养C3H10,各项成骨指标显示rhBMP-9具有一定的体外诱导成骨能力,但不及rhBMP-2。 展开更多
关键词 人骨形态发生蛋白9 真核表达 纯化蛋白 骨诱导 c3h10
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Hmox1促进BMP9诱导C3H10T1/2细胞向成骨分化
4
作者 刘晓骅 吉彩霞 +2 位作者 徐丽 董超群 罗进勇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期33-39,共7页
目的:研究血红素加氧酶1(hemeoxygenase 1,Hmox1)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导下间充质干细胞C3H10T1/2向成骨分化过程中发挥的作用。方法:用Ad-BMP9感染C3H10T1/2,分别用Q-PCR和Western blot检测Hmox1m... 目的:研究血红素加氧酶1(hemeoxygenase 1,Hmox1)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导下间充质干细胞C3H10T1/2向成骨分化过程中发挥的作用。方法:用Ad-BMP9感染C3H10T1/2,分别用Q-PCR和Western blot检测Hmox1mRNA和蛋白水平的变化;Hmox1激动剂COPP处理BMP9诱导的C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)染色和活性测定检测早期成骨指标ALP的变化;过表达Hmox1的重组腺病毒(Ad-Hmox1)处理BMP9诱导的C3H10T1/2细胞,ALP染色和活性测定早期成骨指标ALP,茜素红染色检测晚期成骨指标钙盐沉积,Western blot检测成骨相关基因COL1A1。结果:Ad-BMP9感染C3H10T1/2后,Hmox1的mRNA及蛋白水平均升高;BMP9与Hmox1激动剂COPP联用与BMP9组相比ALP的活性增强;Ad-Hmox1可以增强BMP9诱导下C3H10T1/2细胞的ALP活性和钙盐沉积,以及成骨相关基因COL1A1表达。结论:Hmox1可以促进BMP9诱导下C3H10T1/2细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 c3h10 T1/2 BMP9 血红素加氧酶1 成骨分化
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过表达CC趋化因子受体7的C3H10 T1/2细胞具有更强的免疫抑制效应
5
作者 张颖杰 郭希民 +5 位作者 钱志勇 刘志佳 高钰 周林 李红 韩岩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期873-878,共6页
目的研究过表达CC趋化因子受体7(CCR7)的C3H10 T1/2小鼠间充质干细胞系在小鼠皮肤移植模型中,是否具有比原始C3H10 T1/2细胞更强的免疫抑制作用。方法培养扩增稳定的小鼠C3H10 T1/2细胞,并利用慢病毒工具导入EGFP-CCR7基因;以C57BL/6小... 目的研究过表达CC趋化因子受体7(CCR7)的C3H10 T1/2小鼠间充质干细胞系在小鼠皮肤移植模型中,是否具有比原始C3H10 T1/2细胞更强的免疫抑制作用。方法培养扩增稳定的小鼠C3H10 T1/2细胞,并利用慢病毒工具导入EGFP-CCR7基因;以C57BL/6小鼠为供体获取皮片,以BALB/c小鼠为受体建立小鼠同种异系皮肤移植模型;实验动物分4组:CCR7+C3H10 T1/2细胞组、C3H10 T1/2组、同种异系对照组和同系对照组(受者小鼠移植同系小鼠皮片),分别于移植模型成功当天,经尾静脉注射1×106C3H10 T1/2细胞、1×106CCR7+C3H10 T1/2细胞、等体积生理盐水(对照组);观察皮片移植后的存活情况,并于皮片移植第12天,测定小鼠脾淋巴细胞中Th17细胞与调节性T细胞(Treg)的比例,HE染色观察皮片病理变化。结果受者小鼠皮片移植后12 d,外观、组织病理形态观察以及流式细胞术检测结果表明,CCR7+C3H10 T1/2细胞与C3H10 T1/2细胞的皮片存活情况均优于同种异系对照组;CCR7+C3H10 T1/2细胞皮片移植后存活情况优于C3H10 T1/2细胞组,且移植免疫反应程度轻于C3H10 T1/2细胞组。结论 CCR7+C3H10 T1/2细胞相对于正常的C3H10 T1/2细胞,拥有更好的免疫抑制效应,可有效的降低移植免疫炎性反应,改善移植物的生存状态。 展开更多
关键词 c3h10 T1/2细胞系 间充质干细胞 cc趋化因子受体7(ccR7) 皮肤移植 免疫耐受
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C3H10T 1/2小鼠胚胎成纤维细胞Dlxin 1基因表达及骨形态发生蛋白2的调控机制
