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不同浓度EPA和DHA对C2C12肌管细胞IL-6表达及TRPV1/PKC/Ca^(2+)信号通路的影响 被引量：1
1
作者 曾欢婷 杨娴 +2 位作者 毛联智 魏文婷 毛丽梅 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期148-156,共9页
目的探讨不同浓度二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对C2C12肌管细胞IL-6表达与分泌的调节作用和机制。方法采用25、50、100、200、400μmol/L EPA或DHA处理C2C12肌管细胞12、24、36... 目的探讨不同浓度二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对C2C12肌管细胞IL-6表达与分泌的调节作用和机制。方法采用25、50、100、200、400μmol/L EPA或DHA处理C2C12肌管细胞12、24、36 h,设立BSA对照组。MTT检测细胞活性,PCR与Western blot分别检测IL-6的mRNA与蛋白表达水平,ELISA测定IL-6分泌水平,检测TRPV1、PKC的mRNA表达水平及TRPV1、PKC、p-PKC蛋白表达水平,Fluo-4 AM钙离子荧光探针检测胞内Ca^(2+)浓度。结果IL-6表达与分泌方面,100μmol/L EPA或DHA干预24h可显著提高肌管细胞IL-6 mRNA表达;100μmol/LEPA或DHA干预24h、36h可显著促进IL-6分泌;100μmol/L EPA或DHA可呈时间梯度上调IL-6蛋白表达水平。各浓度EPA或DHA干预肌管细胞24h后,IL-6 mRNA表达水平与分泌均呈浓度梯度增加,其中200、400μmol/L效果最为显著;50、100、200μmol/L EPA与25、50、100、200μmol/L DHA干预组IL-6蛋白质表达水平较对照组均显著增加,100μmol/L EPA和DHA增加IL-6蛋白表达最为显著。信号通路方面,100、200、400μmol/L EPA与DHA显著提高肌管细胞TRPV1 mRNA表达水平;200、400μmol/L EPA与100、200、400μmol/L DHA干预组TRPV1蛋白表达水平较对照组显著升高。400μmol/L EPA与DHA可显著上调PKC mRNA表达水平;100、200、400μmol/L EPA干预组p-PKC蛋白表达水平与p-PKC/PKC比值显著增高,而200、400μmol/L DHA可显著增加肌管细胞PKC、p-PKC蛋白表达水平以及p-PKC/PKC比值。各浓度EPA与DHA干预组均显著增加肌管细胞胞内Ca^(2+)含量。结论EPA与DHA在适宜浓度可以促进C2C12肌管细胞IL-6的表达与分泌,EPA和DHA可能通过TRPV1/PKC/Ca^(2+)信号通路刺激肌源性IL-6的表达与分泌。[营养学报,2023,45(2):148-156] 展开更多
关键词 c2c12肌管细胞 DHA EPA 肌源性IL-6 脂质代谢 TRPV1/PKc/ca2+信号通路
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长时间不同频率电刺激对C2C12肌管细胞代谢指标和基因表达的影响 被引量：2
2
作者 孙景权 上官若男 +2 位作者 李松波 严翊 谢敏豪 《首都体育学院学报》 CSSCI 北大核心 2019年第5期459-466,共8页
探究长时间不同频率EPS对C2C12肌管细胞代谢指标和基因表达的影响,试图建立EPS诱发C2C12肌管细胞TG堆积和线粒体功能增强的细胞模型。方法:采用4种EPS方案诱发C2C12肌管细胞收缩,实验分为5组:对照组(C组)、30 V+2 ms+0.5 Hz组(0.5 Hz组)... 探究长时间不同频率EPS对C2C12肌管细胞代谢指标和基因表达的影响,试图建立EPS诱发C2C12肌管细胞TG堆积和线粒体功能增强的细胞模型。方法:采用4种EPS方案诱发C2C12肌管细胞收缩,实验分为5组:对照组(C组)、30 V+2 ms+0.5 Hz组(0.5 Hz组)、30 V+2 ms+1 Hz组(1 Hz组)、30 V+2 ms+5 Hz组(5 Hz组)、30 V+2 ms+10 Hz组(10 Hz组)。