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miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-PI3K/AKT-mTOR信号通路的影响 被引量：2
1
作者 郭晓萍 陈时锦 +2 位作者 张名媛 蒋钦杨 兰干球 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期481-488,共8页
本文旨在研究miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-PI3K/AKT-mTOR信号通路的影响,探讨miR-486-5p在C2C12细胞中对胰岛素信号通过基因的调控机制。利用构建好的miR-486-5p过表达和抑制慢病毒载体,通过脂质体转染法分别在C2C12细胞上过表达和抑制m... 本文旨在研究miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-PI3K/AKT-mTOR信号通路的影响,探讨miR-486-5p在C2C12细胞中对胰岛素信号通过基因的调控机制。利用构建好的miR-486-5p过表达和抑制慢病毒载体,通过脂质体转染法分别在C2C12细胞上过表达和抑制miR-486-5p的表达,利用荧光定量PCR法检测miR-486-5p过表达和抑制效率,同时检测过表达和抑制miR-486-5p后IGF-1、INSR、IRS1、PI3K、PI3KR1、PDK1、AKT1、PTEN、Fox O1、m TOR、4EBP1基因的mRNA变化。荧光定量PCR结果显示24 h过表达倍数和抑制效率分别为2.8倍和35%,48 h过表达倍数和抑制效率分别为1.4倍和15%。过表达miR-486后,24 h和48 h时INSR、PDK1、PTEN、AKT1、FoxO1、4EBP1基因均显著下调;抑制miR-486后,24 h时4EBP1显著上调,48 h时IGF-1显著上调,4EBP1显著下调。本研究表明过表达miR-486-5p后胰岛素信号通路基因的表达受到抑制,抑制miR-486-5p后胰岛素信号通路基因的表达上升,这可能是肥胖患者血清miR-486-5p升高损害胰岛素信号引起葡萄糖摄取能力降低,从而导致胰岛素抵抗发生的原因。 展开更多
关键词 miR-486-5p IGF-1-PI3K/AKT-mTOR信号通路 c2c12细胞
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HSP70抑制H_2O_2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体的释放及细胞凋亡 被引量：4
2
作者 蒋碧梅 肖卫民 +2 位作者 石永忠 刘梅冬 肖献忠 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期32-37,共6页
目的:阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用基因瞬间转 染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达,采用Hoechst33258染色观察H2O2(0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原 细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋... 目的:阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用基因瞬间转 染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达,采用Hoechst33258染色观察H2O2(0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原 细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率。DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯带。采用 caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase 9和caspase 3的活化。利用免疫荧光分析HSP70对H2O2 所致Smac从线粒体释放的影响。结果:HSP70对H2O2及Smac所致C2C12肌原细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋 亡核百分率明显降低,DNA电泳未出现明显“梯状”条带;caspase 9和caspase 3的活化明显受到抑制;并进一步发 现HSP70可抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体释放。结论:HSP70可通过抑制Smac从线粒体释放来 展开更多
关键词 HSP70 SMAc 细胞凋亡 H2O2 c2c12肌原细胞
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司美格鲁肽改善棕榈酸诱导C2C12骨骼肌细胞萎缩的机制研究
3
作者 赵丽华 徐志凯 +6 位作者 田雪 王瑞旭 卢亚男 何建秋 郭晓宇 韩桂艳 高宇 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期326-332,共7页
