期刊导航
期刊开放获取
cqvip
退出
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
3
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
利用NusA促溶标签原核表达Butelase 1蛋白
被引量：
1
1
作者
刘起涛
朱彦策
+4 位作者
王伟杰
陈佩格
孙士平
郭婉莹
郑悦亭
《江西农业学报》
CAS
2017年第3期115-119,共5页
为获得可溶性Butelase 1蛋白,将Butelase 1基因插入到带有NusA促溶标签的原核表达载体上,将重组质粒转化至大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和层析法纯化表达的可溶性蛋白,用SDS-PAGE和Western blot分析...
为获得可溶性Butelase 1蛋白,将Butelase 1基因插入到带有NusA促溶标签的原核表达载体上,将重组质粒转化至大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和层析法纯化表达的可溶性蛋白,用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达情况。酶切和测序结果证实p ET21b-His6-NusA-Butelase 1原核表达载体构建成功。SDS-PAGE分析结果表明诱导后表达的融合蛋白大小为94.9 k D,主要为可溶性表达,部分为包涵体表达。Western blot检测结果显示,纯化得到的His6-NusA-Butelase 1融合蛋白用抗His6-Tag抗体鉴定时为特异性表达。
展开更多
关键词
butelase
1
促溶标签
NUSA
表达分析
下载PDF
职称材料
从药物多肽到蛋白质全合成:酶促拼接的方法原理与前沿应用
被引量：
1
2
作者
杨新宇
朱彤
+1 位作者
李瑞峰
吴边
《合成生物学》
CSCD
2021年第1期33-45,共13页
蛋白质是生命活动的基础功能元件,其化学合成与定点修饰已成为合成生物学领域探索复杂生物大分子“结构-功能”关系的重要前沿方向。近年来,以多肽固相合成与特异性拼接为核心的蛋白质合成和修饰技术蓬勃发展,打破了生命合成系统仅能使...
蛋白质是生命活动的基础功能元件,其化学合成与定点修饰已成为合成生物学领域探索复杂生物大分子“结构-功能”关系的重要前沿方向。近年来,以多肽固相合成与特异性拼接为核心的蛋白质合成和修饰技术蓬勃发展,打破了生命合成系统仅能使用天然及少数非天然氨基酸的瓶颈,为制备含有数百个氨基酸残基的非天然蛋白质提供了技术平台,让原子水平的蛋白质人工设计成为现实。作为一类广受关注的多肽拼接策略,基于天然或人工改造多肽连接酶的技术方法不仅在基础研究领域拓展了人们对蛋白质这一生命核心元件的理解,还在工业领域崭露头角,被应用于多种多肽类药物的生产。针对蛋白质合成领域中酶促多肽拼接技术平台,本文介绍了Sortase A转肽酶、Butelase 1转肽酶以及Subtilisin人工连接酶的来源以及催化过程,探讨了各自的优势以及局限性,并综述了三种酶在蛋白质修饰、蛋白质合成、多肽药物环化等方面的应用。通过计算机辅助设计、定向进化等技术对转肽酶、连接酶进行改造来提升其在底物谱、催化活性等方面的特性,将化学方法与酶促方法联用来建立多样的生物大分子从头设计与合成路线是目前的主要发展趋势。
展开更多
关键词
蛋白质合成
蛋白质定点修饰
Sortase
A转肽酶
butelase
1
转肽酶
Subtilisin人工连接酶
下载PDF
职称材料
末端环化疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的稳定性
3
作者
宋文
武霞霞
+1 位作者
娄海伟
方惠敏
《食品与机械》
北大核心
2022年第8期40-43,54,共5页
目的:获取活性高、稳定性好的工业脂肪酶。方法:利用哺乳动物细胞和大肠杆菌分别表达Butelase 1和梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL),通过Flag亲和层析和His亲和层析柱进行纯化;通过纯化的Butelase 1连接酶...