比色法检测细胞内TG、乳酸和ATP含量,RT-PCR方法检测细胞中IL-6、MyHCⅠ、MyHCⅡa、MyHCⅡb、MyHCⅡx、Cyt C和PGC-1α等mRNA含量。结果:1)与C组相比,EPS后即刻,频率0.5~10 Hz组乳酸含量非常显著增加(P<0.01);频率1 Hz和10 Hz组细胞中ATP含量均显著降低(P<0.05),其中频率0.5 Hz和5 Hz组细胞中ATP含量非常显著降低(P<0.01)。2)与C组相比,频率0.5 Hz和1 Hz组MyHCⅠ和MyHCⅡb的mRNA含量显著增加(P<0.05),频率5 Hz组MHC4种亚型mRNA含量变化不明显(P>0.05),频率10 Hz组MyHCⅠ、MyHCⅡa和MyHCⅡb亚型mRNA含量非常显著降低(P<0.01),而MyHCⅡx亚型mRNA含量非常显著增加(P<0.01)。3)与C组相比,频率0.5~10 Hz组PGC-1α和Cyt C mRNA含量均显著增加(P<0.05),同时EPS增加了C2C12细胞中IL-6 mRNA的含量(P<0.05)。4)与C组相比,4 d EPS方案停止后12 h,各组肌管细胞中TG含量均没有出现变化;4 d EPS方案停止后24 h,0.5 Hz组和1 Hz组肌管细胞中TG含量增加但无显著性(P>0.05);4 d EPS方案停止后36 h,0.5 Hz组和5 Hz组细胞中TG含量显著增加(P<0.05)。结论:EPS方案(电压14 V、频率1 Hz、单次时长2 ms和每天2 h共2 d,紧接着,电压30 V、频率0.5 Hz或1 Hz或5 Hz、单次时长2 ms和每天3 h共2 d,EPS停止后36 h)能够明显诱发C2C12肌管细胞TG含量堆积和线粒体功能增强。 展开更多
关键词 EPS c2c12肌管细胞 线粒体 TG 电脉冲 模型
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糖负荷对小鼠小肠网膜素基因表达的影响及网膜素对C2C12细胞胰岛素增敏的机制 被引量：2
3
作者 童国玉 胡云 +3 位作者 沈山梅 陈炜 黄洪 朱大龙 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第8期1435-1437,1422,共4页
目的:观察口服葡萄糖负荷对小鼠小肠组织网膜素基因表达的影响及网膜素对C2C12肌管细胞胰岛素敏感性的影响,并进一步探讨其机制。方法:半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测小鼠小肠组织网膜素mRNA的表达;葡萄糖转运实验观察网膜素... 目的:观察口服葡萄糖负荷对小鼠小肠组织网膜素基因表达的影响及网膜素对C2C12肌管细胞胰岛素敏感性的影响,并进一步探讨其机制。方法:半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测小鼠小肠组织网膜素mRNA的表达;葡萄糖转运实验观察网膜素对C2C12肌管细胞胰岛素敏感性的影响;Western blot检测Akt(Ser473)的磷酸化水平。结果:口服葡萄糖负荷30min后小鼠小肠组织网膜素基因表达显著减低(P<0.05),而60min后恢复至负荷前水平;葡萄糖转运实验发现:网膜素作用10min对C2C12肌管细胞基础葡萄糖转运无影响,但显著增加了胰岛素刺激的葡萄糖转运(P<0.05);Western Blot发现:网膜素和AICAR均显著增加了C2C12肌管细胞Ak(tSer473)的磷酸化水平(P<0.05)。结论:网膜素作为一种胃肠激素还受到葡萄糖负荷的调节,在C2C12肌管细胞,网膜素可通过增加Akt的磷酸化发挥胰岛素增敏作用。 展开更多
关键词 网膜素 基因表达 c2c12肌管细胞 胰岛素敏感性 Akt
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LPS通过AKT/FOXO1信号通路诱导C2C12肌管细胞MuRF1基因转录 被引量：2
4
作者 刘妍 梁辉煌 +3 位作者 刘玉兰 唐中林 汪文俊 张晶 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期374-380,共7页