目的探讨胰升糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)司美格鲁肽改善棕榈酸诱导C2C12骨骼肌细胞萎缩的机制。方法C2C12细胞分为对照组、0.5 mmol/L棕榈酸组、0.5 mmol/L棕榈酸+15 nmol/L司美格鲁肽组、0.5 mmol/L棕榈酸+90 nmol/L司美格鲁肽组及... 目的探讨胰升糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)司美格鲁肽改善棕榈酸诱导C2C12骨骼肌细胞萎缩的机制。方法C2C12细胞分为对照组、0.5 mmol/L棕榈酸组、0.5 mmol/L棕榈酸+15 nmol/L司美格鲁肽组、0.5 mmol/L棕榈酸+90 nmol/L司美格鲁肽组及0.5 mmol/L棕榈酸+900 nmol/L司美格鲁肽组,CCK-8检测各组细胞存活率,2-NBDG荧光探针检测各组细胞葡萄糖摄取情况,免疫荧光法检测肌管直径,Western印迹法检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Ⅲ型纤维连接蛋白结构域5(FNDC-5)、肌球蛋白重链(MHC)、肌细胞生成素(MyoG)、肌肉萎缩盒F基因(Atrogin-1)及肌肉环状指基因1(MuRF-1)蛋白的表达水平。结果与对照组相比,棕榈酸组细胞存活率及葡萄糖摄取均明显降低,肌管直径减小,p-Akt、GLUT4、FNDC-5、MHC及MyoG蛋白表达水平显著下降,Atrogin-1及MuRF-1表达显著升高(均P<0.05),15、90和900 nmol/L司美格鲁肽增加细胞存活率、葡萄糖摄取和肌管直径,以及p-Akt、GLUT4、FNDC-5、MHC和MyoG的蛋白表达水平,降低Atrogin-1及MuRF-1蛋白表达(均P<0.05)。结论司美格鲁肽可改善棕榈酸诱导的C2C12细胞胰岛素抵抗,并通过促进肌细胞合成、抑制肌细胞降解,改善肌细胞萎缩,FNDC-5可能参与其中。 展开更多
关键词 司美格鲁肽 胰岛素抵抗 c2c12肌细胞 骨骼肌细胞萎缩 Ⅲ型纤维连接蛋白结构域5
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密骨胶囊通过NF-κB和AKT-mTOR信号通路对肌少症的作用机制 被引量：1
4
作者 孙雯 丁劼 +3 位作者 王培歌 李小凯 郭海玲 赵咏芳 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期942-948,共7页
目的 利用网络药理学和小鼠C2C12肌细胞体外细胞实验,研究密骨胶囊治疗肌少症的主要活性成分和潜在作用机制。方法 从TCMSP等网络数据库对密骨胶囊的中药成分进行活性成分和主要靶点的收集,并从GeneCards等数据库中对肌少症的疾病基因... 目的 利用网络药理学和小鼠C2C12肌细胞体外细胞实验,研究密骨胶囊治疗肌少症的主要活性成分和潜在作用机制。方法 从TCMSP等网络数据库对密骨胶囊的中药成分进行活性成分和主要靶点的收集,并从GeneCards等数据库中对肌少症的疾病基因进行搜索,交集预测密骨胶囊作用于肌少症的靶点和通路。体外实验对小鼠C2C12肌细胞进行培养及诱导分化。用密骨胶囊含药血清预处理细胞,再用TNF-α炎症因子进行刺激,造成肌细胞萎缩。免疫印迹法和聚合酶链式反应法证明其对肌细胞内NF-κB通路和AKT-mTOR通路中相关蛋白表达情况。结果 在密骨胶囊对肌肉的作用中,核心靶点为MTOR、ESR1、EGFR、SIRT1、CTNNB1、VEGFA、ALB、IL6、TP53、TNF、AKT1,可能干预HIF-1、AGE-RAGE、TNF、PI3K-AKT-mTOR等信号通路。密骨胶囊含药血清干预后C2C12肌细胞增粗,降低MuRF1 mRNA表达。免疫印迹实验结果中,密骨胶囊含药血清降低TNF-α刺激的Atrogin-1蛋白量,抑制iκbα磷酸化降解,减少蛋白降解。密骨胶囊含药血清减少TNF-α对p-AKT、p-4EBP1的抑制,增加蛋白合成。结论 通过网络药理学和体外实验验证,密骨胶囊可能对肌少症有防治作用。密骨胶囊抑制NF-κB通路,减缓肌蛋白降解。密骨胶囊激活AKT-mTOR通路,促进肌细胞内蛋白合成。 展开更多
关键词 密骨胶囊 肌少症 网络药理学 c2c12肌细胞 信号通路
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热休克预处理抑制过氧化氢所致C2C12肌原细胞释放天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物及细胞凋亡 被引量：3
5
作者 蒋碧梅 肖卫民 +3 位作者 石永忠 刘梅冬 唐道林 肖献忠 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2004年第2期125-130,共6页
为探讨热休克预处理对过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡和第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体释放的影响 ,采用 0 .5mmol L过氧化氢作用于C2C12肌原细胞。Hoechst332 5 8荧光染色 ,观察细胞形态学改变并计算... 为探讨热休克预处理对过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡和第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体释放的影响 ,采用 0 .5mmol L过氧化氢作用于C2C12肌原细胞。Hoechst332 5 8荧光染色 ,观察细胞形态学改变并计算凋亡百分率 ,抽提DNA作琼脂糖电泳 ,以确定细胞凋亡情况。采用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹观察天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9的活化情况。采用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹检测第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体的释放。结果发现 ,过氧化氢处理 1～ 2h ,第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物逐渐从线粒体释放入胞浆 ;处理 4h天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9活性升高 ,12h达高峰 ;处理 2 4h细胞明显出现凋亡 ,凋亡百分率明显升高。热休克预处理可诱导C2C12肌原细胞中热休克蛋白 90 ,热休克蛋白 70及αB 晶状体蛋白的表达增高 ;抑制第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物释放、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9的活化及细胞凋亡的发生。结果提示 ,线粒体信号通路在? 展开更多