6
作者 万阳 杨松海 +4 位作者 潘秋辉 温传俊 孙奋勇 马纪 洪岸 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第33期6518-6522,共5页
背景:Dlxin1可与成骨相关转录因子Dlx、Msx家族成员相互作用调节其转录活性,骨形态发生蛋白2可诱导小鼠胚胎成纤维细胞(C3H10T1/2)向成骨细胞分化。目的:对C3H10T1/2小鼠胚胎成纤维细胞中Dlxin1基因的表达及骨形态发生蛋白2调控机制进... 背景:Dlxin1可与成骨相关转录因子Dlx、Msx家族成员相互作用调节其转录活性,骨形态发生蛋白2可诱导小鼠胚胎成纤维细胞(C3H10T1/2)向成骨细胞分化。目的:对C3H10T1/2小鼠胚胎成纤维细胞中Dlxin1基因的表达及骨形态发生蛋白2调控机制进行初探。设计、时间及地点:细胞分子水平实验,于2007-03/10在暨南大学生物工程研究所实验室完成。材料:C3H10T1/2细胞为ATCC产品,骨形态发生蛋白2为自产,DH5α为自备。方法:用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测骨形态发生蛋白2对基因表达的影响,用双荧光报告载体系统搜寻Dlxin1的上游启动子元件,用凝胶迁移实验(EMSA)对其精确定位。主要观察指标:①细胞中Dlxin1基因mRNA的表达情况。②pGL3-Dlxin1系列缺失突变报告载体荧光活性及启动子片段与C3H10T1/2细胞核蛋白的结合能力检测。结果:在转录水平上骨形态发生蛋白2可以诱导Dlxin1基因表达上调;Dlxin1启动子基础活性和骨形态发生蛋白2诱导活性调控区域均位于转录起始位点上游-943～-728bp之间;EMSA证实,-758～-748bp这一片段是调控核心区域。结论:转录因子通过与Dlxin1启动子上游TATAbox结合来调控Dlxin1基因的转录。 展开更多
关键词 Dlxin 1 启动子 骨形态发生蛋白2 成骨 c3h10T 1/2
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重组人骨形态发生蛋白-6的表达、纯化及其活性分析 被引量：8
7
作者 阳菊华 赵丽 +3 位作者 杨爽 吴双庆 张杰 朱天慧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期556-560,共5页
利用RT_PCR从人胎盘组织中获取BMP_6成熟肽的cDNA片段 ,并克隆到表达载体pET_15b中 ,构建hBMP_6成熟肽的非融合蛋白表达质粒pET_BMP6 ,转化E .coliBL2 1(DE3)。IPTG诱导 4h后 ,工程菌高表达rhBMP_6成熟肽 ,在SDS_PAGE上出现预期的新蛋白... 利用RT_PCR从人胎盘组织中获取BMP_6成熟肽的cDNA片段 ,并克隆到表达载体pET_15b中 ,构建hBMP_6成熟肽的非融合蛋白表达质粒pET_BMP6 ,转化E .coliBL2 1(DE3)。IPTG诱导 4h后 ,工程菌高表达rhBMP_6成熟肽 ,在SDS_PAGE上出现预期的新蛋白带 (≈ 15kD) ,约占菌体总蛋白的 10 % ,表达产物以包涵体形式存在。分离和纯化的包涵体溶解于 8mol L尿素 ,在变性溶解状态下经阳离子交换层析 ,得到目的蛋白纯度达 95 %以上。再经稀释复性后 ,约 80 %的rhBMP_6形成同源二聚体。体外活性分析结果显示 :rhBMP_6可以提高C3H10T1 2细胞碱性磷酸酶活性及促进I型胶原、Osterix(Osx)和骨钙素 (Osteocalcin)等成骨细胞表型转化标记基因mRNA的表达 。 展开更多
关键词 重组 人骨形态发生蛋白-6 表达 纯化 活性
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BMP_9对C_3H10T_(1/2)干细胞向心肌样细胞分化的影响 被引量：10
8
作者 谭金童 陈沅 向平 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期672-676,共5页
