目的基于ITS序列建立北柴胡掺伪藏柴胡的分子鉴别方法。方法收集北柴胡、藏柴胡样品,提取基因组DNA,用ITS通用引物进行测序,通过DNAMAN软件进行序列比对,根据藏柴胡特异性位点用Primer Premier 5.0软件设计特异性鉴别引物,并优化特异性...目的基于ITS序列建立北柴胡掺伪藏柴胡的分子鉴别方法。方法收集北柴胡、藏柴胡样品,提取基因组DNA,用ITS通用引物进行测序,通过DNAMAN软件进行序列比对,根据藏柴胡特异性位点用Primer Premier 5.0软件设计特异性鉴别引物,并优化特异性PCR反应条件。结果在位点特异性PCR反应条件考查中,退火温度为65℃(20 s)、引物量为0.4μL、循环次数为30时特异性最佳,该方法适用于不同DNA聚合酶且重现性较好,掺伪检出限为1%。结论该研究设计的位点特异性引物在一定条件下的PCR反应中,仅藏柴胡可以扩增出425 bp大小的条带,北柴胡则不能扩增出条带,能够鉴别北柴胡中掺伪藏柴胡。展开更多
文摘目的基于ITS序列建立北柴胡掺伪藏柴胡的分子鉴别方法。方法收集北柴胡、藏柴胡样品,提取基因组DNA,用ITS通用引物进行测序,通过DNAMAN软件进行序列比对,根据藏柴胡特异性位点用Primer Premier 5.0软件设计特异性鉴别引物,并优化特异性PCR反应条件。结果在位点特异性PCR反应条件考查中,退火温度为65℃(20 s)、引物量为0.4μL、循环次数为30时特异性最佳,该方法适用于不同DNA聚合酶且重现性较好,掺伪检出限为1%。结论该研究设计的位点特异性引物在一定条件下的PCR反应中,仅藏柴胡可以扩增出425 bp大小的条带,北柴胡则不能扩增出条带,能够鉴别北柴胡中掺伪藏柴胡。