目的:获取活性高、稳定性好的工业脂肪酶。方法:利用哺乳动物细胞和大肠杆菌分别表达Butelase 1和梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL),通过Flag亲和层析和His亲和层析柱进行纯化;通过纯化的Butelase 1连接酶对重组TLL(rTLL)进行末端连接,以形成首尾相连的环状TLL(cTLL),通过测定rTLL和cTLL活性、热稳定性、蛋白酶稳定性、抗热聚沉能力等,研究环化处理对脂肪酶的影响。结果:纯化后cTLL与rTLL的比活基本相当;70℃下处理180 min,cTLL大部分可保持可溶状态,相同条件下线性蛋白TLL几乎完全沉淀或降低;环化后的脂肪酶cTLL粒径均一、分子量分布均匀,具有更稳定的蛋白特性。结论:Butelase 1可有效地环化梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶,环化后的蛋白酶酶活未改变,热稳定性大大提高,蛋白特性更好。
展开更多
关键词
环化
疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶
butelase
1
稳定性
下载PDF
职称材料
题名
利用NusA促溶标签原核表达Butelase 1蛋白
被引量：
1
1
作者
刘起涛
朱彦策
王伟杰
陈佩格
孙士平
郭婉莹
郑悦亭
机构
河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室
河南省洛阳市疾病预防控制中心
出处
《江西农业学报》
CAS
2017年第3期115-119,共5页
基金
转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX0801015B)
河南省教育厅基础与前沿技术研究项目(152300410070)
河南省高等学校重点科研项目计划(14A230010)
文摘
为获得可溶性Butelase 1蛋白,将Butelase 1基因插入到带有NusA促溶标签的原核表达载体上,将重组质粒转化至大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和层析法纯化表达的可溶性蛋白,用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达情况。酶切和测序结果证实p ET21b-His6-NusA-Butelase 1原核表达载体构建成功。SDS-PAGE分析结果表明诱导后表达的融合蛋白大小为94.9 k D,主要为可溶性表达,部分为包涵体表达。Western blot检测结果显示,纯化得到的His6-NusA-Butelase 1融合蛋白用抗His6-Tag抗体鉴定时为特异性表达。
关键词
butelase
1
促溶标签
NUSA
表达分析
Keywords
butelase
1
Solubility-enhancing
tag
Nus
A
Expression
analysis
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
从药物多肽到蛋白质全合成:酶促拼接的方法原理与前沿应用
被引量：
1
2
作者
杨新宇
朱彤
李瑞峰
吴边
机构
中国科学院微生物研究所
中国科学院大学生命科学学院
出处
《合成生物学》
CSCD
2021年第1期33-45,共13页
基金
国家重点研发计划(2018YFA0901600)
国家自然科学基金优秀青年科学基金(31822002)
国家自然科学基金面上项目(31870055)。
文摘
蛋白质是生命活动的基础功能元件,其化学合成与定点修饰已成为合成生物学领域探索复杂生物大分子“结构-功能”关系的重要前沿方向。近年来,以多肽固相合成与特异性拼接为核心的蛋白质合成和修饰技术蓬勃发展,打破了生命合成系统仅能使用天然及少数非天然氨基酸的瓶颈,为制备含有数百个氨基酸残基的非天然蛋白质提供了技术平台,让原子水平的蛋白质人工设计成为现实。作为一类广受关注的多肽拼接策略,基于天然或人工改造多肽连接酶的技术方法不仅在基础研究领域拓展了人们对蛋白质这一生命核心元件的理解,还在工业领域崭露头角,被应用于多种多肽类药物的生产。针对蛋白质合成领域中酶促多肽拼接技术平台,本文介绍了Sortase A转肽酶、Butelase 1转肽酶以及Subtilisin人工连接酶的来源以及催化过程,探讨了各自的优势以及局限性,并综述了三种酶在蛋白质修饰、蛋白质合成、多肽药物环化等方面的应用。通过计算机辅助设计、定向进化等技术对转肽酶、连接酶进行改造来提升其在底物谱、催化活性等方面的特性,将化学方法与酶促方法联用来建立多样的生物大分子从头设计与合成路线是目前的主要发展趋势。
关键词
蛋白质合成
蛋白质定点修饰
Sortase
A转肽酶
butelase
1
转肽酶
Subtilisin人工连接酶
Keywords
protein
synthesis
protein
modification
Sortase
A
butelase
1
Subtilisin-derived
ligases
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
下载PDF
职称材料
题名
末端环化疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的稳定性
3
作者
宋文
武霞霞
娄海伟
方惠敏
机构
河南工业大学食品粮油学院
郑州大学生命科学学院
出处
《食品与机械》
北大核心
2022年第8期40-43,54,共5页
基金
国家自然科学基金项目(编号:31501060)。
文摘
目的:获取活性高、稳定性好的工业脂肪酶。方法:利用哺乳动物细胞和大肠杆菌分别表达Butelase 1和梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL),通过Flag亲和层析和His亲和层析柱进行纯化;通过纯化的Butelase 1连接酶对重组TLL(rTLL)进行末端连接,以形成首尾相连的环状TLL(cTLL),通过测定rTLL和cTLL活性、热稳定性、蛋白酶稳定性、抗热聚沉能力等,研究环化处理对脂肪酶的影响。结果:纯化后cTLL与rTLL的比活基本相当;70℃下处理180 min,cTLL大部分可保持可溶状态,相同条件下线性蛋白TLL几乎完全沉淀或降低;环化后的脂肪酶cTLL粒径均一、分子量分布均匀,具有更稳定的蛋白特性。结论:Butelase 1可有效地环化梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶,环化后的蛋白酶酶活未改变,热稳定性大大提高,蛋白特性更好。
关键词
环化
疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶
butelase
1
稳定性
Keywords
cyclization
protein
Thermomyces
lanuginosus
lipase
butelase
1
stability
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用NusA促溶标签原核表达Butelase 1蛋白
刘起涛
朱彦策
王伟杰
陈佩格
孙士平
郭婉莹
郑悦亭
《江西农业学报》
CAS
2017
1
下载PDF
职称材料
2
从药物多肽到蛋白质全合成:酶促拼接的方法原理与前沿应用
杨新宇
朱彤
李瑞峰
吴边
《合成生物学》
CSCD
2021
1
下载PDF
职称材料
3
末端环化疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的稳定性
宋文
武霞霞
娄海伟
方惠敏
《食品与机械》
北大核心
2022
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部