以C2C12肌管细胞为试验材料,探讨脂多糖(LPS)诱导的炎症反应对肌管蛋白降解相关基因及信号通路的影响。选取不同质量浓度(10、100、1 000ng·mL-1)的LPS分别刺激C2C12肌管细胞30min和3h,通过RTqPCR检测炎症因子TNF-α和IL-6的基因转... 以C2C12肌管细胞为试验材料,探讨脂多糖(LPS)诱导的炎症反应对肌管蛋白降解相关基因及信号通路的影响。选取不同质量浓度(10、100、1 000ng·mL-1)的LPS分别刺激C2C12肌管细胞30min和3h,通过RTqPCR检测炎症因子TNF-α和IL-6的基因转录,确定LPS最佳刺激浓度以建立细胞炎症模型。用最佳浓度LPS分别刺激C2C12肌管细胞0min、30min、1h、3h、6h、12h、24h,RT-qPCR检测MAFbx基因和MuRF基因在不同时间点的转录量变化。此外,1 000ng·mL-1 LPS刺激C2C12肌管细胞12h后,Western blot检测AKT/FOXO1、mTOR和P38信号通路相关蛋白质的表达情况。结果表明:LPS刺激C2C12肌管细胞的最佳浓度为1 000ng·mL-1,在作用30min和3h时均能显著上调TNF-α、IL-6的基因转录,而在刺激12和24h时MuRF1、IL-1β、IL-6和TLR4的基因转录显著上调。此外,1 000ng·mL-1 LPS刺激C2C12肌管细胞12h时,仅AKT和FOXO1蛋白磷酸化水平明显降低。基于以上结果,推测LPS通过调控AKT/FOXO1信号通路诱导C2C12肌管细胞MuRF1转录。 展开更多
关键词 脂多糖 c2c12肌管细胞 肌肉蛋白降解 MuRF1基因 MAFbx基因
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MicroRNA-125b介导棕榈酸诱导的C2C12肌管细胞胰岛素抵抗 被引量：1
5
作者 付学东 王寿懿 +2 位作者 何秉燕 王艳军 邓幼平 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2021年第1期47-51,共5页
目的:探讨microRNA-125b(miR125-b)在棕榈酸诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗中的作用与机制。方法:C2C12成肌细胞常规方法分化为C2C12肌管细胞;棕榈酸诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗;定量RT-PCR检测mRNA表达;免疫印迹检测蛋白表达。结果:①... 目的:探讨microRNA-125b(miR125-b)在棕榈酸诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗中的作用与机制。方法:C2C12成肌细胞常规方法分化为C2C12肌管细胞;棕榈酸诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗;定量RT-PCR检测mRNA表达;免疫印迹检测蛋白表达。结果:①棕榈酸诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗,伴有mTOR信号通路的激活;②抑制mTOR信号通路可显著降低棕榈酸对C2C12肌管细胞胰岛素抵抗的影响;③棕榈酸可显著增加miR-125b的表达,mTOR抑制剂可显著降低棕榈酸对miR-125b表达的影响;④miR-125b模拟剂可诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗,而miRNA-125b抑制剂可显著减轻棕榈酸诱导的C2C12肌管细胞胰岛素抵抗。结论:棕榈酸经mTOR/miR-125b信号通路诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗。 展开更多
关键词 MicroRNA-125b MTOR信号通路 胰岛素抵抗 c2c12肌管细胞
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NR4A1对毒胡萝卜素诱导C2C12肌管细胞糖代谢功能障碍的影响
6
作者 芦兴晨 强晔 +5 位作者 刘昕宇 左丹 姜子晗 张玉超 刘元涛 马小莉 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2023年第11期38-47,共10页