关键词 病理学与病理生理学 肌原细胞内源性保护机制 热休克预处理 热休克蛋白 凋亡 肌原细胞 第二种线粒体 天冬氨酸特性半胱氨酸蛋白酶激活物 过氧化氢
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NR4A1对毒胡萝卜素诱导C2C12肌管细胞糖代谢功能障碍的影响
6
作者 芦兴晨 强晔 +5 位作者 刘昕宇 左丹 姜子晗 张玉超 刘元涛 马小莉 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2023年第11期38-47,共10页
目的探讨NR4A1对毒胡萝卜素(TG)诱导小鼠C2C12肌管细胞糖代谢功能障碍的影响及机制。方法体外诱导C2C12细胞分化为成熟肌管细胞,将加入20 nmol/L胰岛素刺激10 min的细胞标记为胰岛素组,未做特殊处理的细胞标记为对照组,采用Western blot... 目的探讨NR4A1对毒胡萝卜素(TG)诱导小鼠C2C12肌管细胞糖代谢功能障碍的影响及机制。方法体外诱导C2C12细胞分化为成熟肌管细胞,将加入20 nmol/L胰岛素刺激10 min的细胞标记为胰岛素组,未做特殊处理的细胞标记为对照组,采用Western blotting法检测磷酯酰肌醇⁃3⁃激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路、NR4A1蛋白水平。采用CCK8法检测TG浓度梯度处理的C2C12肌管细胞活力,建立糖代谢损伤细胞模型。将C2C12肌管细胞分为对照组、无水乙醇(EtOH)组、TG组,分别处理后加入胰岛素刺激,采用葡萄糖试剂盒检测葡萄糖消耗水平,采用Western blotting法检测NR4A1、p⁃PI3K、p⁃AKT蛋白表达。采用慢病毒感染并筛选,获得对照与稳定过表达NR4A1的C2C12肌管细胞,并进行TG处理,分为Ad⁃NC组、Ad⁃NC+EtOH组、Ad⁃NC+TG组和Ad⁃NR4A1+TG组。分化成熟后加入胰岛素刺激,检测葡萄糖消耗水平,检测NR4A1、p⁃PI3K、p⁃AKT的表达。结果与对照组相比,胰岛素组C2C12肌管细胞PI3K/AKT通路磷酸化水平及NR4A1表达水平显著升高(P<0.01)。CCK⁃8结果显示,TG浓度大于1μmol/L时,细胞活力显著下降(P<0.01)。与EtOH组相比,TG组葡萄糖消耗减少,NR4A1表达水平下降,PI3K/AKT蛋白磷酸化水平受到抑制(P均<0.01)。胰岛素刺激C2C12肌管细胞,与Ad⁃NC+TG组相比,Ad⁃NR4A1+TG组葡萄糖消耗增加(P<0.05)、PI3K/AKT信号通路显著活化(P<0.05)。结论TG导致C2C12肌管细胞糖代谢功能障碍。NR4A1对TG诱导的C2C12肌管细胞糖代谢障碍具有改善作用,其机制可能通过PI3K/AKT信号途径发挥作用。 展开更多
关键词 NR4A1 c2c12肌管细胞 磷酯酰肌醇⁃3⁃激酶/蛋白激酶B信号通路 毒胡萝卜素 糖代谢
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热休克蛋白70通过Bcl-2抑制氧化应激所致C2C12细胞凋亡 被引量：2
7
作者 张彬 邓红兵 +2 位作者 周斌 谭斯品 蒋碧梅 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期621-624,共4页
目的探讨C2C12肌原细胞内热休克蛋白70对Bcl-2表达的影响及Bcl-2对热休克蛋白70抗细胞凋亡作用的影响。方法应用Western Blotting观察Bcl-2在转染热休克蛋白70真核表达质粒(pcDNA3.1-HSP70)或其反义寡核苷酸C2C12肌原细胞中的表达;采用... 目的探讨C2C12肌原细胞内热休克蛋白70对Bcl-2表达的影响及Bcl-2对热休克蛋白70抗细胞凋亡作用的影响。方法应用Western Blotting观察Bcl-2在转染热休克蛋白70真核表达质粒(pcDNA3.1-HSP70)或其反义寡核苷酸C2C12肌原细胞中的表达;采用基因瞬间转染技术使热休克蛋白70过表达的C2C12肌原细胞内Bcl-2表达抑制,应用流式细胞术检测H2O2处理所致细胞凋亡的发生情况。结果转染热休克蛋白70真核表达质粒的C2C12肌原细胞中,热休克蛋白70和Bcl-2的表达明显高于空载体转染组(P<0.01);而转染热休克蛋白70反义寡核苷酸后,热休克蛋白70和Bcl-2的表达明显低于随机寡核苷酸转染组(P<0.01);热休克蛋白70过表达的C2C12肌原细胞分别转染Bcl-2反义寡核苷酸及随机寡核苷酸,0.5 mmol/L H2O2处理24 h,Bcl-2反义寡核苷酸转染组的细胞凋亡率明显高于随机寡核苷酸转染细胞组。结论热休克蛋白70能上调C2C12肌原细胞内Bcl-2的表达;热休克蛋白70的抗细胞凋亡功能可能与其上调Bcl-2表达相关。 展开更多
关键词 c2c12肌原细胞 热休克蛋白70 BcL-2 H2O2 细胞凋亡
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氧化应激对热休克蛋白70核仁分布的影响 被引量：1
8
作者 涂自智 王慷慨 +3 位作者 邹江 刘可 邓恭华 肖献忠 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期384-389,共6页