目的:研究骨形态形成蛋白9(Bone morphogenetic proteins9,BMP9)在C3H10T1/2干细胞向心肌细胞分化过程中的影响。方法:以高滴度(2.67ml/L)pAdEasy-BMP9重组腺病毒质粒转染C3H10T1/2干细胞,1周后应用RT-PCR方法及激光共聚焦方法分别检测C... 目的:研究骨形态形成蛋白9(Bone morphogenetic proteins9,BMP9)在C3H10T1/2干细胞向心肌细胞分化过程中的影响。方法:以高滴度(2.67ml/L)pAdEasy-BMP9重组腺病毒质粒转染C3H10T1/2干细胞,1周后应用RT-PCR方法及激光共聚焦方法分别检测C3H10T1/2干细胞中心肌特异转录因子及特异性蛋白的表达变化。2周后应用电子显微镜观察细胞超微结构的改变。结果:C3H10T1/2干细胞经pAdEasy-BMP9重组腺病毒质粒诱导1周后,细胞体积明显变大,排布走向趋于一致,细胞间连接紧密,折光性增强;细胞中开始出现心肌特异性转录因子NKx2.5、GATA-4、MEF2C及心肌特异性表达蛋白连接蛋白43(Connex-in43,Cx43)和心肌特异性肌钙蛋白T(Cardiac isoform of TropninT,cTnT)的表达;出现心肌特异性超微结构肌丝和闰盘。结论:BMP9可影响体外培养的C3H10T1/2干细胞定向分化为心肌样细胞。 展开更多
关键词 BMP9 c3h10T1/2干细胞 分化 心肌细胞
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真核细胞中mRNA的降解机制 被引量：2
9
作者 章国卫 朱睦元 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期49-53,共5页
细胞中不同的ｍ ＲＮＡ 半寿期差异很大，ｍ ＲＮＡ 的稳定性受到多种因素的影响，现在已经发现了许多对ｍ ＲＮＡ 的稳定性有影响的顺式因子和反式因子。大量的研究证明在真核细胞内存在复杂的机制调节ｍ ＲＮＡ 的稳定与降解及其所引... 细胞中不同的ｍ ＲＮＡ 半寿期差异很大，ｍ ＲＮＡ 的稳定性受到多种因素的影响，现在已经发现了许多对ｍ ＲＮＡ 的稳定性有影响的顺式因子和反式因子。大量的研究证明在真核细胞内存在复杂的机制调节ｍ ＲＮＡ 的稳定与降解及其所引起的基因表达。现在可以肯定在真核细胞中至少存在着三种ｍ ＲＮＡ的降解方式：依赖于脱腺苷酸的降解，无义密码介导的ｍ ＲＮＡ 的降解和核酸内切酶的水解。其中依赖于脱腺苷酸的降解方式是细胞内大多数ｍ ＲＮＡ 降解的主要途径。 展开更多
关键词 MRNA 降解 真核细胞 稳定性 顺式因子 反式因子
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BMP2具有诱导C3H10T1/2细胞成脂肪分化的能力 被引量：7
10
作者 谢在春 陈琼玉 +2 位作者 杨松海 孙奋勇 于永春 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期142-147,共6页
探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成脂肪分化能力,为临床脂肪代谢疾病的治疗提供理论基础.培养多潜能的间充质干细胞C3H10T1/2,用20μg/mlBMP2对其诱导一定时间后,RT-PCR检测是否存在BMP信号通路中关键分子BM... 探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成脂肪分化能力,为临床脂肪代谢疾病的治疗提供理论基础.培养多潜能的间充质干细胞C3H10T1/2,用20μg/mlBMP2对其诱导一定时间后,RT-PCR检测是否存在BMP信号通路中关键分子BMP受体BMPRI,BMPRⅡ及Smad1/5/8的表达.Western印迹检测Smad蛋白及MAPK信号通路中p38磷酸化水平变化,QRT-PCR检测成脂肪标志基因aP2以及成脂肪相关转录因子PPARγ,C/EBPα,C/EBPβ表达水平,同时用油红O染色,观测C3H10T1/2细胞成脂肪分化情况.经BMP2诱导后,C3H10T1/2细胞成脂肪分化标志(油红O染色)显著增加,Smad蛋白及p38磷酸化水平有所上升,同时成脂肪标志基因aP2以及成脂肪相关转录因子PPARγ,C/EBPα,C/EBPβ表达水平各有一定程度提高.BMP2具有诱导C3H10T1/2细胞成脂肪分化能力,其成脂肪分化呈现对BMP2作用的时间依赖性. 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白 c3h10T1/2细胞 成脂分化
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BMP2诱导C3H10T1/2细胞成软骨分化的分子机制研究 被引量：6
11
作者 谢在春 郭卫真 +3 位作者 卢东荣 刘妮 庞志宇 于永春 《广州医学院学报》 2012年第2期11-15,共5页
