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体外诱导可分解草酸成人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的研究
1
作者 朱玮 袁坚 +2 位作者 雷鸣 李舒珏 刘向崇 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1203-1206,共4页
目的体外培养并转染了产甲酸草酸杆菌（Ox-F）草酸分解基因h℃和oxe的成人骨髓间充质干细胞（hMSCs—fre—oxe），并诱导其向肝细胞分化。方法体外培养转染了草酸分解基因的P4代hMSCs，并通过含40μg/L肝细胞生长因子（HGF）＋10μg／L... 目的体外培养并转染了产甲酸草酸杆菌（Ox-F）草酸分解基因h℃和oxe的成人骨髓间充质干细胞（hMSCs—fre—oxe），并诱导其向肝细胞分化。方法体外培养转染了草酸分解基因的P4代hMSCs，并通过含40μg/L肝细胞生长因子（HGF）＋10μg／L胰岛素样生长因子（FGF）-4所组成的培养液诱导其向肝细胞分化。在分化过程中通过显微镜观察分化细胞形态变化。以实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）、Westernblot技术和免疫细胞化学技术检测细胞内肝细胞特异标志物甲胎蛋白（AFP）、白蛋白（ALB）、细胞角蛋白-18（CK-18）和目的基因frc、OXC及其产物融合蛋白mye—FCOAT、flag—OCOAD的表达。成熟肝细胞L-02和转染了空病毒载体的hMSCs（hMSCs．vector）分别作为阳性对照组和阴性对照组。结果可分解草酸的hMSCs—frc—OXC在体外可成功培养，细胞经上述培养液诱导后，细胞形态逐渐变短，变成多角形。Real—timePCR可检测在诱导组细胞中AFP、ALB、CK—18和草酸分解基因frc、OXe表达，而未经诱导细胞组AFP、ALB、CK-18则未表达，未转染目的基因的细胞组fre、oxe未见表达。免疫细胞化学检测诱导28d后细胞可表达ALB，未经诱导细胞组ALB表达呈阴性。Westernblot技术检测诱导第14、28天细胞中AFP、CK-18表达较未诱导组明显增加（P〈0．05），与成熟肝细胞相似，并表达myc-FCOAT、flag—OCOAD，而未转染目的基因细胞组表达呈阴性。结论含有草酸分解基因的hMSCs—frc—OXC体外通过一定条件诱导可以向肝细胞方向分化，经诱导分化后细胞仍可成功表达frc和oxe基因及其产物。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞分化 肝细胞 frc基因 oxc基因
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二膦酸盐对糖皮质激素诱导的骨质疏松过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响
2
作者 秦玉幸 张晓 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期743-745,共3页
目的 探讨二膦酸盐对糖皮质激素诱导的骨质疏松过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达的影响.方法 ①22例系统性红斑狼疮（SLE）患者,治疗组9例（标准剂量激素＋阿仑膦酸钠）,对照组13例（标准剂量激素）,24周后行骨髓穿刺术,检... 目的 探讨二膦酸盐对糖皮质激素诱导的骨质疏松过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达的影响.方法 ①22例系统性红斑狼疮（SLE）患者,治疗组9例（标准剂量激素＋阿仑膦酸钠）,对照组13例（标准剂量激素）,24周后行骨髓穿刺术,检测免疫组织化学PPARγ平均积分吸光度.②采用原代人骨髓基质干细胞（hMSCs）培养,模拟髓内骨髓基质干细胞分化为脂肪细胞的过程,在相同条件下,分为成脂诱导组、成脂诱导＋10-5mol/L二膦酸盐组（高剂量组）、成脂诱导＋10-7mol/L二膦酸盐组（中剂量组）、成脂诱导＋10-9mol/L二膦酸盐组（低剂量组）干预诱导成脂过程,6～9 d后进行油红0染色、异丙醇萃取油红染料,515 nm测定各组吸光度（A）来反映成脂程度,定量聚合酶链反应（PCR）测定各组PPARγmRNA的表达水平.采用t检验和单因素方差分析法进行数据分析.结果 二膦酸盐治疗组免疫组织化学PPARγ平均积分吸光度较对照组减少（P＜0.05）;在诱导培养7 d后,成脂诱导组的A与低剂量组差异无统计学意义（P值0.167）,高剂量组、中剂量组A与成脂诱导组之间差异有统计学意义（P值分别为0、0.041）.定量PCR结果显示：高剂量组、中剂量组PPARγ mRNA的表达低于成脂诱导组（P值分别为0、0.01）,低剂量组与成脂诱导组之间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 有效浓度的二膦酸盐可以抑制PPARγ的表达,从而抑制hMSCs向脂肪细胞分化,抑制糖皮质激素诱导的骨质疏松症. 展开更多
关键词 免疫组织化学 人骨髓基质干细胞 二膦酸盐类 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ
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