目的:探讨氧化应激对热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)核仁分布的影响。方法:采用热休克反应(42℃1h,37℃恢复12h)诱导C2C12细胞中HSP70的高表达;构建HSP70与增强绿色荧光蛋白(EGFP)的重组质粒。将重组质粒瞬时转染C2C12肌原细胞... 目的:探讨氧化应激对热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)核仁分布的影响。方法:采用热休克反应(42℃1h,37℃恢复12h)诱导C2C12细胞中HSP70的高表达;构建HSP70与增强绿色荧光蛋白(EGFP)的重组质粒。将重组质粒瞬时转染C2C12肌原细胞后,用免疫印迹技术分别检测热休克反应及基因转染诱导的HSP70表达;在分离纯化核仁和胞质蛋白组分后,分别采用免疫细胞化学、荧光技术及免疫印迹检测氧化应激(0.5mmol/LH2O2)诱导的HSP70的分布改变。结果:免疫印迹显示,热休克反应和瞬时转染重组质粒,均能导致C2C12细胞中HSP70的高表达;荧光示踪显示,过氧化氢处理1h后,可见胞核有较强的荧光;免疫细胞化学及细胞组分蛋白质免疫印迹显示,热休克处理的细胞暴露于过氧化氢1h后,HSP70从细胞质向细胞核及核仁移位。结论:氧化应激能导致HSP70从胞质向核仁移位。 展开更多
关键词 氧化应激 热休克反应 核仁 c2c12肌原细胞 热休克蛋白70
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氧化应激所致C2C12肌源细胞核仁损伤的分子机制 被引量：1
9
作者 王慷慨 邓恭华 +4 位作者 刘可 易宇欣 鄂顺梅 张玲莉 肖献忠 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2005年第2期133-137,共5页
目的　探讨氧化应激诱导细胞核仁损伤的分子机制。方法　向传代培养的C2C12肌源细胞中加入0 .5mmol/L过氧化氢以模拟氧化应激。结果　甲苯胺兰染色发现正常C2C12细胞可见一个位于中央的,浓染致密的核仁颗粒。过氧化氢处理后3h ,可见明... 目的　探讨氧化应激诱导细胞核仁损伤的分子机制。方法　向传代培养的C2C12肌源细胞中加入0 .5mmol/L过氧化氢以模拟氧化应激。结果　甲苯胺兰染色发现正常C2C12细胞可见一个位于中央的,浓染致密的核仁颗粒。过氧化氢处理后3h ,可见明显的核仁分离,处理6h最为明显。细胞总蛋白质合成能力分析发现过氧化氢处理后6h细胞总蛋白质合成能力显著下降(与正常对照比P <0 .0 5 ) ,并持续至2 4h。免疫印迹检测核仁素(又称C2 3)发现,过氧化氢处理1h后可见一80kDa条带,而其110kDa主带明显减弱,过氧化氢处理6h和12h最为明显。用脂质体将核仁素反义核酸导入细胞后2 4h ,免疫印迹发现核仁素表达明显被抑制,同时也可观察到细胞总蛋白合成能力下降及明显的核仁分离。结论　氧化应激通过诱导核仁蛋白质核仁素的裂解并使其110kDa全长分子的量减少,而导致C2C12细胞核仁损伤。 展开更多
关键词 病理学与病理生理学 过氧化氢 核仁 核仁素(c23) c2c12肌源细胞 反义核酸
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黑花生衣色素的提取及调节C2C12肌管细胞葡萄糖消耗的作用研究
10
作者 赵镇雷 徐小刚 +3 位作者 高灿 张晓烨 常秀莲 毛根祥 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2022年第2期60-69,共10页
从花生加工中的副产物黑花生衣中提取纯化黑花生衣色素(BPSP),并初步探究其相关细胞生物学活性。首先,采用紫外可见(UV-vis)全光谱扫描及分光光度法对BPSP的检测条件、对温度和pH稳定性以及最佳提取条件进行了探究,发现BPSP在pH2~3、52... 从花生加工中的副产物黑花生衣中提取纯化黑花生衣色素(BPSP),并初步探究其相关细胞生物学活性。首先,采用紫外可见(UV-vis)全光谱扫描及分光光度法对BPSP的检测条件、对温度和pH稳定性以及最佳提取条件进行了探究,发现BPSP在pH2~3、520nm可见波长时有最佳特征吸收峰,其在水溶液中比在乙醇溶液中更为稳定,BPSP水溶液在温度不高于50℃、pH为2.0的条件下稳定性最好;此外,BPSP的最佳提取条件为:70℃、pH2.0的酸性水溶液浸提15min,此条件下BPSP的提取率为7.95mg/g干黑花生衣重。进一步采用乙酸乙酯(EtOAc)萃取结合大孔树脂柱层析的方法对BPSP花色苷进行纯化,BPSP总花色苷纯度从粗提液的5.2%提高至25.4%,提高了近5倍。最后,选用纯化后的BPSP干预分化成熟的C2C12肌管细胞,发现5μg/mL剂量的BPSP能够显著增加C2C12肌管细胞对葡萄糖的消耗量(P<0.05),并且在1~5μg/mL的范围内呈现出剂量依赖关系。 展开更多
关键词 黑花生衣 花色苷 天然色素 提取纯化 葡萄糖消耗 c2c12肌管细胞
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人参组培不定根蛋白对小鼠的抗疲劳作用及其机制 被引量：12
11
作者 王曼莹 付宝玉 +4 位作者 徐晓浩 李香竹 陈红 孙立伟 赵大庆 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期18-25,共8页
目的:探讨人参组培不定根蛋白(GARP)对小鼠的抗疲劳作用,阐明其作用机制,为开发利用人参组培不定根资源提供实验依据。方法:40只昆明种清洁级小鼠采用负重游泳实验建立疲劳动物模型,随机分为对照组,低、中和高剂量(0.25、0.50和1.00 g&#... 目的:探讨人参组培不定根蛋白(GARP)对小鼠的抗疲劳作用,阐明其作用机制,为开发利用人参组培不定根资源提供实验依据。方法:40只昆明种清洁级小鼠采用负重游泳实验建立疲劳动物模型,随机分为对照组,低、中和高剂量(0.25、0.50和1.00 g·kg^(-1))GARP组,每组10只。通过力竭游泳实验记录各组小鼠游泳时间,游泳实验后处死小鼠,采用分光光度法检测各组小鼠血清中血乳酸(BLA)和血尿素氮(BUN)水平,采用分光光度法检测各组小鼠肝组织中谷胱甘肽(GSH)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性和肝糖原水平,采用分光光度法检测各组小鼠肌肉组织中肌糖原水平。