目的探讨NR4A1对毒胡萝卜素(TG)诱导小鼠C2C12肌管细胞糖代谢功能障碍的影响及机制。方法体外诱导C2C12细胞分化为成熟肌管细胞,将加入20 nmol/L胰岛素刺激10 min的细胞标记为胰岛素组,未做特殊处理的细胞标记为对照组,采用Western blot... 目的探讨NR4A1对毒胡萝卜素(TG)诱导小鼠C2C12肌管细胞糖代谢功能障碍的影响及机制。方法体外诱导C2C12细胞分化为成熟肌管细胞,将加入20 nmol/L胰岛素刺激10 min的细胞标记为胰岛素组,未做特殊处理的细胞标记为对照组,采用Western blotting法检测磷酯酰肌醇⁃3⁃激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路、NR4A1蛋白水平。采用CCK8法检测TG浓度梯度处理的C2C12肌管细胞活力,建立糖代谢损伤细胞模型。将C2C12肌管细胞分为对照组、无水乙醇(EtOH)组、TG组,分别处理后加入胰岛素刺激,采用葡萄糖试剂盒检测葡萄糖消耗水平,采用Western blotting法检测NR4A1、p⁃PI3K、p⁃AKT蛋白表达。采用慢病毒感染并筛选,获得对照与稳定过表达NR4A1的C2C12肌管细胞,并进行TG处理,分为Ad⁃NC组、Ad⁃NC+EtOH组、Ad⁃NC+TG组和Ad⁃NR4A1+TG组。分化成熟后加入胰岛素刺激,检测葡萄糖消耗水平,检测NR4A1、p⁃PI3K、p⁃AKT的表达。结果与对照组相比,胰岛素组C2C12肌管细胞PI3K/AKT通路磷酸化水平及NR4A1表达水平显著升高(P<0.01)。CCK⁃8结果显示,TG浓度大于1μmol/L时,细胞活力显著下降(P<0.01)。与EtOH组相比,TG组葡萄糖消耗减少,NR4A1表达水平下降,PI3K/AKT蛋白磷酸化水平受到抑制(P均<0.01)。胰岛素刺激C2C12肌管细胞,与Ad⁃NC+TG组相比,Ad⁃NR4A1+TG组葡萄糖消耗增加(P<0.05)、PI3K/AKT信号通路显著活化(P<0.05)。结论TG导致C2C12肌管细胞糖代谢功能障碍。NR4A1对TG诱导的C2C12肌管细胞糖代谢障碍具有改善作用,其机制可能通过PI3K/AKT信号途径发挥作用。 展开更多
关键词 NR4A1 c2c12肌管细胞 磷酯酰肌醇⁃3⁃激酶/蛋白激酶B信号通路 毒胡萝卜素 糖代谢
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黑花生衣色素的提取及调节C2C12肌管细胞葡萄糖消耗的作用研究
7
作者 赵镇雷 徐小刚 +3 位作者 高灿 张晓烨 常秀莲 毛根祥 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2022年第2期60-69,共10页
从花生加工中的副产物黑花生衣中提取纯化黑花生衣色素(BPSP),并初步探究其相关细胞生物学活性。首先,采用紫外可见(UV-vis)全光谱扫描及分光光度法对BPSP的检测条件、对温度和pH稳定性以及最佳提取条件进行了探究,发现BPSP在pH2~3、52... 从花生加工中的副产物黑花生衣中提取纯化黑花生衣色素(BPSP),并初步探究其相关细胞生物学活性。首先,采用紫外可见(UV-vis)全光谱扫描及分光光度法对BPSP的检测条件、对温度和pH稳定性以及最佳提取条件进行了探究,发现BPSP在pH2~3、520nm可见波长时有最佳特征吸收峰,其在水溶液中比在乙醇溶液中更为稳定,BPSP水溶液在温度不高于50℃、pH为2.0的条件下稳定性最好;此外,BPSP的最佳提取条件为:70℃、pH2.0的酸性水溶液浸提15min,此条件下BPSP的提取率为7.95mg/g干黑花生衣重。进一步采用乙酸乙酯(EtOAc)萃取结合大孔树脂柱层析的方法对BPSP花色苷进行纯化,BPSP总花色苷纯度从粗提液的5.2%提高至25.4%,提高了近5倍。最后,选用纯化后的BPSP干预分化成熟的C2C12肌管细胞,发现5μg/mL剂量的BPSP能够显著增加C2C12肌管细胞对葡萄糖的消耗量(P<0.05),并且在1~5μg/mL的范围内呈现出剂量依赖关系。 展开更多
关键词 黑花生衣 花色苷 天然色素 提取纯化 葡萄糖消耗 c2c12肌管细胞
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