目的:探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2向成软骨分化的可能分子机制。方法:20μg/mL BMP2诱导C3H10T1/2细胞0,4 h,1,3,6,10,13,15 d后,RT-PCR检测BMP信号通路中关键分子BMPRⅠ,BMPRⅡ,Smad1/5/8的表达,Western... 目的:探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2向成软骨分化的可能分子机制。方法:20μg/mL BMP2诱导C3H10T1/2细胞0,4 h,1,3,6,10,13,15 d后,RT-PCR检测BMP信号通路中关键分子BMPRⅠ,BMPRⅡ,Smad1/5/8的表达,Western blot检测smad蛋白及MAPK信号通路中p38磷酸化水平变化,QRT-PCR检测成软骨标志基因aggrecan,Col2a1以及成软骨相关转录因子FGFR3,Sox9表达水平,同时用Alcine Blue染色,观测C3H10T1/2细胞成软骨分化情况。结果:经BMP2诱导后,C3H10T1/2细胞表现出成软骨分化,smad蛋白及p38磷酸化水平有所上升,同时成软骨标志基因Col2a1以及成软骨相关转录因子FGFR3,Sox9表达水平都有增加。与未诱导组相比,Col2a1,FGFR3,Sox9在3 d的表达与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),FGFR3,Sox9在6 d的表达与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在一定培养条件下,BMP2具有诱导C3H10T1/2细胞成软骨分化能力。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白2 c3h10T1 2细胞 成软骨分化
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BPI-BD3融合抗菌肽修饰C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响 被引量：6
12
作者 张欣然 刘翠 +3 位作者 钱智勇 徐红梅 郭希民 郭红延 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期722-726,共5页
目的观察p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响。方法使用重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞,并采用RT-PCR及Western blotting进行鉴定。取30只KM小鼠行直径1cm的全层皮肤缺损创面,并接种金黄色葡... 目的观察p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响。方法使用重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞,并采用RT-PCR及Western blotting进行鉴定。取30只KM小鼠行直径1cm的全层皮肤缺损创面,并接种金黄色葡萄球菌制造感染创面。造模后,随机均分为3组每组10只,T组尾静脉注射p Adxsi-BPIBD3转染后的C3H10T1/2细胞,C组注射未转染的C3H10T1/2细胞,N组注射等量PBS。通过大体观察、痂下细菌计数、测定创面残留面积、HE染色等来评价BPI-BD3修饰的C3H10T1/2的促愈效果。结果与其余两组相比,T组痂下菌量较少(P<0.05),且T组愈合较快,7、14d时,创面残留面积与其余两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,与其余两组相比,T组炎症较轻、表皮生长较快。结论 BPI-BD3修饰的C3H10T1/2可以促进金黄色葡萄球菌所致的小鼠感染创面的愈合。 展开更多
关键词 c3h10T1/2细胞 Β防御素 杀菌/通透性增加蛋白 伤口感染
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rhBMP-2基因转染小鼠间充质干细胞的成骨活性和BMP-2的释放规律分析 被引量：5
13
作者 罗高斌 劳山 +4 位作者 杜刚 韦达隆 杨稀仁 柏彬 韦华良 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期2627-2632,共6页
通过pcDNA3.1-rh BMP-2质粒转染小鼠间充质干细胞C3H10T1/2研究其成骨能力和增殖效应,探讨BMP-2的释放规律。将预先准备好的重组rhBMP-2质粒转染至C3H10T1/2细胞,利用G418抗药性筛查转染成功的细胞。将研究实验细胞分为转染组、空载组... 通过pcDNA3.1-rh BMP-2质粒转染小鼠间充质干细胞C3H10T1/2研究其成骨能力和增殖效应,探讨BMP-2的释放规律。将预先准备好的重组rhBMP-2质粒转染至C3H10T1/2细胞,利用G418抗药性筛查转染成功的细胞。将研究实验细胞分为转染组、空载组、空白组。通过ELISA检测各组细胞上清液中的BMP-2含量,CCK-8试剂盒检测各组细胞的增值活性,通过测定ALP活性和进行ALP、钙茜素红染色,检测各组细胞成骨活性。结果显示转染组BMP-2浓度随着时间推移逐渐达到高峰并维持一段时间,各检测点均明显高于空白组和空载组（p〈0.05）,转染组细胞较其余两组更具增殖活性、成骨活性（p〈0.05）。此结果表明C3H10T1/2细胞是pcDNA3.1/rhBMP-2重组质粒的良好宿主,转染后能在一定时间内平稳和持续地表达外源性BMP-2,有较强诱导细胞成骨分化能力。 展开更多