小鼠成肌细胞(C2C12细胞)分为对照组和不同剂量(5、10和20 mg·L^(-1))GARP组,采用分光光度法检测各组细胞中GSH水平、SOD活性和糖原水平,苯酚硫酸法检测各组细胞葡萄糖摄取能力,Western blotting法检测各组细胞中腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平[磷酸化AMPK(p-AMPK)/AMPK比值]和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,中和高剂量GARP组小鼠游泳时间明显延长(P<0.05或P<0.01),血清中BLA和BUN水平明显降低(P<0.05或P<0.01);不同剂量GARP组小鼠肝组织中GSH水平和SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01),肝糖原和肌糖原水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,不同剂量GARP组细胞中GSH水平、SOD活性和糖原水平明显升高(P<0.05或P<0.01),细胞的葡萄糖摄取能力明显增强(P<0.05或P<0.01),p-AMPK/AMPK比值和GLUT4蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:GARP具有抗疲劳作用,其机制可能是通过激活AMPK/GLUT4信号通路促进糖摄取实现的。 展开更多
关键词 人参组培不定根蛋白 抗疲劳 小鼠 c2c12细胞
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降糖消渴颗粒含药血清对C2C12细胞胰岛素抵抗的影响 被引量：10
12
作者 赵丹丹 穆倩倩 +3 位作者 方心 张东伟 莫芳芳 高思华 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1577-1579,共3页
目的:研究降糖消渴颗粒含药血清(JGDS)对骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗量及葡萄糖摄取率的影响。方法:JGDS处理棕榈酸、小牛血清白蛋白(BSA)诱导而致胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞;通过检测培养液中的葡萄糖含量反映葡萄糖消耗... 目的:研究降糖消渴颗粒含药血清(JGDS)对骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗量及葡萄糖摄取率的影响。方法:JGDS处理棕榈酸、小牛血清白蛋白(BSA)诱导而致胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞;通过检测培养液中的葡萄糖含量反映葡萄糖消耗量;2-NBDG葡萄糖摄入法观察细胞对葡萄糖的摄取率。结果:0.25mmol/L棕榈酸和1%BSA培养16h,使得C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗量与葡萄糖摄取率显著下降(P<0.05),造成骨骼肌细胞IR模型,JGDS干预可使IR模型骨骼肌细胞葡萄糖消耗量显著增加,与正常血清相比,差异具有统计学意义(P<0.05),且该作用呈现一定的剂量依赖性;JGDS可增加IR骨骼肌细胞模型葡萄糖转运率,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:降糖消渴颗粒含药血清能显著增加IR的C2C12骨骼肌细胞的葡萄糖消耗和摄取,这可能是降糖消渴颗粒改善骨骼肌IR的机制之一。 展开更多
关键词 降糖消渴颗粒 c2c12细胞 含药血清 胰岛素抵抗 葡萄糖消耗 葡萄糖摄取率
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蒙药诃子水提物成分分析及改善胰岛素抵抗作用机制研究 被引量：7
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作者 魏颖 苏秀兰 徐暾海 《生命的化学》 CAS 2021年第3期585-594,共10页
现代药理学研究表明蒙药诃子具有降低血糖的活性,但相关研究均不够深入。本研究运用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析法,对诃子水提物(water extract of Terminalia chebula,WET)的主要化学成分进行分析鉴定,得到化合物共107种,主要包含鞣质类... 现代药理学研究表明蒙药诃子具有降低血糖的活性,但相关研究均不够深入。本研究运用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析法,对诃子水提物(water extract of Terminalia chebula,WET)的主要化学成分进行分析鉴定,得到化合物共107种,主要包含鞣质类、多酚类、黄酮类、挥发油类。通过CCK-8法检测WET对C2C12细胞增殖的影响后,对细胞进行胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)造模,葡萄糖氧化酶法检测其对IR-C2C12细胞糖消耗的影响,确定其改善了IR的活性。而后进行蛋白质提取,Western blot法检测相关蛋白质的表达。结果发现:WET高浓度(500μg/mL、250μg/mL)具有促进IR-C2C12细胞葡萄糖消耗的作用,分别可使细胞葡萄糖消耗增加15.855%和7.943%。同时WET高低剂量均可升高IR-C2C12细胞的磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(3-phosphoinositide dependent kinase 1,PDK1)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)的表达量,WET高剂量对胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)亦有明显升高作用。该研究结果显示:诃子水提物具有一定的改善C2C12细胞IR的作用,这可能与其激活PI3K/AKT通路有关。 展开更多
关键词 诃子水提物 c2c12细胞 胰岛素抵抗
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细胞肥大过程中hhLIM的亚细胞定位变化及其对细胞骨架的影响 被引量：3
