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牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定
被引量：
3
1
作者
彭统全
邵建伟
+4 位作者
张润祥
曹翀
马波
高明春
王君伟
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期124-129,共6页
克隆牛α0干扰素(BoIFN-α0)成熟肽基因,使其在真核细胞中表达,并研究其表达蛋白质的活性。通过PCR方法扩增得到BoIFN-α0成熟肽基因,然后将其连接到含分泌信号肽序列的Pichia pastoris表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-BoIFN-...
克隆牛α0干扰素(BoIFN-α0)成熟肽基因,使其在真核细胞中表达,并研究其表达蛋白质的活性。通过PCR方法扩增得到BoIFN-α0成熟肽基因,然后将其连接到含分泌信号肽序列的Pichia pastoris表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-BoIFN-α0,重组质粒经PmeⅠ酶切线性化后电转化宿主菌GS115。转化子经100μg·mL-1 zeocinTM筛选和PCR鉴定,阳性重组菌经甲醇诱导后实现了BoIFN-α0在毕赤酵母系统中的分泌表达。结果表明:SDS-PAGE和Western blot结果显示表达产物相对分子质量约为18和21ku,推测表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制试验结果表明,重组BoIFN-α0具有较高的抗病毒活性,达到5.72×106 U·mg-1。这些研究结果为牛IFN-α的更深层次应用奠定了基础。
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关键词
牛
boifn
-
α
0亚型
巴斯德毕赤酵母
分泌表达
抗病毒活性
下载PDF
职称材料
重组牛α干扰素的分泌表达及抗病毒活性分析
被引量：
2
2
作者
刘增素
汪昭睿
+8 位作者
王雪莹
姜艳平
崔文
王丽
乔薪瑗
周晗
徐义刚
李一经
唐丽杰
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第4期1449-1456,共8页
本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素(BoIFN-α)的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性,对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切...
本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素(BoIFN-α)的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性,对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切,将胶回收产物进行连接后,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,提取阳性质粒电转化乳酸乳球菌感受态细胞,用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达蛋白进行分析和鉴定,同时将重组乳酸乳球菌培养28 h后取上清用PEG20000浓缩10倍左右,进行体外抗病毒试验。结果显示,试验成功构建了重组乳酸乳球菌pAMJ399-BoIFN-α/MG1363,重组菌上清和沉淀均出现约20 ku的目的条带,表明重组蛋白以分泌的形式同时存在于培养液的上清和沉淀中。浓缩后的重组BoIFN-α(rBoIFN-α)上清与水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)同时作用,用MDBK/VSV系统以微量细胞病变抑制法测定rBoIFN-α的效价为1.02×106 U/L;通过Alamer Blue法分析可知,加入rBoIFN-α后对细胞的活性影响较小;间接免疫荧光试验可见加入rBoIFN-α后细胞无绿色荧光,说明rBoIFN-α有良好的抗病毒效果;实时荧光定量PCR结果进一步证实rBoIFN-α具有一定的抗病毒效果。本试验构建了能分泌表达rBoIFN-α的乳酸乳球菌,通过一系列的体外抗病毒试验证明rBoIFN-α具有良好的抗病毒活性,试验结果为rBoIFN-α作为抗病毒药物、免疫增强剂的开发、肽类用药及临床应用提供新途径。
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关键词
牛
α
干扰素(
boifn
-
α
)
乳酸乳球菌
分泌表达
抗病毒活性
下载PDF
职称材料
题名
牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定
被引量：
3
1
作者
彭统全
邵建伟
张润祥
曹翀
马波
高明春
王君伟
机构
东北农业大学动物医学学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期124-129,共6页
基金
现代农业(奶牛)产业技术体系(CARS-37)
国家科技支撑计划项目(2012BAD12B05)
+1 种基金
国家科技支撑计划子课题(2012BAD12B03-3)
黑龙江省科技攻关项目(GA09B302)
文摘
克隆牛α0干扰素(BoIFN-α0)成熟肽基因,使其在真核细胞中表达,并研究其表达蛋白质的活性。通过PCR方法扩增得到BoIFN-α0成熟肽基因,然后将其连接到含分泌信号肽序列的Pichia pastoris表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-BoIFN-α0,重组质粒经PmeⅠ酶切线性化后电转化宿主菌GS115。转化子经100μg·mL-1 zeocinTM筛选和PCR鉴定,阳性重组菌经甲醇诱导后实现了BoIFN-α0在毕赤酵母系统中的分泌表达。结果表明:SDS-PAGE和Western blot结果显示表达产物相对分子质量约为18和21ku,推测表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制试验结果表明,重组BoIFN-α0具有较高的抗病毒活性,达到5.72×106 U·mg-1。这些研究结果为牛IFN-α的更深层次应用奠定了基础。
关键词
牛
boifn
-
α
0亚型
巴斯德毕赤酵母
分泌表达
抗病毒活性
Keywords
boifn
-
α
0
Pichia pastoris
secretory expression
antiviral activity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
重组牛α干扰素的分泌表达及抗病毒活性分析
被引量：
2
2
作者
刘增素
汪昭睿
王雪莹
姜艳平
崔文
王丽
乔薪瑗
周晗
徐义刚
李一经
唐丽杰
机构
东北农业大学动物医学学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第4期1449-1456,共8页
基金
“十三五”国家重点研发计划(2017YFD0501000)。
文摘
本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素(BoIFN-α)的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性,对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切,将胶回收产物进行连接后,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,提取阳性质粒电转化乳酸乳球菌感受态细胞,用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达蛋白进行分析和鉴定,同时将重组乳酸乳球菌培养28 h后取上清用PEG20000浓缩10倍左右,进行体外抗病毒试验。结果显示,试验成功构建了重组乳酸乳球菌pAMJ399-BoIFN-α/MG1363,重组菌上清和沉淀均出现约20 ku的目的条带,表明重组蛋白以分泌的形式同时存在于培养液的上清和沉淀中。浓缩后的重组BoIFN-α(rBoIFN-α)上清与水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)同时作用,用MDBK/VSV系统以微量细胞病变抑制法测定rBoIFN-α的效价为1.02×106 U/L;通过Alamer Blue法分析可知,加入rBoIFN-α后对细胞的活性影响较小;间接免疫荧光试验可见加入rBoIFN-α后细胞无绿色荧光,说明rBoIFN-α有良好的抗病毒效果;实时荧光定量PCR结果进一步证实rBoIFN-α具有一定的抗病毒效果。本试验构建了能分泌表达rBoIFN-α的乳酸乳球菌,通过一系列的体外抗病毒试验证明rBoIFN-α具有良好的抗病毒活性,试验结果为rBoIFN-α作为抗病毒药物、免疫增强剂的开发、肽类用药及临床应用提供新途径。
关键词
牛
α
干扰素(
boifn
-
α
)
乳酸乳球菌
分泌表达
抗病毒活性
Keywords
boifn
-
α
Lactococcus lactis
secretory expression
antiviral activity
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定
彭统全
邵建伟
张润祥
曹翀
马波
高明春
王君伟
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
下载PDF
职称材料
2
重组牛α干扰素的分泌表达及抗病毒活性分析
刘增素
汪昭睿
王雪莹
姜艳平
崔文
王丽
乔薪瑗
周晗
徐义刚
李一经
唐丽杰
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021
2
下载PDF
职称材料
已选择
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