关键词 BMP-2 重组质粒 c3h10T1/2 成骨细胞分化
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过表达miR-155抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化 被引量：5
14
作者 刘红霞 施琼 +4 位作者 周一青 安利钦 严树涓 张汝益 翁亚光 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期9-18,共10页
目的:研究过表达miR-155对BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响。方法:(1)用重组腺病毒Ad-BMP9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,定量PCR(qPCR)检测miR-155的表达,RT-PCR检测Runx2和ALP的表达。(2)miR-155和BMP9共同处理C3H10T... 目的:研究过表达miR-155对BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响。方法:(1)用重组腺病毒Ad-BMP9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,定量PCR(qPCR)检测miR-155的表达,RT-PCR检测Runx2和ALP的表达。(2)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,qPCR检测miR-155的表达,ALP活性和染色检测早期成骨能力。(3)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,诱导分化14d茜素红S染色检测晚期成骨能力。(4)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,qPCR检测成骨分化相关基因Runx2、OSX、COL1A1、ALP、OCN和OPN的表达。(5)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,Western blot检测p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达。(6)qPCR和Western blot分别检测HIF1α和VEGF的mRNA表达水平和蛋白质表达水平。(7)应用荧光素酶报告基因对miR-155的靶基因进行筛选和验证。结果:在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化过程中,过表达miR-155降低ALP活性及染色;减少钙盐沉积;成骨分化相关基因Runx2、OSX、COL1A1、ALP、OCN和OPN表达降低;抑制p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达;HIF1α和VEGF的mRNA和蛋白表达水平减少。在对靶基因的检测中,过表达miR-155可以抑制HIF1α蛋白水平的表达,但对其mRNA水平无明显影响。结论:miR-155过表达减弱BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化,可能是通过抑制Smad/BMP信号通路发挥作用,也有可能是通过抑制靶基因HIF1α的表达来发挥作用。 展开更多
关键词 MIR-155 骨形态发生蛋白9 c3h10T1/2成骨分化hIF1α
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小鼠干细胞成骨和成软骨分化特异性微小RNA的初步研究 被引量：4
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作者 幸嵘 孔清泉 +4 位作者 项舟 杨婧 罗静聪 邓力 解慧琪 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1009-1016,共8页