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作者 郑斌 温进坤 韩梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期255-261,共7页
hhlim (humanheartlim)是从人胎心cDNA文库中筛选克隆的一个新基因 ,作为LIM家族的新成员参与心肌肥大的发生发展过程 .为了进一步研究hhLIM在心肌肥大发生过程中的作用 ,以C2C12细胞为研究对象 ,以心肌肥大强效刺激因子内皮素 1(ET 1... hhlim (humanheartlim)是从人胎心cDNA文库中筛选克隆的一个新基因 ,作为LIM家族的新成员参与心肌肥大的发生发展过程 .为了进一步研究hhLIM在心肌肥大发生过程中的作用 ,以C2C12细胞为研究对象 ,以心肌肥大强效刺激因子内皮素 1(ET 1)为诱导因素 ,探讨hhLIM与肌动蛋白的相互作用及其影响细胞骨架的分子机制 .RT PCR、Western印迹和细胞免疫荧光分析结果表明 ,心肌肥大刺激因子ET 1在诱导心肌肥大标志基因BNP和肌动蛋白表达的同时 ,使hhLIM蛋白在C2C12细胞胞核与胞质之间进行重新定位 .激光共聚焦显微镜观察结果显示 ,hhLIM与肌动蛋白在胞质中共定位 .蛋白分步提取、鉴定及hhLIM与F肌动蛋白结合与沉降实验证明 ,hhLIM多存在于细胞骨架及其相关蛋白部分 ,在体外可与F肌动蛋白共结合 .这些结果表明 ,胞质中的hhLIM作为细胞骨架相关蛋白与肌动蛋白相互作用 .进一步研究hhLIM与细胞骨架的关系时发现 ,hhLIM过表达可使C2C12细胞的骨架变成致密网状纤维并使其对细胞松弛素导致的细胞骨架解聚产生一定的抵抗作用 ,抑制hhLIM表达则使细胞骨架稀疏 ,结构模糊 .提示hhLIM参与细胞骨架组织及重构的机制与其结合并稳定F肌动蛋白有关 . 展开更多
关键词 hhlim基因 c2c12细胞 肌动蛋白 细胞骨架
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不同浓度红景天苷对成肌细胞体外分化的影响及机制初探 被引量：7
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作者 罗维 张鹏 +2 位作者 艾磊 周越 陈晓萍 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2015年第9期50-57,共8页
研究目的:探讨不同浓度红景天苷对成肌细胞株C2C12体外分化的影响及可能机制,有望为成肌细胞增殖分化寻求更有效的外源调控物,以促进成肌细胞的移植和临床应用,同时为进一步开展红景天苷在体内骨骼肌损伤中的作用及机制研究奠定基础。... 研究目的:探讨不同浓度红景天苷对成肌细胞株C2C12体外分化的影响及可能机制,有望为成肌细胞增殖分化寻求更有效的外源调控物,以促进成肌细胞的移植和临床应用,同时为进一步开展红景天苷在体内骨骼肌损伤中的作用及机制研究奠定基础。研究方法:研究1:红景天苷对成肌细胞体外分化的影响:1)在C2C12中加入不同浓度红景天苷处理,在诱导成肌分化过程中,应用相差显微镜观察不同浓度红景天苷对C2C12分化过程中汇聚、融合和形成多核肌管的影响;2)应用免疫荧光组化方法,分析不同浓度红景天苷对C2C12成肌分化融合率的影响;3)应用real-time PCR和Western Blotting方法,检测红景天苷对C2C12成肌分化特异基因和蛋白表达的影响;研究2:红景天苷影响成肌细胞体外分化的机制初探:应用Western Blotting方法,检测红景天苷处理后C2C12成肌分化中TGF-β/Smad信号通路的变化。结果:50μg红景天苷处理:研究1:1)光镜观察结果从形态学上显示,红景天苷处理显著抑制C2C12细胞的融合和多核肌管的形成;2)免疫荧光检测结果表明Myosin-neonatal(E-MHC)阳性面积和myogenin阳性核均显著减少(P<0.05),显著抑制C2C12细胞分化过程中肌管形成,促进细胞增殖;3)real-time PCR和Western blotting检测结果表明,成肌分化特异因子MyoD和myogenin基因和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),显著抑制C2C12细胞分化过程中细胞的融合和肌管的形成;研究2:Western blotting检测结果表明,红景天苷显著抑制C2C12细胞分化效应,伴有Smad2/Smad3磷酸化激活增加,尤其是Smad3激活水平显著增加(P<0.01);30μg红景天苷处理作用不显著(P>0.05)。结论:1)红景天苷能显著抑制骨骼肌成肌细胞体外成肌分化,并促进骨骼肌成肌细胞激活增殖,促进卫星细胞库储备增加。2)红景天苷对骨骼肌成肌细胞体外分化增殖的影响存在剂量依赖性,以50μg红景天苷干预能达到显� 展开更多
关键词 红景天苷 c2c12细胞 成肌分化 TGF-β/Smad通路
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成肌细胞成脂过程中PPARγ、C/EBPα和Myogenin基因启动子的甲基化变化 被引量：7
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作者 姜美华 巨婷婷 +4 位作者 刘洋 许玲 孙文娟 赵泮峰 尹靖东 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期3010-3021,共12页
