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重组肉毒毒素B重链结合区片段的表达、纯化及其抗原性分析
1
作者 谢亮 王俊虹 +2 位作者 康琳 高姗 王景林 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2006年第2期127-130,共4页
目的:克隆、表达并纯化肉毒毒素B重链结合区C端(BoNT/B Hc)保护性抗原片段。方法:采用PCR扩增BoNT/B Hc基因,插入表达载体pET-H is,转化E.coliBL21(pLys)细胞获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用W estern印迹和... 目的:克隆、表达并纯化肉毒毒素B重链结合区C端(BoNT/B Hc)保护性抗原片段。方法:采用PCR扩增BoNT/B Hc基因,插入表达载体pET-H is,转化E.coliBL21(pLys)细胞获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用W estern印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/B Hc的抗原性。结果:表达工程菌BL21/pETH is-BHc于37℃经0.2 mmol/L IPTG诱导6 h后,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的24%。经过N i-NTA亲和层析柱一步纯化,rBoNT/B Hc的纯度可达96%以上。W estern印迹和间接ELISA均显示其具有良好的抗原性。结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/B Hc片段,并可被抗天然BoNT/B马血清所识别,为建立快速检测方法和制备相应的抗体及亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 肉毒毒素b 克隆 表达 纯化 抗原性
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