目的通过对C3H10T1/2细胞进行成骨及成软骨分化,利用微小RNA(microRNA,miRNA)芯片技术筛选成骨分化和成软骨分化中差异miRNA,以期寻找调节C3H10T1/2细胞成骨及成软骨分化的特异性miRNA。方法取C3H10T1/2细胞系,分别行成骨和成软骨诱导分... 目的通过对C3H10T1/2细胞进行成骨及成软骨分化,利用微小RNA(microRNA,miRNA)芯片技术筛选成骨分化和成软骨分化中差异miRNA,以期寻找调节C3H10T1/2细胞成骨及成软骨分化的特异性miRNA。方法取C3H10T1/2细胞系,分别行成骨和成软骨诱导分化,对诱导组和对照组进行鉴定。然后通过miRNA芯片技术筛选分化前后2倍变化幅度且平均标准化信号值>2的差异miRNA,并行实时荧光定量PCR(real-time fl uorescence quantitative PCR,RT-qPCR)验证。结果诱导7 d成骨诱导组较对照组有明显ALP表达(P<0.05);诱导7、14、21 d,RT-qPCR检测成骨诱导组成骨标志物Runx2、丝氨酸蛋白酶7(serine protease 7,Sp7)、Ⅰ型胶原、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA相对表达量均显著高于诱导0 d时(P<0.05);诱导21 d,Western blot检测成骨诱导组Runx2、Sp7、Ⅰ型胶原、OPN蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05)。成软骨诱导5、10、15 d,RT-qPCR检测成软骨诱导组软骨标志物SOX9、Ⅱ型胶原、蛋白多糖(Aggrecan)、透明质酸合成酶(Has2)mRNA相对表达量均显著高于诱导0 d时(P<0.05);诱导15 d,Western blot检测成软骨诱导组SOX9、Ⅱ型胶原、Aggrecan、Has2蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05)。通过miRNA芯片技术分别筛选出10个成骨和3个成软骨2倍变化幅度且平均标准化信号值>2的差异miRNA。除miR-455-3p之外,其余差异miRNA验证结果与芯片结果比较有较好一致性。结论通过miRNA芯片技术对C3H10T1/2细胞系以及其诱导成骨和成软骨分化细胞进行检测对比,发现部分miRNA表达量在诱导后细胞中发生变化,为进一步挑选成骨和成软骨特异性miRNA进行功能验证和靶基因预测奠定了基础。 展开更多
关键词 c3h10T1 2细胞 成骨分化 成软骨分化 微小RNA
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盐酸法舒地尔对C3H10T1/2细胞增殖与成脂分化的影响 被引量：4
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作者 屈长青 常好才 +1 位作者 宫雯珺 姬云涛 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第4期33-36,44,共5页
【目的】探讨Rho分子信号通路阻断剂盐酸法舒地尔(HA1077)对C3H10T1/2细胞体外增殖及成脂分化的影响。【方法】体外培养C3H10T1/2细胞株,用HA1077浓度梯度培养液(0(对照组),20,40,60,80,100μmol/L)对其进行处理,通过MTT比色法和油红O... 【目的】探讨Rho分子信号通路阻断剂盐酸法舒地尔(HA1077)对C3H10T1/2细胞体外增殖及成脂分化的影响。【方法】体外培养C3H10T1/2细胞株,用HA1077浓度梯度培养液(0(对照组),20,40,60,80,100μmol/L)对其进行处理,通过MTT比色法和油红O染色法分别检测C3H10T1/2细胞的增殖和分化情况。【结果】HA1077对C3H10T1/2细胞的体外增殖有一定的抑制作用,且呈现出一定的浓度依赖性。但HA1077可提高C3H10T1/2细胞的成脂分化效率,也呈浓度依赖性;且当HA1077浓度大于60μmol/L后,细胞成脂分化率与对照组差异极显著(P<0.01)。【结论】HA1077可抑制C3H10T1/2细胞的增殖,但同时可以促进其成脂分化。 展开更多
关键词 盐酸法舒地尔 c3h10T1 2 增殖 成脂分化
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MYOZ2通过负调控TCAP的表达促进C3H10T1/2细胞成脂分化 被引量：4
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作者 吴怡琦 李文霞 +12 位作者 杨帅 张燕伟 何志强 李文新 杨阳 赵燕 刘宏 张明青 高鹏飞 蔡春波 郭晓红 李步高 曹果清 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期380-390,共11页