【目的】利用C2C12成肌细胞探讨肌源性干细胞成脂过程与调控成脂和成肌分化的关键转录因子PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma)、C/EBPα(CCAAT/enhancer binding protein alpha)和Myogenin启动子区甲基化的关系... 【目的】利用C2C12成肌细胞探讨肌源性干细胞成脂过程与调控成脂和成肌分化的关键转录因子PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma)、C/EBPα(CCAAT/enhancer binding protein alpha)和Myogenin启动子区甲基化的关系。【方法】分别用2%马血清和三联诱导剂诱导C2C12细胞成肌和成脂分化,在马血清促进的成肌分化第0、1、3和5天收集细胞进行姬姆萨染色观察肌管形成情况;在三联诱导的成脂分化第0、2、4、6和10天收集细胞进行油红O染色观察脂滴形成情况;提取成肌诱导第0、1、3、5天和成脂诱导第0、2、4、6天的RNA和DNA,分别采用qRT-PCR检测成肌和成脂分化相关基因的表达,采用重亚硫酸盐测序的方法检测PPARγ、C/EBPα和Myogenin启动子区甲基化的变化,并分析基因表达与甲基化状态的相关关系。【结果】①C2C12细胞经马血清诱导形成了多核肌管,表达成肌相关基因,但不表达脂肪特异性基因;三联诱导使C2C12细胞自主分化的肌管中沉积了脂滴,同时表达成脂和成肌相关基因;②重亚硫酸盐测序结果表明,在未分化的成肌细胞中,PPARγ基因启动子的甲基化水平是61%,在三联诱导第2、4和6天,其甲基化程度依次为49%、39%和42%,呈逐渐去甲基化趋势,与PPARγ基因转录负相关;在马血清诱导第3和5天,甲基化水平为56%和48%,与未分化的成肌细胞相比差异不显著,同时PPARγ基因的表达水平也没有显著变化;③Myogenin基因在马血清促进的成肌过程中甲基化水平不断降低(49%、42%、35%和34%),转录水平急剧增加;在三联诱导过程中,Myogenin启动子的甲基化水平由0天的49%下降为第1天的37%、第3天的41%和第5天的38%,但下降幅度弱于马血清诱导的成肌过程,这一结果与降低的Myogenin转录上调相吻合;④C/EBPα基因在未分化的C2C12细胞中呈低甲基化状态,甲基化程度仅为1.6%,在成肌分化和脂肪沉积过程中均未发生显著变化, 展开更多
关键词 c2c12细胞 DNA甲基化 成肌分化 脂肪沉积
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人参皂苷Rb1对C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用及AMPK信号通路相关基因表达的影响 被引量：6
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作者 赵丹丹 吴瑞 +8 位作者 白颖 莫芳芳 马如风 柳辰玥 朱如愿 左加成 姜广建 张东伟 高思华 《世界中医药》 CAS 2019年第1期54-58,63,共6页
目的:观察人参皂苷Rb1对胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用的影响,并基于AMPK信号通路探讨其可能的作用机制。方法:将C2C12细胞分为正常组、模型组、人参皂苷Rb1组,模型组以0. 25 mmol/L棕榈酸,1%小牛血清白蛋白培养16 h诱导IR... 目的:观察人参皂苷Rb1对胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用的影响,并基于AMPK信号通路探讨其可能的作用机制。方法:将C2C12细胞分为正常组、模型组、人参皂苷Rb1组,模型组以0. 25 mmol/L棕榈酸,1%小牛血清白蛋白培养16 h诱导IR,人参皂苷Rb1组在模型组的基础上以1、3、10、30、100μmol/L浓度的人参皂苷Rb1分别干预24 h和48 h,通过检测培养液中的葡萄糖含量反映葡萄糖消耗量,并应用CCK8试剂盒及光镜观察不同浓度人参皂苷Rb1对C2C12细胞活性及形态的影响,实时荧光定量PCR扩增分析人参皂苷Rb1对C2C12细胞AMPKα、SIRT-1、PGC-1α基因表达的影响。并应用shRNA沉默AMPKα的表达,构建AMPKα低表达的骨骼肌细胞模型,以1、3、10、30、100μmol/L浓度的人参皂苷Rb1分别干预24 h和48 h,与不含人参皂苷Rb1的培养液比较,再次验证人参皂苷Rb1对C2C12细胞葡萄糖利用的影响及其与AMPK信号通路的关系。结果:1、3、10、30μmol/L人参皂苷Rb1对C2C12细胞形态及活性无显著影响,而100μmol/L人参皂苷Rb1造成C2C12细胞活性降低及部分细胞死亡。10,30μmol/L人参皂苷Rb1能够促进IR的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗量,与模型组比较,差异有统计学意义(P <0. 05),且人参皂苷Rb1能够上调C2C12细胞AMPKα、SIRT-1、PGC-1α的基因表达(P <0. 05)。10、30μmol/L人参皂苷Rb1亦能增加AMPKα低表达的骨骼肌细胞的葡萄糖消耗量(P <0. 05),而该作用程度低于其对棕榈酸诱导的C2C12细胞IR的影响,且RT-PCR结果显示人参皂苷Rb1能上调AMPKα低表达的C2C12细胞SIRT-1、PGC-1α的基因表达。结论:人参皂苷Rb1能够有效促进IR的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗,该作用与调节AMPK信号通路有关,但除AMPK信号通路亦有其他作用途径。 展开更多
关键词 人参皂苷RB1 c2c12骨骼肌细胞 胰岛素抵抗 基因沉默 葡萄糖消耗 AMPK信号通路
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左西孟旦通过PTEN/Akt通路抑制脂多糖引起的C2C12细胞凋亡
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作者 张苗苗 刘雨佳 +1 位作者 张甦 焦光宇 《中国医科大学学报》 北大核心 2024年第2期121-126,共6页
目的探讨左西孟旦通过PTEN/Akt通路抑制脂多糖(LPS)引起C2C12细胞凋亡的机制。方法CCK-8法检测不同浓度左西孟旦对C2C12细胞存活率的影响,选择有保护作用的左西孟旦浓度。将C2C12细胞随机分为4组:空白对照组(CON组)、左西孟旦预处理后... 目的探讨左西孟旦通过PTEN/Akt通路抑制脂多糖(LPS)引起C2C12细胞凋亡的机制。方法CCK-8法检测不同浓度左西孟旦对C2C12细胞存活率的影响,选择有保护作用的左西孟旦浓度。将C2C12细胞随机分为4组:空白对照组(CON组)、左西孟旦预处理后的对照组(CON+L组)、LPS处理组(LPS组)、左西孟旦预处理后的LPS处理组(LPS+L组)。采用CCK-8法检测C2C12细胞的存活率;hoechst33342染色细胞核观察细胞的凋亡情况;采用实时PCR、Western blotting检测C2C12细胞PTEN/Akt通路凋亡指标的mRNA及蛋白表达水平。siRNA-PTEN转染C2C12细胞,敲除PTEN基因,检测其对凋亡通路蛋白表达的影响。结果左西孟旦能够提高LPS损伤后C2C12细胞的存活率,降低凋亡率。siRNA-PTEN抑制了PTEN基因的表达,PTEN/Akt信号通路相关mRNA与蛋白发生相应改变,导致C2C12细胞凋亡率下降。结论左西孟旦可以通过PTEN/Akt通路抑制LPS引起的C2C12细胞凋亡。 展开更多