本研究旨在明确钙调磷酸酶肌小节结合蛋白2(myozenin2,MYOZ2)的组织表达特性,阐明其对C3H10T1/2细胞成脂分化的影响及可能的作用机制。采集180日龄马身猪、60日龄ICR小鼠、35日龄罗斯肉鸡和12月龄小尾寒羊背最长肌、皮下脂肪和肝组织,检... 本研究旨在明确钙调磷酸酶肌小节结合蛋白2(myozenin2,MYOZ2)的组织表达特性,阐明其对C3H10T1/2细胞成脂分化的影响及可能的作用机制。采集180日龄马身猪、60日龄ICR小鼠、35日龄罗斯肉鸡和12月龄小尾寒羊背最长肌、皮下脂肪和肝组织,检测MYOZ2基因mRNA表达。结果显示,MYOZ2基因在所检测的物种中表现出相似的组织表达规律,在背最长肌表达量最高,皮下脂肪与肝组织低水平表达。在C3H10T1/2细胞中沉默MYOZ2基因后,qRT-PCR结果显示,与对照组相比,成脂关键基因PPARγ、FABP4表达极显著下调(P<0.01);Western印迹结果表明,PPARγ蛋白含量显著降低(P<0.05);油红O染色发现,沉默MYOZ2基因后脂滴数明显减少,甘油三酯含量显著降低(P<0.05)。利用qRT-PCR技术检测沉默MYOZ2基因后,脂肪代谢相关基因SCD、FASN、SREBP1、NR1H3、DGAT1、PNPLA2、HSL、CES1、CPT1等的表达,结果显示,SCD、FASN、SREBP1、PNPLA2、HSL极显著下调(P<0.01),NR1H3显著下调(P<0.05),DGAT1表达下调但差异不显著,CES1、CPT1显著上调(P<0.05)。利用STRING数据库构建MYOZ2相关蛋白质互作网络图,发现MYOZ2可能通过肌联蛋白帽(Titin-cap,TCAP)与PPARγ相互作用进而影响成脂分化。沉默TCAP基因,qRT-PCR结果显示,与对照组相比,成脂关键基因PPARγ、FABP4表达极显著上调(P<0.01);Western印迹结果表明,与对照组相比,PPARγ蛋白含量显著升高(P<0.05);油红O染色发现,沉默TCAP基因后脂滴数明显增多,甘油三酯含量显著升高(P<0.05)。利用qRT-PCR技术检测沉默MYOZ2后TCAP基因的表达结果显示,沉默MYOZ2后TCAP的表达极显著升高(P<0.01)。综上所述,MYOZ2基因在背最长肌中表达量最高,在皮下脂肪和肝组织中也有少量表达。此外,MYOZ2可能通过MYOZ2-TCAP-PPARγ途径影响成脂关键基因PPARγ和FABP4的表达,进而调控脂肪酸代谢相关基因SCD、FASN、SREBP1、NR1H3、DGAT1、PNPLA2、HSL、CES1、CPT1,在成脂分化过程中发挥� 展开更多
关键词 钙调磷酸酶肌小节结合蛋白2 肌联蛋白帽 表达特性 c3h10T1/2细胞 成脂分化
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Islet-1在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化 被引量：4
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作者 林建萍 田杰 +4 位作者 刘官信 鲁荣 刘建平 智深深 朱静 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第4期363-368,共6页
目的筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法... 目的筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法培养转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞,观察细胞形态。免疫荧光和免疫印迹检测Islet-1的表达部位和最高表达时间点。免疫共沉淀与Islet-1结合的蛋白。免疫印迹验证Islet-1相互作用的HATs和HDACs。结果诱导组细胞形态出现心肌样细胞改变。各组Islet-1主要在胞质表达。诱导组Islet-1表达量在诱导后3周最高(0.782±0.015)。诱导组Islet-1表达量显著高于空白对照组和C3H10组(分别为0.819±0.026,0.127±0.006和0.126±0.001)(P<0.05),免疫共沉淀技术可行。与Islet-1相互作用的HATs和HDACs有GCN5、P300/CBP和HDAC4。结论 Islet-1与GCN5、P300/CBP和HDAC4相互作用特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。 展开更多
关键词 c3h10T1/2细胞 Islet-1 心肌样细胞 组蛋白乙酰化
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IGF-1介导MAPKs通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用
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作者 李冬 董晓俊 徐成栋 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期668-672,共5页
目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐... 目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐沉积情况,qRT-PCR法检测成骨特性因子核心结合因子α-1(RUNX2)、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平,Western Blot法检测MAPK通路蛋白磷酸化表达水平。对数期细胞分为空白组、IGF-1组、ERK通路抑制剂(PD98059)组、PD+IGF-1组、p38通路抑制剂(SB202192)组、SB+IGF-1组,qRT-PCR法检测成骨特性因子RUNX2、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平。结果不同浓度IGF-1组ALP显色加深,ALP活性升高,钙盐结节形成增多,RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平升高,磷酸化ERK、p38、JNK蛋白表达增加,具有剂量效应(P<0.05)。与空白组比较,PD组、SB组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05);但与IGF-1组比较,PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论IGF-1促进C3H10T1/2细胞成骨分化,其作用机制可能与激活ERK信号通路和p38 MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子1 丝裂原活化蛋白激酶信号通路 c3h10T1/2细胞 成骨分化
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纳米细菌对人成骨细胞C_3H_(10)的细胞毒作用 被引量：4
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作者 张名均 傅长虹 张德纯 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期14-18,共5页
目的比较纳米细菌(nanobacteria,NB)与羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)对成骨细胞的细胞毒作用,进一步探讨引起细胞毒作用的机制。方法实验分为正常对照组、HA组、NB组,其中HA组和NB组悬液浓度均为2麦氏浊度(M),对照组只加培养基,分别作... 目的比较纳米细菌(nanobacteria,NB)与羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)对成骨细胞的细胞毒作用,进一步探讨引起细胞毒作用的机制。方法实验分为正常对照组、HA组、NB组,其中HA组和NB组悬液浓度均为2麦氏浊度(M),对照组只加培养基,分别作用成骨细胞,通过CCK-8试剂盒检测其对细胞的增殖抑制作用;采用Hoechest33258荧光染色和Annexin V-FITC/PC双标法流式细胞仪(flow cotymetry)检测细胞凋亡率;倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态的变化;Western blot法检测钙化相关蛋白BMP-2、凋亡相关蛋白Bax的表达。结果 CCK-8结果显示:NB对人成骨细胞C3H10有细胞增殖抑制作用,而HA则没有。Hoechst33258荧光染色和双标法流式细胞仪结果显示:NB对人成骨细胞C3H10主要通过促进细胞凋亡发挥细胞毒作用,而HA对人成骨细胞C3H10无细胞毒性作用。在倒置显微镜下观察,作用48 h后的人成骨细胞C3H10形态无明显变化。透射电镜结果显示:NB可引起人成骨细胞C3H10发生凋亡,出现凋亡小体;而HA组和对照组无明显变化。Western blot结果显示:NB组的钙化相关蛋白BMP-2和凋亡相关蛋白Bax均高于对照组;而HA组和对照组比较,HA组钙化相关蛋白BMP-2高于对照组,而凋亡相关蛋白Bax无明显变化。结论与对照组比较,纳米细菌能引起人成骨细胞C3H10细胞毒性作用,主要是通过促进细胞凋亡发挥细胞毒作用,能促进钙化相关蛋白BMP-2的表达,凋亡相关蛋白Bax的表达升高也预示着纳米细菌可促进细胞发生凋亡;而羟基磷灰石对人成骨细胞C3H10无细胞毒性作用,可促进钙化相关蛋白BMP-2的表达,但不能促进人成骨细胞C3H10发生凋亡。 展开更多
关键词 纳米细菌 羟基磷灰石 人成骨细胞c3h10
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