关键词 左西孟旦 PTEN 脂多糖 c2c12细胞
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异丙肾上腺素在C2C12细胞分化中的作用及机制 被引量：6
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作者 陈绍娟 向力 +5 位作者 江淼 王露 郑飞 张蕾 袁也 唐俊明 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第9期1178-1187,共10页
该研究主要探讨异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)在C2C12细胞分化与肌萎缩中的作用及可能的机制。在利用免疫组化分析C2C12细胞肾上腺素能受体表达特征的基础上,以2%的马血清高糖培养基建立C2C12细胞分化的实验体系,随后分别按单次或连... 该研究主要探讨异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)在C2C12细胞分化与肌萎缩中的作用及可能的机制。在利用免疫组化分析C2C12细胞肾上腺素能受体表达特征的基础上,以2%的马血清高糖培养基建立C2C12细胞分化的实验体系,随后分别按单次或连续单次给予10^(–5) mol/L ISO后观察其分化差异;接着再比较连续单次给予不同浓度的ISO(10^(–8) mol/L、10^(–7) mol/L、10^(–6) mol/L、10^(–5) mol/L)处理;利用细胞免疫荧光化学和Western blot方法检测C2C12细胞分化后肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MYH)的水平,并定量分析分化后骨骼肌细胞的肌管细胞核融合数目;同时,利用Western blot检测C2C12细胞分化调节有关的肌细胞生成蛋白(myogenin,Myo G)、p-p38MAPK(phosphorylated p38-mitogen-activated protein kinase)及p-AKT(phosphorylated/protein kinase B)的水平变化。结果显示,C2C12细胞呈现出α-肾上腺素和β-肾上腺素能受体表达的特征。分化培养诱导下,C2C12细胞随着时间的延长,分化成肌管的数量逐渐增多,在第8 d达峰值。单次一次给予10^(–5) mol/L ISO没有连续单次给予ISO抑制C2C12细胞分化成骨骼肌细胞显著,且连续单次给予ISO随着其浓度的增加,C2C12细胞分化为肌管细胞核融合数目逐渐减少并在ISO浓度为10^(–5) mol/L时最显著。与此同时,随着连续单次给予不同浓度(10^(–8) mol/L、10^(–7) mol/L、10^(–6) mol/L、10^(–5) mol/L)的ISO,MYH和Myo G的表达水平呈现随着浓度增加而逐渐降低的特征,而且p-p38MAPK及p-AKT的水平也呈连续单次给予ISO浓度增加而降低的趋势,在ISO浓度为10^(–5) mol/L时降低最显著。该研究提示,连续单次给予ISO显著抑制C2C12细胞分化为成熟骨骼肌细胞,且与p-p38MAPK、p-AKT及Myo G水平的降低密切相关,从而为交感神经长期过度兴奋所伴随的肌萎缩提供新的研究模型和治疗靶点。 展开更多
关键词 异丙肾上腺素 交感神经过度兴奋 骨骼肌萎缩 c2c12细胞 分化
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小麦肽及其与大豆肽、豌豆肽复配肽的体外组合对TNF-α刺激C2C12骨骼肌细胞蛋白表达的影响
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作者 程改平 李明亮 +5 位作者 刘婧 徐淼 李可 闫九明 任玮 秦修远 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期153-158,共6页
通过细胞实验探讨小麦肽、大豆肽、豌豆肽复合物对TNF-α刺激C2C12骨骼肌细胞蛋白表达的影响,并初步探明作用通路。采用终质量浓度为25 ng/mL的TNF-α处理C2C12细胞4 d建立TNF-α刺激模型,CCK-8法确定小麦肽、大豆肽、豌豆肽对C1C12细... 通过细胞实验探讨小麦肽、大豆肽、豌豆肽复合物对TNF-α刺激C2C12骨骼肌细胞蛋白表达的影响,并初步探明作用通路。采用终质量浓度为25 ng/mL的TNF-α处理C2C12细胞4 d建立TNF-α刺激模型,CCK-8法确定小麦肽、大豆肽、豌豆肽对C1C12细胞的安全剂量;检测不同复配比例的小麦肽、大豆肽、豌豆肽实验组的肌球蛋白相关指标(MyoD、MyoG、MyHC)、泛素-蛋白酶体系统肌肉萎缩相关指标(TRIM63和MAFbx)的蛋白表达、Akt、mTOR和其磷酸化蛋白表达情况。结果表明,与对照组相比,TNF-α刺激的C2C12细胞中MyoD、MyoG和MyHC的蛋白表达量均有下降,其中MyHC显著降低;MAFbx和TRIM63表达量显著升高;Akt和mTOR的磷酸化水平显著降低,而经过肽样品处理后,各指标均有缓解,且以小麦肽与大豆肽+豌豆肽质量比1∶3效果最好。小麦肽与大豆肽+豌豆肽以1∶3的质量比进行复配在几种配比中可以最有效地改善由TNF-α造成的C2C12细胞肌蛋白含量降低,可通过调节E3泛素连接酶的表达和提高Akt/mTOR的蛋白磷酸化水平的通路,从而降低细胞中蛋白降解和促进蛋白合成。 展开更多
关键词 小麦肽 大豆肽 豌豆肽 c2c12骨骼肌细胞 肌肉萎缩 AKT/MTOR
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